肉豆妮挥发油的抗急性心肌梗死作用研究

肉豆妮挥发油的抗急性心肌梗死作用研究

肉豆冠是肉豆冠科植物的一种干燥种子。数千年来被中医临床广泛用于治疗腹泻和呕吐等胃肠道疾病。以往研究表明,其种仁中含有挥发油、脂肪油及蛋白质等多种成分。其中挥发油中主要包括肉豆蔻醚(Myristicin),松油烯-4-醇(Terpinen-4-ol),γ-松油烯(γ-Terpinen),4-蒈烯(4-Carene)以及α,β-蒎烯(αandβ-pinene)等。肉豆蔻具有镇痛、止泻、抗病毒、改善性功能、改善记忆、抗凝血以及保肝等作用。在本研究中,笔者主要进行了肉豆蔻挥发油的急性毒性实验、对阈下剂量戊巴比妥钠催眠的协同作用、抗士的宁惊厥和抗心肌缺血等方面的实验研究。1实验材料1.1这些药物的来源肉豆蔻购于沈阳市药材市场,保存于室温下,并防尘避光。1.2挥发油的提取挥发油的制备由辽宁中医药大学药学院袁子民博士完成。采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,1000g肉豆蔻可获得60mL挥发油。将挥发油以芒硝脱水后4℃避光保存,实验中以2%吐温-80稀释成不同浓度备用。1.3小鼠或农民本实验所用实验动物均来源于辽宁中医药大学实验动物中心。急性毒性实验、催眠实验和抗惊厥实验中采用体重18～22g昆明种小鼠,雌雄各半。抗心肌缺血实验中采用3月龄体重200～250gWistar大鼠,雌雄各半。动物饲养于标准实验条件下:12h光/暗循环,室温(20±2)℃,自由饮食饮水。2方法2.1小鼠经口给予挥发油前药和学采用昆明种小鼠,于实验前禁食一晚,随机分成6组(每组20只,雌雄各半)。给药组分为5组,分别灌胃给予3.60～14.93g生药/kg的挥发油,对照组给予20mL/kg生理盐水。给药后密切观察小鼠中毒症状和行为改变,观察记录至药后14天。采用Bliss法计算半数致死量。2.2肌肉注射地西常用配方以翻正反射消失持续时间超过1min作为动物进入睡眠的判断标准,预实验结果表明,30mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射可诱导小鼠进入睡眠状态,故本实验中确定25mg/kg为催眠阈下剂量。将小鼠随机分为5组(每组12只,雌雄各半),给药组分别给予本品1.07、0.54、0.27g生药/kg(p.o.)。阳性对照组肌肉注射地西泮2mg/kg,对照组给予生理盐水(p.o.)20mL/kg。于给药后30min腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg并单独观察,计算翻正反射消失百分率。2.3小鼠惊厥的观察小鼠分组及给药情况同2.2。给药30min后,腹腔注射士的宁1.5mg/kg,将动物单独置于笼内观察30min,记录小鼠惊厥的潜伏期和发生率、死亡潜伏期和存活百分率。2.4各组大鼠心肌梗死,未结条件表达模型本研究采用Olivetti报道的方法制作AMI模型。雄性大鼠随机分为6组,每组8只,以30mg/kg剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后开胸,使用6-0聚丙烯缝合线结扎冠状动脉左前降支,造成心肌梗死模型。假手术组只穿线,不结扎。结扎后5min通过十二指肠给予肉豆蔻挥发油1.33、0.67、0.33g生药/kg,阳性对照组十二指肠给予地尔硫卓16mg/kg,模型组及假手术组经十二指肠给予生理盐水20mL/kg。以ST段抬高幅度做为评价心肌梗死程度的指标,分别记录结扎前及结扎0、5、15、30、45、60、90、120、180min的心电图。结扎后180min处死大鼠,取下心脏,于-20℃冷冻15min,在结扎点以下将心脏切成5等份,NBT染色,采用图像分析软件Image-ProPlus计算梗死区面积。2.5统计方法全部实验结果用x¯±sx¯±s表示,采用t-检验,P<0.05具有统计学意义。3结果3.1小鼠呼吸急性毒性ld50小鼠灌胃给予肉豆蔻挥发油的LD50为7.67g生药/kg(95%CL:6.34～9.00g生药/kg)。大多数中毒小鼠做环形运动,呼吸急促,步态蹒跚。死亡大多发生于给药后4h内,雌性和雄性小鼠死亡率无明显差异。3.2阈值下使用苯巴比妥钠两种催眠药物的联合作用小鼠灌胃给予肉豆蔻挥发油1.07g生药/kg,可使阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠翻正反射消失百分率明显提高(见表1)。3.3药物对士的宁诱导的惊厥小鼠灌胃给予肉豆蔻挥发油1.07、0.27、0.54g生药/kg,对士的宁诱导的惊厥潜伏期和发生率均无明显影响,但1.07g生药/kg可使动物死亡潜伏期明显延长、存活率明显增加(见表2)。3.4g对大鼠心肌梗死面积的影响肉豆蔻挥发油1.33、0.67、0.33g生药/kg对大鼠心肌梗死面积均无明显的影响,1.07g生药/kg组动物在心电图上表现出一过性的ST段下降趋势,但与模型对照组相比无显著性差异(见表3)。4肉豆不同的加量体作用机理本研究中,腹腔注射25mg/kg戊巴比妥钠不能诱导小鼠进入睡眠,在给予戊巴比妥钠前30min给予肉豆蔻挥发油,可表现出一定的催眠协同作用,且具有剂量依赖性。在士的宁诱导小鼠惊厥实验中观察到了类似的作用趋势,肉豆蔻挥发油可使动物死亡潜伏期延长且存活率增加。上述结果表明肉豆蔻挥发油具有弱的中枢抑制作用。有报道称,灌胃给予肉豆蔻50%乙醇提取物500mg/kg,受试动物未见死亡,在该剂量下可观察到肉豆蔻的增强性功能作用,而未见其他行为学改变。笔者的研究发现,肉豆蔻挥发油具有明显的毒性(主要表现为中枢神经系统毒性),提示肉豆蔻中主要的毒性成分可能是挥发性成分。据报道,兴奋GABA受体可抑制豚鼠回肠肌间神经丛-纵行肌内胆碱能神经诱发的肌肉收缩。另有报道称,肉豆蔻中含有的三肉豆蔻酸甘油酯具有一定的抗焦虑作用,其作用机理可能与5-羟色胺和GABA系统有关。因此笔者认为,对GABA受体的作用可能是肉豆蔻抗腹泻和中枢抑制作用的共同机理,此推论尚有待进行更为深入的研究加以证实。肉豆蔻在