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文档简介

《微生物学实验》基础医学院显微形态实验室—微生物学实验室实验四、中药蜜丸的微生检查

实验内容一）、蜜丸细菌总数测定二）、蜜丸霉菌总数测定三）、蜜丸大肠杆菌测定二、实验目的掌握蜜丸中细菌及霉菌总数的检测方法，大肠杆菌的测定方法，树立无菌操作的观念。三、实验材料中药蜜丸（六味地黄丸、山楂丸），研钵、天平、称量纸、100ml量筒、150ml生理盐水、10ml具塞刻度试管、100ml乳糖胆盐增菌培养液、1ml、10ml移液管各2支、吸耳球、接种环、酒精灯、火柴、记号笔、伊红美兰琼脂平板、普通琼脂培养基、（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）、虎红马丁培养基三、实验方法一）、蜜丸细菌总数测定二）、蜜丸霉菌总数测定1、无菌条件下称随机称取10g蜜丸置研钵中逐渐加入100ml生理盐水研磨为1：10药液，分别量取9ml生理盐水置10ml具塞刻度试管中，其中一支加入1：10药液1ml后稀释为1：100后再取1ml加入9ml生理盐水具塞刻度试管中药物稀释为1：1000。2、取10个干烤后玻璃平皿，每2个分别加入1：10，1：100，1：1000药液各1ml共6个，然后加入50℃普通琼脂培养基、（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）15ml做细菌培养；每2个分别加入1：10，1：100，药液各1ml共4个，然后加入50℃虎红马丁培养基15ml做霉菌培养，并立刻转动平板使药液与培养基充分混匀。10个平板置37℃培养箱培养24h后并记数。每一个稀释度的3个平板的菌落的均数。3、选取菌落平均值在30-300之间的平板作为菌落总数的测定范围，将数得的菌落数乘以相应的稀释度得到每克检测蜜丸中细菌总数。选取霉菌菌落平均值在5-50之间的平板作为菌落总数的测定范围，将数得的菌落数乘以相应的稀释度得到每克检测蜜丸中霉菌总数。

稀释度的选择若只有一个稀释度，菌落均数在30-300个间，乘以稀释倍数报告。若两个稀释度，菌落均数在30-300个间，则求出每克均数之比，比值小于2报告均数，若大于2则报告较多的数字。若所有的稀释度的均数均大于300个，取稀释度最高的菌落均数乘以稀释倍数报告。若所有的稀释度的均数均小于30个，取稀释度最低的菌落均数乘以稀释倍数报告。若所有的稀释度的均数不在30-300个间，一个稀释度大于300个，相邻另一个稀释度小于30，则以接近30-300个菌落均数乘以稀释倍数报告。细菌计数结果及报告方法

例次菌落均数比值菌落总数/g或/ml报告方式/g或/ml稀释倍数10-110-210-31136516420-164001600022760295461.6377503800032890271602.227100270004不可计4650513-513000510000527115-2702706不可计30512-3050031000三）、蜜丸大肠杆菌测定

1.无菌条件下称随机称取10g蜜丸置研钵中逐渐加入100ml生理盐水研磨为1：10药液,取10ml接种

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