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文档简介
脂肪、糖类、蛋白质鉴定1鉴定原理3注意事项2实验选材
(1)脂肪的检测:脂肪+(2)糖类的检测①还原糖+
。②淀粉+碘液
。(3)蛋白质的检测:蛋白质+
双缩脲试剂变性的蛋白质也可,或具有两个及两个以上肽键的化合物原理:某些化学试剂能够使生物组织中的相关化合物产生特定的颜色反应。橘黄色红色斐林试剂砖红色沉淀蓝色检测原理50℃~65℃水浴加热2min紫色苏丹IV苏丹III1.实验选材基本要求:①被检测物质含量丰富②易获取的原则③颜色浅或接近于浅色实验选材苏丹Ⅲ、体积分数为50%的酒精溶液、蒸馏水2.试剂:斐林试剂
甲液:0.1g/mL的NaOH溶液乙液:0.05g/mL的CuSO4溶液双缩脲试剂A液:0.1g/mL的NaOH溶液B液:0.01g/mL的CuSO4溶液对提供的材料进行选择和分类:①苹果②花生种子③豆浆④梨⑤稀释鸡蛋清⑥鲜肝提取液
⑦马铃薯匀浆⑧芝麻种子⑨西瓜汁⑩去皮葡萄匀浆
⑪白萝卜匀浆(1)适合还原糖检测的有
。(2)适合脂肪检测的有
。(3)适合蛋白质检测的有
。(4)适合淀粉检测的有
。⑦①④⑩⑪②③⑤⑥实验选材(1)淀粉的检测和观察实验步骤(2)脂肪的检测方法一:花生种子匀浆+3滴苏丹Ⅲ染液→橘黄色方法二取材:花生种子(浸泡,去掉种皮)↓切片:将子叶切成若干薄片,放入盛有清水的培养皿中待用↓制片
↓观察:先低倍显微镜下寻找已着色颗粒,再高倍显微镜观察↓结论:①取最薄的切片,用毛笔蘸取放在载玻片中央②染色:滴2~3滴苏丹Ⅲ染液,染色3min③去浮色:加1~2滴
体积分数为50%的酒精
溶液④制成临时装片:滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片75%——消毒50%——洗去浮色圆形小颗粒呈橘黄色,证明花生种子中含有脂肪选材:试剂:制备样液:颜色反应:含糖(可溶性糖)量高、白色或近于白色的植物组织斐林试剂
甲液:的NaOH
乙液:的CuSO4
制浆→过滤(一层纱布)→取液注入2mL梨组织样液振荡、混合摇匀注入1mL刚配制好的斐林试剂变成砖红色50-65℃的温水蓝色棕色砖红色新制Cu(OH)2Cu2O(沉淀)结论:组织样液含有还原糖不宜用甘蔗;不宜用西瓜汁和番茄汁等颜色较重的材料(颜色会掩盖实验结果)(3).还原糖的检测不能用酒精灯直接加热①常见的单糖(葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、脱氧核糖等)、二糖中的麦芽糖、乳糖是还原糖;蔗糖、多糖(淀粉、糖原和纤维素)都不是还原糖。②非还原糖(如蔗糖)+斐林试剂水浴加热后的现象不是无色而是浅蓝色[Cu(OH)2的颜色]。提醒取材制备组织样液黄豆组织样液(或鸡蛋蛋清稀释液)蛋清必须稀释,以免实验后黏住试管壁,不易清洗鸡蛋清蛋清稀释液加水稀释黄豆(侵泡1-2d)豆浆研磨滤液过滤(4)蛋白质检测实验步骤(4)蛋白质检测显色反应现象摇匀2mL组织样液1mL双缩脲试剂A液创设碱性环境3-4滴双缩脲试剂B液提供Cu2+无色蓝色紫色蛋白质中肽键在碱性环境遇到Cu2+会形成紫色络合物A液:质量浓度0.1g/mlNaOH,B液:质量浓度0.01g/mlCuSO4先加A液、再加B液过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3~4滴而不能过量?斐林试剂双缩脲试剂不同点浓度使用方法原理颜色变化甲液乙液:g/mLCuSO4A液B液:g/mLCuSO4甲液和乙液混合均匀后方可使用,且现配现用需水浴加热。使用时先加A液再加B液,不需加热实质是新配制的Cu(OH)2,还原为Cu2O沉淀实质是碱性环境中的Cu2+肽键与碱性环境中的Cu2+生成紫色的络合物。斐林试剂和双缩脲试剂对比蓝色→棕色→砖红色浅蓝色→紫色①唯一需要加热——还原糖的检测,且必须水浴加热,不能用酒精灯直接加热。若不加热,则无砖红色沉淀出现。②唯一需要使用显微镜——脂肪的检测。③唯一使用酒精——脂肪的检测,实验用体积分数为50%的酒精溶液洗去浮色。④因为其反应原理是具有两个或以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成紫色络合物提醒1.利用斐林试剂的甲液、乙液和蒸馏水能否检测蛋白质?为什么?
