遗传实验报告模板

吉林大学国家级生物实验教学示范中心实验报告课程名称：实验题目：年月日姓名：年级：专业：组别：小鼠骨髓染色体制备与观察【实验目的】掌握动物骨髓细胞染色体制片技术观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数【器材】恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸、光学显微镜、带数码相机的光学显微镜【药品】0.075mKCl、低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚、品红溶液、二甲苯【动物】体重20克左右的小鼠（2n=40）一只【实验原理】核型（karyotype）是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。核型具有明显的种属特异性。中期分裂特点：染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端，可见三种形状的中期染色体低渗处理，秋水仙素处理，植物凝集素（PHA）处理是三个关键技术。血淋巴细胞是动物和人的核型分析最常用的素材，但是动物骨髓中的造血干细胞是各种血细胞的来源，具有很强的分裂能力，便于获取，以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养，是动物染色体核型分析的理想材料。与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的优势，无需PHA处理即可用于核型分析。制片的流程为：秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片-染色-水洗-镜检秋水仙素处理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。收集骨髓细胞：用生理盐水（0.85%NaCl溶液）收集骨髓细胞，使维持等渗环境，保持细胞自然形态。低渗处理：营造低渗环境，使细胞内张力增大，细胞更容易破裂，染色体更分散。固定：终止细胞生长过程及一切生理生化反应，维持细胞结构不变。滴片：产生的剪切力破坏细胞膜。预冷的玻片使得液体的表面张力增加，液层更薄，有利于细胞的破裂和染色体的分散。滴片后，细胞膜破裂，细胞核或核内染色体分散在载玻片上。【实验方法】秋水仙素处理腹腔注射0.01%秋水仙素溶液0.5ml等待2-4h处死：每四人领取一只小鼠，抓住小鼠尾巴将其转移到实验台上。采用颈椎脱臼法处死小鼠。一手按住鼠头，另一手抓住鼠尾靠近根部用力向后拉。将脊髓与脑髓拉断。注意小鼠咬手，缓慢加力解剖：剪去腿部附近皮毛，取出股骨胫骨，剃去周围肌肉组织。收集骨髓细胞：剪去骨两端，注射器吸生理盐水（0.85%NaCl溶液），针头插入骨腔反复冲洗几次，用1.5ml离心管收集骨髓细胞。不要多次重复吸取含有细胞的生理盐水，总体积不要超过1.5ml离心条件：2000rpm，5min注意用相同溶液配平。离心后，用注射器小心吸取上清，弃去。离心管内可以留少许液体。低渗处理低渗液配方：0.075MKCl溶液。离心收集细胞,去上清。加入1.5ml37℃低渗液，振荡(轻弹管壁)使细胞分散，在37℃培养箱中保温低渗10min，做好标记。固定固定液配方：甲醇：乙酸=3:1。离心收集细胞，去上清。加入1.5ml固定液，振荡使细胞分散，室温固定10min。振荡使细胞分散滴片从40cm以上的高度将细胞悬液滴在预冷的载玻片上，滴两滴（载玻片1/3和2/3处）。滴加悬液时载玻片可适当倾斜（30度角），滴完后立即用嘴吹散细胞，空气干燥。染色染料：石碳酸品红。染液覆盖所有细胞，载玻片下垫纸巾，染色5min水洗用较小的水流冲洗载玻片背面，流水将从载玻片边缘带走染液，滤纸擦干载玻片背面水分，空气干燥，无需盖玻片，镜检镜检10倍镜下锁定目标细