结核病免疫学辅助诊断检查

结核病免疫学辅助诊断检查利用免疫学原理检查机体对分枝杆菌、特别是结核分枝杆菌感染造成的免疫反应，从而帮助临床医师进行鉴别诊断；但由于结核分枝杆菌的生物特性及此类病原菌引起的人体免疫反应较为特殊和复杂，截止到目前为止，结核病的免疫学检查在临床诊断中的作用尚存有较大争议。因此，目前结核病免疫学的检测结果，在结核病的临床诊治中，只能够作为辅助参考，不能作为结核病诊断和评价治疗效果的指标。临床医师在参考免疫学检查结果的同时，必须同时参照结核分枝杆菌的传统微生物学检查(包括抗酸染色镜检、特别是分枝杆菌培养检查)的结果并参考其它临床检查手段所得到的结果进行综合判断。（一）结核病免疫学检查试剂盒概述根据我国临床生物诊断试剂的规定，用于结核病免疫学检查的试剂盒，必须具有国家药品监督管理局颁发的生产文号。目前，我国已颁发生产文号的结核病免疫学检测试剂盒，按照相应的实验步骤，可分为两大类：一类试剂盒检测的标本一般为血清，是利用ELISA实验原理进行检测，此类试剂盒中都应具有相应的阴性、阳性和空白对照试剂；另一类试剂盒采用快速金标法进行检测实验，检测的标本有血清和全血，此类试剂盒均应具备显示反应正常的质控线或斑点。由于结核病免疫学检查的试剂盒种类及相应实验步骤区别较大，故请开展此项检查工作的实验室严格按照选用试剂盒厂家提供的说明书进行实验、判断和报告结果。（二）结核病免疫学检查试剂盒实验的质量控制1、完成结核病免疫学检查实验的操作人员必须经过专门培训。2、必须选用具备国家药品监督管理局颁发生产文号的检测试剂盒；同时生产厂商提供操作的技术培训和指导。3、使用的试剂盒必须在有效期内；检测实验记录中必须包括试剂盒的生产批号。4、进行检测的相应标本必须符合试剂盒说明书中列举的种类和质量标准。5、采用ELISA技术完成检测的试剂盒，每次实验必须设立阴性、阳性和空白对照；严格按照试剂盒说明书提供的操作步骤完成检测实验，如果相应对照样本检测结果出现问题，必须进行重新实验并分析记录引起问题的可能原因。6、采用快速金标方法完成检测实验的试剂盒，每批试剂盒投入正常使用前，相应实验室应使用检测结果已知为阳性、阴性的标本或使用生产厂家提供的对照预先进行检测，检测结果相符后方可投入正常使用。7、对于结果检测值处于无效区和灰区的样本必须进行全过程的重复检测并根据重复检测值报告结果。本文归纳了结核病细菌学检验所包括的4项基本技术（涂片染色镜检、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定）以及结核杆菌临床基因扩增（PCR）检验技术、分枝杆菌快速培养及药物敏感性试验技术、免疫学有关检测技术的国家规范。结核病实验室检查，特别是细菌学检查是结核病确诊和治疗的主要依据。虽然这些常规检查方法在技术上比较成熟，但笔者认为尚存在以下几个问题：1、结核病诊断方法，目前只是在结核病防治系统内初步得到规范和质量控制，但结核病最初的诊断约85%是在综合性医院里，而恰恰是在综合性医院里结核病的细菌学诊断尚不够规范且水平参差不齐，所以加强和提高综合性医院的结核病细菌学诊断水平是我们今后工作的重点之一。2、结核病的诊断技术目前还处在较低的水平，国际推荐的涂片和培养方法也还分别存在着特异性差、敏感性低和结果报出时间太长的不足，因此不断加强结核病诊断新技术的研究和开发仍然是十分必须的。结核菌的快速培养系统是一项得到国际认可的结核菌检测技术，大大提高了培养结果的报出时间，但由于仪器设备昂贵，检测成本太高而较难推广普及。敏感、特异、快速、经济、个体化是今后结核病实验室诊断的发展方向。鉴于结核病实验室检查、特别是细菌学检查在结核病控制工作中的重要性，为保障相应检查项目结果的可靠性，要求相应的检查项目必须由经过培训并考核合格的专职人员完成，且开展相应检查的实验室应具备安全操作设施并制定实验室内部质量控制措施，同时接受专业结核病参比实验室的质量控制督导和培训。结核病的免疫学诊断十几年来国内外学者一直从MT培养滤液中提纯蛋白质抗原，由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时。因此，近年来，笔者研究室应用基因工程技术克隆、表达MT基因，简便地获得了大量MT单一的蛋白抗原(如CFPl0、ESAT6、MPT63、MPT64、Ag85A、Ag85B、KatG、16ku、3Sku、65ku等蛋白)，研究其诊断应用价值。(1)血清学诊断20世纪70年代应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中结核特异性抗体，成为结核病常用的辅助诊断手段之一，尤其是近十几年来金标免疫斑点法检测抗原抗体反应已成为无需特殊仪器的快速诊断技术。由于结核患者免疫功能不同而导致对MT抗原识别的差异，此外结核患者对抗原的识别存在阶段特异性，目前任何一个单一的抗原或商品化的组合抗原检测试剂盒都无法检测出所有结核患者血清中的抗结核抗体，结核病患者的抗体反应是针对许多MT抗原的。因此，筛选多个纯化的结核病的特异性抗原组成联合抗原是目前血清学诊断的研究方向。特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值。TB-DOT\TB-CHECK\TB-PPD。MPT64结核杆菌分泌到体外的蛋白质。(2)皮肤试验结核菌素、纯蛋白衍生物(PPD)皮肤试验是最常用且最简便的一种结核分枝杆菌感染诊断方法，但由于PPD中含有许多分枝杆菌共同的抗原，PPD皮试阳性并不能鉴别是因为MT复合群感染还是接触环境中NTM或卡介苗接种后造成的致敏。因此，PPD皮试诊断的特异度差，用该方法进行结核病流行病学调查获得的结核分枝杆菌感染率并不能真正反映人群中结核分枝杆菌感染的实际状况。目前国内外学者通过动物模型或临床试验研究纯化抗原、合成多肽和重组蛋白，筛选致病性结核分枝杆菌表达而BCG不特异抗原，以期建立新的结核皮肤诊断试剂。假阳性，假阴性，无反应。PPD阴性，经1--3周再试验，如PPD阳性，结核。PPD阴性，不考虑结核。(3)双抗体夹心E