中药肾病的化学成分分析

中药肾病的化学成分分析

近年来，国际上广泛使用的所谓“中医肾病”一词非常流行。主要用于中药常用的广方、关木通、青木香、天仙藤等。2000年6月9日,美国药品与食品管理局(FDA)在“至今未收到类似不利事件的报告”的情况下,竟命令停止进口、制造和销售已知含有和“怀疑含有马兜铃酸的原料和成品”。所谓“怀疑含有马兜铃酸的植物”多达70余种,涉及马兜铃属所有种及细辛属、千金藤属、青藤属、木防己属、蝙蝠葛属、铁线莲属、木通属和木香属,其中一部份仅仅因为名称的词干有瓜葛,但来源与马兜铃则毫不相干。全国的商品木通主要来源于马兜铃科、毛茛科和木通科的10种植物,以关木通和川木通为主流,而木通科的木通商品极少。3种木通在原植物形态及生活习性、生药性状与组织结构等方面均各有特点,决定三者在药性毒性上必然会有所不同。LC-MS作为一种准确、灵敏、信息丰富的分离鉴定手段,已广泛应用于药物分析领域。本文采用LC-MS,对木通科木通、毛茛科川木通、马兜铃科关木通的化学成分进行了定性分析,从化学物质基础的角度解释它们药效的相似性与差异性。1科木通、毛科川木通和马中心木通HPLC级甲醇Fisher公司,甲酸(北京化工厂,分析纯),醋酸铵(Sigma)。木通科木通来自浙江省,毛茛科川木通来自四川省,马兜铃科关木通采自吉林省,均由清华大学分析中心肖盛元博士鉴定。质谱仪器为Agilent1100LC/MSDTrap电喷雾-离子阱质谱。色谱柱为KromasilKR100-5C18(4.6mm×250mm)。2方法2.1流量准备流动相:A相,含0.1%甲酸及0.1%醋酸铵的重蒸馏水;B相:含0.1%甲酸及0.1%醋酸铵的甲醇。2.2提取溶剂制备采取文献提取方法,取约0.2g药材粉末于5mlPV管中,加入2ml提取溶剂(甲醇:水=70∶30)。静止浸泡18h后,超声3次,每次10min。然后离心,4000rpm下10min,取上清液。经0.45μm滤膜过滤后,滤液用提取溶剂稀释适当倍数,供分析用。2.3质谱条件检测液相的梯度洗脱条件为:0→30min,A80%,B20%→B100%,保持10min。流速为0.6ml/min,平衡时间为20min,进样体积为20μl。质谱检测为正离子模式,电喷雾离子源,雾化气为35psi,干燥气为9.0L/min,干燥气温度为350℃。质谱检测为一级质谱模式,扫描范围为50～1000(m/z)。3提取溶剂的确定为了避免浓度过大污染仪器,需进行预实验选择适当的稀释倍数:木通、川木通提取液不需稀释即可进样分析,关木通用提取溶剂稀释10倍后进样。木通、川木通、关木通LC-MS分析的总离子流、基峰色谱图见图1和图2。3.1种药材的lc-ms分析根据基峰色谱图,研究不同保留时间下色谱峰的最强离子,结果如表1、表2、表3。结果表明:这三种药材的基峰离子,存在显著差异。这三种药材来源于不同科的植物,大部分化学成分都是不相同的,三种药材的LC-MS谱图也说明了这一点。此外,相同的实验条件下分析马兜铃酸A标准品,27.8min出峰,主要离子形态为[M+NH4]+(m/z359)。对关木通谱图进行提取离子流(m/z359)分析,得到强峰。木通峰很弱,川木通没有明显的峰。3.2化学成分保留时间对质谱图进行分析时,用某个质荷比提取总离子流,如果不同药材的EIC(提取离子流色谱图)具有一致的保留时间,就可以认定有相似的化学成分在该时刻出峰。表4列举了三种药材相似化学成分的保留时间。结果表明:木通与川木通含有较多的相似成分,相似性更大,而关木通与前两者相似成分较少。由于关木通稀释10倍后进样,所以在提取离子流图中信号强度低,背景噪音高。此外,对于保留时间相同,不同质荷比的离子进行分析,发现很多对都相差m/z22,这是因为这几种药材中含用Na、K等离子,质谱分析时,检测到[M+H]+,[M+Na]+,这样虽可判断化合物的分子量,但确定它的结构还需结合多级质谱图及相关文献进一步研究。4关木通与传统木通谢宗万对木通进行本草考证后指出,木通品种的应用经历了以下变迁:在宋代以前使用的木通来源于木通科植物,而宋《证类本草》所记载的木通,来源于木通科植物和毛茛科植物,清代《植物名实图考》中只记载了毛茛科的几个木通,历代本草中均未出现过关木通的名称。1954年,任仁安对全国的商品木通进行市场调查,发现关木通较多,因此,认为传统用的木通就是现在的关木通。其后,关木通收载于1963年版《中国药