胃痛消痞方对功能性消化不良大鼠血清及胃窦、十二指肠组织gas和ss的影响

胃痛消痞方对功能性消化不良大鼠血清及胃窦、十二指肠组织gas和ss的影响

功能障碍（fd）是一种常见的功能脾胃疾病，其发病机制尚不完全清楚。迄今为止的研究表明，该病与胃肠运动障碍、内脏敏感性增加、胃肠激素和神经过渡化、主神经功能失衡、精神和社会因素、幽门螺杆菌（hp）感染、胃酸、激素、遗传因素和其他因素有关。其中,“胃肠运动障碍”和“胃肠激素和神经递质的改变”在发病过程中起重要作用。目前发现的胃肠激素有40余种,其中胃泌素(GAS)及生长抑素(SS)一直是研究热点。本实验研究胃痛消痞方对实验大鼠血清及胃肠组织中GAS及SS含量的影响。1材料和方法1.1动物、动物及试剂选择健康♂SPF级Wistar大鼠40只,12周,体质量180~220g,由中国医科大学实验动物中心提供,动物使用许可证号SYSK(辽)2003-0019。大鼠GAS及SS(ELISA法)试剂盒购自美国R&D公司;兔抗鼠GAS及SS购自北京博奥森生物技术有限公司;免疫组化染色试剂盒购自北京中杉金桥有限公司。1.2elisa法检测cas、ss的表达1.2.1分组及造模采用随机数字表法随机分为4组,即正常对照组、模型组、胃痛消痞方(中药)组,西沙必利(西药)组,每组10只。除正常对照组外,其余3组均采用改良夹尾刺激法制造FD肝郁脾虚模型,即每日用长海绵镊子钳夹大鼠尾巴末端1/3处,以令其尖叫挣扎但不破皮为度(如有抓伤破皮,则用0.5%碘伏消毒受伤部位,以防感染),使其暴怒并与其他大鼠撕打,每次持续30min,2次/d,连续刺激3周。造模期间,各组大鼠自由进食及饮水。大鼠出现躁动等紧张、焦虑反应,且进食量明显减少,即为造模成功。1.2.2药物制备及给药造模成功后,胃痛消痞方(柴胡、白芍、延胡索、炒枳实、炒砂仁、炒麦芽、焦山楂、炒鸡内金、党参、炙甘草、炒白术等中药组成),由中国医科大学附属盛京医院药局提供,每1mL合剂相当于原药材1.125g;西沙必利,上海沪源医药有限公司产品,5mg/片,临用时加蒸馏水制成混悬液,每1mL混悬液含西沙必利0.25mg。给药剂量依据人和鼠给药剂量换算公式dB=dARB/RA(WA/WB)1/3进行计算,中药组给予胃痛消痞方9g/kg,西药组给予西沙必利2mg/kg,模型组及正常对照组给予灌服等量蒸馏水,1次/d灌胃,持续3周。1.2.3取材在给药第21天,禁食不禁水12h,麻醉处死全部大鼠,心脏取血,约3mL/只,静置,4℃离心(3500r/min,20min),收集上清,置于-20℃冻存待测,用于ELISA法检测血清中GAS、SS的含量;每只大鼠取胃窦及十二指肠部组织约100mg,将标本投入4%多聚甲醛液中固定24h后,石蜡包埋。1.2.4ELISA法检测血清中GAS、SS的含量ELISA检测方法严格按照试剂盒说明进行操作。1.2.5免疫组化法检测胃组织中GAS、SS的表达各组动物于造模及用药结束前1d(第20天),禁食12h(不禁水、药),第21天处死后,立即剖腹,定位于距幽门胃端、肠端各0.5cm处,连同幽门一起取出。将标本投入4%多聚甲醛液中固定24h后,石蜡包埋,5μm连续切片。依照试剂盒行GAS及SS免疫组织化学染色。1.2.6统计学处理所测数据均以x¯±sx¯±s表示,应用SPSS16.0进行统计分析,多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,检验水准为0.05。2结果2.1各组大鼠血清及组织中gas表达比较各组大鼠血清及胃窦十二指肠组织中GAS含量见表1、图1和图2。