白癜风中药复方对酪氨酸酶活性的影响

白癜风中药复方对酪氨酸酶活性的影响

酪氨酸酶（tyr）是皮肤黑素生物合成的主要酶，其化学结构为铜和糖蛋白。在皮肤黑素生物合成过程中,酪氨酸羟化生成多巴,多巴氧化生成多巴醌,二羟基吲哚转化生成吲哚醌,这些反应步骤均需TYR参与;无TYR时,反应则变得非常缓慢。TYR活性与黑素合成量呈正相关,TYR活性改变可引起色素障碍性皮肤病如白癜风,基因突变则可引起白化病。为了研究中药对酪氨酸酶活性的作用,我们选择100册古籍专著和50种中医药杂志近30年文献,电脑统计选定古方中治疗白癜风应用频次较高的复方中药5首,分别测定其水提液、醇提液对酪氨酸酶活性的影响。1材料和方法1.1仪器722分光光度计(上海第三分析仪器厂生产)。1.2dl-多巴试剂蘑菇酪氨酸酶(tyrosinase.EC.1.14.18.),DL-多巴(DL-β-3,4-dopa),均购自美国Sigma公司),其它试剂均为分析纯。1.3特效药1.3.1中药鉴定标准治疗白癜风中药复方白驳片、白癜风丸、柴胡疏肝汤、通窍活血汤、白蚀丸由南京中医药大学门诊部提供,经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定,符合《中华人民共和国药典》规定。1.3.2治疗地肤子、刺扩白驳片:紫草、降香、重楼、白药子、白薇、苍术、海螵蛸、红花、桃仁、生首乌、龙胆草、白蒺藜、甘草。白癜风丸:补骨脂、当归、地肤子、刺蒺藜。通窍活血汤:赤芍、川芎、桃仁、红花、鲜姜、老葱白、红枣、麝香。柴胡疏肝汤:川芎、当归、赤芍、生地、柴胡、黄芩、山栀子、天花粉、防风、牛蒂子、连翘、甘草。白蚀丸:红花、丹皮、紫草、苍术、白蒺藜、龙胆草、甘草、补骨脂、首乌、丹参、灵芝。1.3.3u3000制备工艺(1)醇提液:中药粉碎后用90%乙醇溶液浸泡,3h后回流过滤,再将残渣提取2次,合并提取液,置沸水浴中挥尽乙醇浓缩至膏稠状,然后溶于含2%DMSO0.05mol/LpH6.5磷酸缓冲液中,制成每mL相当于0.1g原生药的溶液。(2)水提液:取中药置玻璃烧杯内,加相当于药材量5～7倍的蒸馏水浸泡1～2h,煮沸30min过滤。药渣加3～5倍量水继续煎煮,煮沸20min,过滤。合并两次滤液,于水浴上浓缩成每mL相当于原药材0.1g的药液。若处方中有需先煎、后下、包煎、另煎和烊化等药材,则按常规处理。1.4实验方法1.4.1u3000添加dmso后菇酪氨酸酶活力采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。反应混合物2mL:0.1mol/LpH6.5PBS1.8mL+药物0.1mL(浓度0.1g/mL)+蘑菇酪氨酸酶0.1mL(80U)。37℃孵育10min,加0.15%DL-多巴1mL,2、3、4、5、6min时,用分光光度计475nm处测定吸光度A值(A475),以每分钟A475增加0.001定为1个酶活力单位。醇提物用DMSO助溶。以PBS液为空白,水提液以不加药物的反应组为对照,醇提液以不加药物含2%DMSO的反应组为对照,分别测定酪氨酸酶活性。1.4.2数据处理和统计数据的方法上述每一实验重复3次。所测实验数据以(χ±s)表示,采用成组t检验,使用Office97excel软件作数据处理及分析。2结果2.1酪氨酸酶活性测定治疗白癜风中药复方中,白癜风丸、柴胡疏肝汤、白驳片、白蚀丸组酪氨酸酶活性增高(P<0.01)。其中,白癜风丸对酪氨酸酶活性的激活作用最强,柴胡疏肝汤、白驳片次之,白蚀丸较弱,结果见表1。2.2抗胆红素对蘑菇酪氨酸酶活性的影响白癜风丸组方中药补骨脂、当归、地肤子、刺蒺藜对酪氨酸酶活性均有激活作用,其中补骨脂较高,刺蒺藜次之,当归、地肤子较弱,结果见表2。3不同中药复方治疗对酪氨酸酶活性的影响业已证实上调酪氨酸酶活性加速黑素生成的药物可提高白癜风治疗效果,但其机制不清。Cui等认为毛囊外根鞘部存在无功能黑素细胞(MC),以毛囊中下部居多。白癜风表皮内MC完全消失,毛囊球部和漏斗部有色素MC被破坏,但毛囊外根鞘内无功能MC存在,其数量和分布与正常相近。白癜风恢复时,表皮内出现新生有功能MC,毛囊外根鞘内无功能MC较正常和白癜风时明显增多,而且出现了有功能MC。恢复过程首先开始于毛囊中下部。药物可能刺激外根鞘内无功能MC。使其分裂增殖,并沿毛囊外根鞘表面向上移行,进入表皮。在其移行过程中,MC功能和形态逐渐成熟,多巴反应由弱到强,分支增多延长。进入表皮后,MC以毛囊孔为中心继续向周围扩展,形成临床上所见的毛囊孔性色素小岛。中药复方是中医临床防病治病的主要形式,是中医扶正祛邪、辨证论治的集中体现和中医治法治则在组方用药上的具体应用。我们选取白癜风治疗中使用频次较高的复方中药5首,分别测定其水提液、醇提液对酪氨酸酶活性的影响。结果显示白癜风丸、柴胡疏肝汤、白驳片、白蚀丸组酪氨酸酶活性增高(P<0.01)。提示白癜风丸等治疗白癜风中药复方对酪氨酸酶活性有显著激活作用。白癜风丸行血活血、散风解毒、祛风除斑,可使酪氨酸酶活性显著增高,是中医治疗白癜风主要复方。实验中发现,其组方中药补骨脂、当归、地肤子、刺蒺藜均上调酪氨酸酶活性且能发挥协同作用;从中医组方原则来看,当归补血活血、调经止痛、润燥滑肠;刺蒺藜平肝舒郁、祛风活血、疏肝理气;地肤子清热利湿祛风;补骨脂滋肝补骨助阳。诸药配伍,补中有通,益中有泄,共奏调和气血、荣肤祛白之功效。司在和等应用白癜风丸治疗白癜风患者,每日2次,每次6～9g,疗程9个月,共100例,痊愈38例,显效25例,有效18例,无效19例。冯所安等应用白蚀丸口服,每日3次,每次10粒,疗程3月,共治疗458例白癜风患者,显效61例,有效264例,无效133例,总有效率70.90%。王专勤等应用白驳片治疗白癜风患者79例,痊愈37例,显效17例,有效12例,无效13例。白癜风丸、白驳片、白蚀丸等主要由滋补、性温