液相色谱仪使用及维护方法 液相色谱操作规程

第第页液相色谱仪使用及维护方法液相色谱操作规程液相色谱仪使用时要特别的注意：

使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。液相色谱柱使用注意：A．卡套柱的

液相色谱仪使用时要特别的注意：

使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

液相色谱柱使用注意：

A．卡套柱的安装（加预柱）

1．将卡套架套入柱芯

2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯

3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

4．将"子弹头"预柱放入卡套片内

5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

6．然后依同样的次序连接好柱子的另一端

B．平衡色谱柱

反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请确定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；假如您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。

硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。假如该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

如何平衡色谱柱？

平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度假如较低，则需要较长的时间来平衡）

色谱柱的再生

进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议可以不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

注意：

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应当在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。假如简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗特别有效。

色谱柱的维护:

1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有确定的溶解度）

2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

3．避开流动相构成及极性的猛烈变化

4．流动相使用前必需经脱气和过滤处理

5．假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

6．压力上升是需要更换预柱的信号

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故障2柱压高原因（1）缓冲液盐份如（乙酸铵等）沉积柱内；（2）样品污染沉积.处理对于第一种情况先用40—50度的纯水,低速正向冲洗柱子待柱压渐渐下降后相应的提高流速冲洗柱压大幅度下降后用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟,对于第2种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇[4+6]冲洗柱子[冲洗时间的长短由样品的污染情况而定],在用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上

故障3既无压力指示又无液体流过[1]原因1泵密封垫圈磨损2大量气体进入泵体.处理对于第一种情况,更换密封垫圈；对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处不帮忙抽出空气.

故障4压力波动大,流量不稳定.原因；系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间家有异物,使得两者不能密封.处理:工作中注意流动相的量.保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避开吸入空气,流动相要充分脱气.如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗.

故障5出峰不准,峰分叉.原因（1）色谱柱被污染,（2）柱头填料塌陷.处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定）,再换成甲醇冲洗,然后再用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上.如冲洗后仍旧出峰不佳,则考虑第二种情况.对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷.去除硬结部分（污染的填料）,装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与助内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平.柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上.

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液相色谱仪五种故障问题解决方法

液相色谱仪是一种常用的分析仪器，紧要由高压输液泵、进样系统、温度掌控系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分构成，被广泛用于生物医学、环境化学、石油化工等领域中。

1、柱压高原因

（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；

（2）样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压渐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定）,再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

2、气泡溢出

流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,堵塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,连续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

3、既无压力指示,又无液体流过

（1）泵密封垫圈磨损；

（2）大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈；对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮忙抽出空气。

4、压力波动大,流量不稳定

原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意察看流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避开吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

5、出峰不佳,峰分叉

（1）色谱柱被污染；

（2）柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定）