结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠血清及组织中GAS含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组及西药组均可显著增高血清及组织GAS表达,但均低于正常对照组(P<0.05);中药治疗组GAS水平高于西药组(P<0.05)。2.2对大鼠血清及组织ss含量的影响各组大鼠血清及胃窦、十二指肠组织中SS含量见表2、图3和图4。结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠血清及组织中SS含量明显增高(P<0.05);与模型组比较,中药组及西药组血清及组织SS水平显著降低,且均低于正常对照组(P<0.05);中药组SS水平低于西药组(P<0.05)。3对胃黏膜水分的影响及以s胃痛断为中心的fd大鼠的胃功能胃肠动力障碍、心理因素等对FD影响较大,胃肠运动功能障碍在FD发病机制中的作用一直备受重视,并被认为是引起上消化道症状的主要原因,而胃肠激素与胃肠运动密切相关,胃肠运动受到相关激素的影响和神经递质的调控。有学者从胃肠激素方面对FD的发病机制进行了研究,发现FD患者存在胃肠激素分泌异常。GAS刺激壁细胞分泌胃酸和营养黏膜的生长,能促进胃肠平滑肌收缩,增加胃肠道的运动。SS以旁分泌方式调节G细胞GAS的分泌,并对胃肠道的分泌、吸收、运动功能有普遍的抑制作用,对胃黏膜有直接的保护作用。SS可抑制许多细胞因子的释放,其作用表现在对胃肠道具有广泛的直接和间接调节作用,它对多种生理功能具有抑制作用。GAS和SS的平衡对保持胃黏膜胃酸分泌和维持正常胃肠道功能有着重要作用。GAS和SS的分泌失调可以导致疾病,病理状态下又可导致其分泌失调。胃黏膜G细胞主要分布在胃窦部,D细胞在胃窦、胃体和胃底均有分布,而以胃窦部较多。胃肠黏膜内G、D细胞的比值相对恒定,这有利于维持正常的胃肠功能。本研究结果显示,FD模型组大鼠血浆、胃窦及十二指肠组织中GAS水平下降,而SS水平升高。表明胃痛消痞方及西沙必利可能促进GAS的分泌,抑制SS的分泌。两组血浆及组织中GAS及SS分泌量差异显著,表明胃痛消痞方优于西沙必利。而唐海英等研究发现,SS抑制胃酸的分泌,抑制胃排空,还可以通过内分泌和旁分泌途径来抑制胃泌素的分泌。可见胃痛消痞方及西沙必利通过促进胃泌素的分泌,抑制生长抑素的分泌来刺激胃泌素分泌,进而对FD大鼠协同起到体液和胃肠道动力调节作用。FD属中医“痞满”、“胃脘痛”、“嘈杂”等范畴。该病的发生不仅与胃有直接关系,而且与肝脾密切相关。虽然导致FD发病的因素较多,但脾胃虚弱是根本,肝郁是关键。治疗上着重调理情志与脾胃,复其升降。胃痛消痞方以柴胡、白芍疏肝解郁,调理气机;炒白术、党参健脾益气助运;砂仁、枳实化湿行气,散结消痞;焦山楂、炒麦芽,炒鸡内金疏理中焦以醒脾,健脾消食以化积。肝郁则可见脘腹胀满疼痛,延胡索行气止痛,炙甘草调药缓中,全方将疏肝解郁与健脾消食两法有机结合起来,从而使木达土旺。共奏疏肝健脾、理气和胃之功效。在FD与GAS、SS关系方面,SS对胃排空的抑制作用主要影响胃及十二指肠间的协调运动,并通过实验发现SS升高与胃排空迟缓呈显著正相关。刘松林等研究发现,FD大鼠血中GAS的含量降低,通过用药提高GAS含量,通过其效应而发挥促胃动力作用。SS对胃肠道有广泛的抑制作用,抑制胃肠运动及胆囊收缩,对胃肠其他激素分泌也有广泛抑制作用。目前,西医治