1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第1页
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第2页
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第3页
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第4页
1-血清免疫球蛋白IgG提取1_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

盐析法纯化血清中IgG类抗体实验目的掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法二、实验原理蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。透析法脱盐:

透析是将含有小分子杂质的蛋白质溶液装在半透膜（玻璃纸、火绵纸等）制的透析袋里放在透析缓冲液中进行，可不断更换缓冲液，直至杂质被除去四、操作步骤室温静置30min,4℃离心，4000rpm,10min上清液（β球蛋白）沉淀为γ球蛋白紫外分光光度计测定蛋白含量沉淀溶于1mL生理盐水移入透析袋，充分透析，沉淀溶于1mL生理盐水,滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL弃去上清液（含清蛋白）弃去上清液（α、β球蛋白）沉淀溶于1mL生理盐水,滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL室温静置30min,4℃离心，4000rpm,10min1mL血清＋1mL生理盐水滴加饱和硫酸铵溶液2mL

室温静置30min,4℃离心，4000rpm,10min五、结果判断

分别测OD280和OD260处的光密度值，按照公式计算蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280—0.74OD260IgG正常参考值

：8．00～16．00g／L效价可用免疫双扩散试验判断；特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察；浓度也可通过免疫浊度法等检测。六、注意事项盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。温度：一般可在室温下进行，某些对热特别敏感的酶，则宜低温。脱盐：透析时间较长，常在低温下进行，并加入防腐剂避免变性或微生物的污染。饱和硫酸铵溶液的滴加方式：逐滴，搅拌盐析后放置时间、离心操作的速度、时间透析袋的使用七、方法学评价硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓冲能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化的

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 中学教育

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论