葛根醛对酵母发热的影响

葛根醛对酵母发热的影响

桂枝汤是“伤寒论”的第一处方药，也是中医传统应用的著名方剂。用于外感疾病的早期治疗，具有解热、抗炎、镇静、调节免疫等功效。长期以来,本课题组对桂枝汤功效的现代研究发现,其具有较好的解热抗炎作用。进一步分离提取出的解热有效部位A(Fr.A),药理实验证明Fr.A可通过影响发热信号传导通路上关键酶的活性和水平,对体温有双向调节作用。化学研究表明,Fr.A中主要有效成分为挥发油,桂皮醛作为从桂枝汤Fr.A分离出的化学单体,由气(相层析)-质(谱)联用仪(GC-MS)结果可知其在Fr.A组分中占62.51%。国内外研究报道,桂皮醛具有抗肿瘤、抗菌、抗突变及心血管等方面的药理作用,且毒副作用低。本实验主要考察了桂皮醛在解热、镇痛及抗炎方面的作用,以期验证桂皮醛为Fr.A中主要有效成分。1材料和方法1.1匹林肠溶片、鲜酵母和马利克氏原螯虾桂皮醛(化学纯,北京旭东化工厂,批号:000313);阿司匹林肠溶片(陕西白鹿制药股份公司,批号:20050521);鲜酵母(河北马利食品有限公司,批号:060211);伊文思兰(Serva进口分装);冰醋酸、二甲苯均为国产分析纯。1.2动物合格证:scxk-军2002-4001Wistar大鼠,♂,体重160～180g,军事医学科学院实验动物中心提供,动物合格证编号:SCXK-(军)2002-0001;ICR小鼠,体重16～18g,♀♂兼用,中国科学院遗传与发育生物学研究所提供,动物合格证编号:SCXK(京)2006-0006。1.3仪器、检测方法WMY-01型数字温度计(上海医用仪表厂);GJ-8420型热板测痛仪(宁海白石电子医药仪器厂);ZS-3型半自动生化分析仪(北京中生生物工程高级技术公司);BP121S型电子天平(Sartorius);SUPERT21型离心机(SORVALL)。1.4模型分组、给药大鼠于实验室(室温为22℃±1℃)适应3d,每日适应性测肛温2次,连续2d。选取基础体温(37.5±0.5)℃的大鼠,背部皮下注射20%鲜酵母悬液(10ml·kg-1)。造模3.5h后选取体温升高1℃以上者,随机分为5组:模型对照组、阿司匹林组、桂皮醛小剂量组(100mg·kg-1)、桂皮醛中剂量组(200mg·kg-1)、桂皮醛大剂量组(400mg·kg-1),各组大鼠以10ml·kg-1等容积灌胃给药,1h后重复给药1次,剂量同前。测定第1次灌胃给药后1h和2h体温,计算体温升高差值△T(药后体温值-基础体温值)。1.5桂枝醇的镇痛药1.5.1给药前痛行为检测取♀小鼠,于正式实验前用热板测痛仪(温度为55℃±0.5℃)进行筛选,记录自放入测痛仪至出现舔后足所需时间(s),挑选5～30s反应稳定、不跳跃的小鼠供实验用,以此作为给药前痛阈值。将预选合格小鼠随机分成5组:分组同1.4,每日以20ml·kg-1等容积灌胃给药1次,共4d。于末次给药后1、2、3h分别同法测定各鼠痛阈值,计算痛阈延长时间和痛阈提高百分率(见下式),比较受试药间的镇痛效应。痛阈提高百分率(%)=(给药后痛阈值-给药前痛阈值)/给药前痛阈值×100%1.5.2扭体抑制率测定取小鼠60只,♀♂各半,随机分为5组,分组及给药方法、剂量、时间同“1.5.1”。于末次给药后1h,各组小鼠均腹腔注射1%醋酸10ml·kg-1,记录注射醋酸后5～20min内小鼠出现扭体反应的次数,按下式计算扭体抑制率(%)。扭体抑制率(%)=(对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100%1.6桂枝醇的抗炎作用1.6.1毛细管透气性抑制率测定取小鼠60只,♀♂各半,随机分为5组,分组及给药方法、剂量、时间同“1.5.1”。于末次给药后1h尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液20ml·kg-1,同时腹腔注射1%冰醋10ml·kg-1,20min后脱颈椎处死动物,用生理盐水冲洗腹腔,吸管收集腹腔液,离心取上清于590nm处测定吸光度值(A)。按公式计算小鼠腹腔毛细血管通透性抑制率。腹腔毛细血管通透性抑制率(%)=(正常对照组腹腔液A590-给药组腹腔液A590)/正常对照组腹腔液A590×100%1.6.2耳道水肿度的测定取小鼠60只,♀♂各半,随机均分5组,分组及给药方法、剂量、时间同“1.5.1”。于末次给药后1h,各组小鼠右耳廓两面均匀涂抹二甲苯(40ml/只),以左耳作对照。1h后脱颈椎处死小鼠,沿耳廓基线剪下两耳,用9mm打孔器分别在两耳对称部位打下圆形耳片,电子分析天平称重,计算肿胀度(以每鼠左右耳片重量之差平均值来表示)和肿胀抑制率(见下式)。肿胀抑制率(%)=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100%1.7分析统计学处理实验数据均用均数±标准差(ˉx±s)表示,多组间均值比较采用ANOVA分析,两组均数显著性比较采用q检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1两种对照组的比较结果桂皮醛大、中剂量组在给药后1、2h与模型对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),表明桂皮醛有明显抑制酵母诱导发热的作用(表1)。与模型对照组比较cP<0.012.2h作用的做由表2结果可以看出,桂皮醛各剂量组给药后1h作用最明显。与模型对照组比较,桂皮醛大、中剂量组1h痛阈值明显延长(P<0.05),提示桂皮醛大、中剂量可显著提高小鼠热板法的痛阈值。2.3桂枝醇对大鼠扭转反应的影响桂皮醛大、中剂量显著低于模型对照组(P<0.01),提示该化合物可明显抑制醋酸所致小鼠扭体反应(表3)。2.4最佳模型分析桂皮醛各剂量组对小鼠腹腔液中伊文思兰浓度较模型对照组明显减少(P<0.01),提示桂皮醛对醋酸所致毛细血管通透性的增加有明显的抑制作用,但弱于阿司匹林(表4)。2.5二甲苯对大鼠耳廓肿胀的影响由表5可见,桂皮醛各剂量组均能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀作用,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。3皮醛的作用特性本实验结果显示,桂皮醛对酵母引起的大鼠发热有显著解热作用,明显提高小鼠热板法的痛阈值,抑制醋酸所致的小鼠扭体反应,并显著抑制醋酸所致毛细血管通透性增高和二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,其中以大、中剂量作用为优。由此可见,桂皮醛具有较明显的解热、镇痛、抗炎作用。本课题组前期实验发现,桂皮醛可抑制大鼠脑微血管内皮细胞PGE2的合成和释放。PGE2作为中枢发热介质和外周炎性介质,桂皮醛外周镇痛作用及其解热、抗炎作用是否都与抑制PGE2合成有关,有待进一步研究。综上所述,此实验进一步证明