乳痛宁颗粒剂中挥发油的提取工艺研究

乳痛宁颗粒剂中挥发油的提取工艺研究

新疆医科大学第一附属医院的纯中药制剂，具有平肝健肾、活血化瘀、消瘀止痛的功效。长期以来，它对乳腺小叶增生也有显著的治疗效果。本实验将此制剂改剂型为颗粒剂,按国家6-②类中药新药的要求研制。处方中当归、川芎和香附子主要成分为挥发油,原工艺在煎煮过程中挥发油大量损失,影响功效,本实验采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,单因素考察得到最佳提取工艺;用β-环糊精(β-CYD)包合挥发油技术,采用正交试验得到最佳包合工艺,旨在降低挥发油的损失。现将实验结果报道如下。1年版标准乳痛宁颗粒处方中当归、川芎和香附子3种挥发油提取药材均符合《中华人民共和国药典》2000年版标准。β-CYD(苏州味精总厂产品,纯度为95%,19990225);无水硫酸钠、石油醚、无水乙醇均为分析纯;ML-902定时恒温电力磁力搅拌器(上海浦江分析仪器厂);MAX/18KW全自动X射线衍射仪(日本马克科学公司);挥发油测定仪(上海玻璃仪器厂)。2方法和结果2.1提取的提取2.1.1相对密度提取方法预试验证明,当归、川芎和香附子3种药材混合挥发油在冷却状态下相对密度大于1.0g/cm3,在加热状态下相对密度小于1.0g/cm3,故在提取过程中采用药典中的甲法装置提取。按处方比例各称取3种药材粗粉(10目)适量,混和,浸泡一定时间,加一定量水回流提取至挥发油体积不再发生变化时,收集挥发油,用无水硫酸钠脱水,得到橙黄色油,读取挥发油体积,与所加药材总量相比,即得收油率。2.1.2吸水率的测定按处方比例称取3种药材粗粉(10目)各50g,混合,分别加药材量的10倍水,浸泡至透心,滤过(不挤压),测得吸水率为145%(n=3)。2.1.3收油率的测定按处方比例称取3种药材粗粉(10目)各52g,混合,分别加药材量的6、8、10、12、14、16、20、24倍水,提取挥发油12h,考察收油率。结果表明,加水量12倍时,其收油率占24倍加水量收油率的90%以上,为节约成本,故选择加水量为12倍。2.1.4收油率试验按处方比例称取3种药材粗粉(10目)各52g,混合,加12倍水,分别浸泡0、4、8、12、24h,提取挥发油12h,考察收油率。结果表明,浸泡时间对收油率没有影响。2.1.5提取工艺的确定按处方比例称取3种药材粗粉(10目)各52g,共3份,混合,加12倍水,提取挥发油,记录不同时间的收油量及累计收油率,结果见表1。结果表明,加12倍量水,提油8h时,其累计收油率占12h收油率的90%以上,从经济角度出发,选择提油时间为8h。通过以上单因素考察,确定当归、川芎、香附子3种药材挥发油提取最佳工艺为粉碎成粗粉(10目),加水12倍,提油8h。经3批药材提油验证,平均收油率为0.81%,RSD为0.83%。2.2包合工艺的研究2.2.1包合物制备方法采用饱和水溶液法包合。精密称取β-CYD4.00g,置于200ml具塞三角锥形瓶中,加入蒸馏水100ml,加热使之完全溶解,降至所需温度,在恒温下搅拌。挥发油用无水乙醇(1∶2)稀释后,用注射器缓慢滴加到环糊精溶液中,加塞,继续搅拌至规定时间。放置在4℃冰箱中24h,快速抽滤后,用少量水多次冲洗,再用40～50℃的石油醚洗净残留的挥发油,干燥6h(40～50℃),得白色的粉末状包合物,称重,即得包合物实际量。2.2.2包合物中实际含油量的测定同药典中的甲法。2.2.3评价指标试验采用包合物收得率、挥发油包合率作为评价指标,设定其权重系数分别为0.3、0.7。计算公式如下:综合评分=包合物收得率评分+挥发油包合率评分2.2.4因素水平的选择根据文献,认为挥发油和β-CYD的比例、包合温度、包合时间为主要因素,根据实际条件分别对每个因素设计出5个水平,进行单因素试验,以优选3个水平。筛选出的试验因素水平结果见表2。2.2.5正交试验安排及结果采用正交试验L9(3)4安排试验各因素水平,具体试验安排及结果见表3。由以上极差分析结果表明,各因素对试验结果影响的程度依次为A>B>C,最佳包合工艺为A1B3C2。对其进一步进行方差分析,其结果见表4。以上方差分析表明,各因素对试验结果影响的程度依次为A>B>C,A与B和C相比差异有统计学意义,A1优于A2和A3,应选择A1;由于因素C无影响,因此为降低成本,节省工时,则应选择C1。综合极差分析与方差分析,最佳包合工艺为A1B3C1,即β-CYD与挥发油比例为4g∶0.50ml,包合温度为60℃,包合时间为1h。2.2.3验证试验按正交试验筛选出的最佳工艺条件A1B3C1进行验证,3批挥发油包含验证结果与正交试验结果相接近,包合物平均收得率为72.7%,RSD为1.8%;挥发油平均包合率为84.4%,RSD为1.5%。3c-fs-s-cyd包剂的物理结构验证3.1衍射角ss试验条件:铜靶/石墨单色器,扫描速度10.0deg/min,管压40kV,管流150.0mA,狭缝:DS0.5deg/min,SS0.5deg/min,RS0.15mm,衍射角为0～40°。样品分别为挥发油液体、β-CYD粉末、β-CYD挥发油包合物和β-CYD∶挥发油(1g∶0.50ml)混合物。3.2挥发油-cyd包合物的结构图谱表明β-CYD挥发油物理混合物的衍射峰是挥发油和β-CYD2个单组分各峰的叠加,β-CYD挥发油物理混合物与β-CYD的图谱基本相似,这可能是由于混合物中挥发油所占比例较小(12.5%)的缘故,而挥发油β-CYD包合物的衍射图谱与前两者有着明显的差别,部分衍射峰生成或加强,而部分衍射峰消失或减弱,说明包合物已构成新的物相。4包合工艺的验证试验结果4.1本实验采用饱和水溶液法进行包合,方法科学,工艺简单,便于工业生产。此外,将β-CYD包合挥发油后,经加速实验(60℃恒温48h),测其经加速实验后挥发油的剩余百分率,结果为包合的挥发油保留了60%,可见包合物较稳定。4.2通过三因素三水平的正交试验筛选最佳