生物二轮复习专题拓展双抗（双特异性抗体）人-鼠嵌合抗体制备

双抗（双特异性抗体）

抗体的结构如图所示，它有两条H链和两条L链组成。同一物种：恒定区（FC区）氨基酸序列恒定，不同抗体:可变区（Fab区）（结合抗原的区域）氨基酸序列有差异。天然的抗体：左右两个可变区结构完全相同，只能结合相同的抗原。双特异性抗体：通过一定技术手段得到，它的两个可变区能结合不同的抗原。双抗（双特异性抗体）制备方法：1.化学偶联法

2.（1）制备能产生双抗的双杂交瘤细胞（先制备两种杂交瘤细胞，每种杂交瘤细胞产生的抗体与特定的抗原结合。然后再使二者融合，经过筛选最终得到可以产生双抗体（同时抗两种抗原）的双杂交瘤细胞。）

（2）通过杂交一杂交瘤细胞技术

（免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术）制备

3.基因工程制备科研人员制备能产生双抗体的双杂交瘤细胞的实验过程是：先制备两种杂交瘤细胞，每种杂交瘤细胞产生的抗体与抗原的结合情况如图1、2所示。然后再使二者融合，经过筛选最终得到可以产生双抗体（同时抗α、β两种抗原，图3）的双杂交瘤细胞。抗体由两条重链和两条轻链组成，重链和轻链均分为恒定区和可变区，两条重链依赖于A1或B1进行组装（A1与B1相同），重链与轻链的组装依赖于恒定区A2、a或B2、b（a与b相同）。下列叙述错误的是（

）

A．制备双特异性抗体时需将抗原α、β分别注射到小鼠体内，

获得免疫小鼠的脾脏细胞B．用解离液处理免疫小鼠的脾脏细胞获得单细胞，再与小鼠

的骨髓瘤细胞融合后可获得两种杂交瘤细胞

C．可用PEG试剂或灭活病毒促进两种杂交瘤细胞的融合，成功融合后经过筛选可获得双杂交瘤细胞D．三种杂交瘤细胞的筛选均需要进行克隆化培养和抗体检测E．双杂交瘤细胞产生的抗体可与两种抗原同时发生特异性结合，在肿瘤治疗方面研制与肿瘤细胞和抗肿瘤药物结合的双特异性抗体，能特异性杀死肿瘤细胞F．图3中的1、2、3、4、5、6可以分别是A2、B2、a、b、β、αB．解离液能固定并杀死细胞，故不能用解离液处理；应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，才能达到分散成单个细胞的目的，B错误；F．1、2、3、4、5、6分别对应A2、B2、a、b、a、β，D错误。

【答案】BF双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科研人员通过杂交一杂交瘤细胞技术（免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体的部分过程。GC33是用于杀伤含GPC-3的肝癌细胞的单克隆抗体，但临床使用效果不太理想。为提高治疗效果，研究人员用新的技术构建了一种双特异性抗体，该抗体可同时特异性识别肝癌细胞上的GPC-3以及T淋巴细胞表面的特殊蛋白质CD3。图1表示该双特异性抗体的制备过程，图2表示其在肝癌治疗中的作用。（1）过程①的目的是___________，制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的技术有___________（至少答出两条）。（2）过程②诱导融合的方法是___，过程②选用的骨髓瘤细胞______（填“能”或“不能”）在HAT培养基上生长。（3）经过程③筛选得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行过程④，原因是______________。（4）请根据所学知识，用箭头和文字在图中方框内补全获取单克隆杂交一杂交瘤细胞的生产过程。_______。（5）获得的单克隆杂交一杂交瘤细胞在体外条件下培养或_____，均可提取出大量的双特异性单克隆抗体。抗体的特异性体现在______,T细胞对癌细胞的攻击属于________免疫（6）结合图1、图2的信息和已有知识，简述双特异性抗体在肝癌治疗中的作用__________。

（1）使小鼠产生能分泌识别癌胚抗原抗体的B淋巴细胞

动物细胞融合、动物细胞培养

（2）聚乙二醇（PEG）等

不能

（3）从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型，导致融合后有多种杂交瘤细胞（4)将获得的B淋巴细胞与单克隆杂交瘤细胞融合→在选择培养基上筛选出杂交-杂交瘤细胞→克隆化培养、抗体检测筛选出单克隆的杂交-杂交瘤细胞

（5）注射到小鼠腹腔内增殖

一种抗体只能特异性识别一种抗原

细胞免疫（6）该双特异性抗体可同时识别肝癌细胞膜上的GPC-3和T淋巴细胞膜上的CD3，从而将肝癌细胞和T淋巴细胞紧密接近（将T细胞定向带到癌细胞所在的位置），有利于T淋巴细胞特异性地杀伤肝癌细胞，促使巨噬细胞吞噬肝癌细胞拓展：基因工程制备人-鼠嵌合抗体：抗体的结构可分为可变区和恒定区，其中可变区决定抗体的特异性，是抗体识别及结合抗原的部位。而研究发现，90%的人抗鼠抗体反应（HAMA反应）是针对抗体恒定区的。（HAMA反应是指鼠源性单克隆抗体对人体具有异种蛋白的抗原性，可引起人抗鼠抗体的产生。）科学家欲利用基因工程、蛋白质工程、细胞工程、胚胎工程等技术生产不会发生HAMA反应的人鼠嵌合抗体。(1)以抗体的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因合成，对抗体进行改造，生产人鼠嵌合抗体，这属于_______工程；为构建人鼠嵌合抗体基因表达载体，需从分泌鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取______，逆转录得到______经PCR扩增得到

，并分别与人抗体恒定区DNA序列拼接。(2)图1所示表达载体中除标注出的结构外还必须有________，图中①是________识别和结合的部位。(3)将重组质粒导入

细胞后，在体外培养，培养时除需要提供适宜的营养条件外，还需要满足的其他条件有_____（回答三个）。通过此培养获得的培养物，需移植到_____的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体。移植前往往将胚胎培养至______时期，需要对发育中的胚胎是否获得了上述拼接好的基因进行检测，检测的操作是：取____细胞，提取DNA后可采用____方法进行检测。（4）通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体，该嵌合抗体的优点是________。鼠抗体可变区人抗体恒定区。（1）蛋白质

mRNAcDNA鼠抗体可变区cDNA（2）复制原点RNA聚合酶