能。斐林试剂的甲液、乙液的成分分别与双缩脲试剂的A液、B液相同,只是斐林试剂的乙液的质量浓度比双缩脲试剂的B液高,只需将斐林试剂的乙液用蒸馏水稀释即可。2.鉴定可溶性还原糖的实验材料是否可选择西瓜、番茄、马铃薯、
甘蔗组织样液?不可以。西瓜和番茄组织样液本身的颜色对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用,导致实验现象不明显;马铃薯含淀粉,淀粉为非还原糖;甘蔗主要含蔗糖,为非还原糖。应选颜色为白色或近白色、富含葡萄糖、果糖或麦芽糖等还原糖的植物组织样液,以苹果、梨的匀浆最好。思考1、生物材料原有的颜色是否影响结果的观察?2、材料需要如何处理?3、两种检测试剂的使用方法是否一致?4、如何排除其他因素对实验结果的影响?5、能与双缩脲产生紫色反应的一定是蛋白质吗?实验室证据“生物组织中糖类、蛋白质的的检测”讨论活动1、下列有机物的鉴定实验中,操作有误的是()
A.鉴定蛋白质时,把双缩脲试剂A液和B液混合后再加入蛋白质样液中
B.鉴定还原糖时,用60℃水浴加热
C.鉴定淀粉时,直接把碘液加入淀粉样液中
D.鉴定脂肪时,在花生种子匀浆中滴加苏丹Ⅲ染液后,直接进行观察A2、现提供可配制斐林试剂的溶液:甲液(0.1
g/mL的NaOH溶液)、乙液(0.05g/mL的CuSO4
溶液)以及蒸馏水,如果充分利用上述试剂及必需的实验用具,可灵活性地鉴别出下列哪些物质
()
①葡萄糖
②蔗糖
③胃蛋白酶(其化学本质是蛋白质)
④DNA
A.只有①
B.①②
C.①③
D.②③④C课堂练习课堂练习3、(2023·四川宜宾高一期末)某生物兴趣小组对作物种子发育过程中有机物的积累及转化进行动态监测。下列关于检测方法及出现结果的叙述,不正确的是(
)A.小麦种子加水浸泡→用小刀纵切→在切面滴加碘液→依据被染成蓝色检测淀粉B.甜玉米籽加水研磨→离心取上清液→加斐林试剂→观察砖红色沉淀检测还原糖C.花生种子切片→苏丹Ⅲ→去浮色→显微镜观察细胞内被染成橘黄色的脂肪颗粒D.鸡蛋清加水搅拌→加NaOH溶液→再加CuSO4溶液→依据紫色反应检测蛋白质B课堂练习4、NaOH溶液和CuSO4溶液可作为斐林试剂(甲液和乙液)检测生物
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