2024年度-公开课微生物的实验室培养人教选修

公开课微生物的实验室培养人教选修1目录contents微生物实验室培养概述微生物营养与培养基微生物接种与培养技术微生物分离纯化技术微生物计数与生长测定微生物菌种保藏与复苏实验安全与废弃物处理201微生物实验室培养概述3010204培养目的与意义了解微生物的生长繁殖规律探究微生物的生理生化特性为微生物的工业应用提供基础数据促进微生物学领域的研究与发展034将微生物接种于液体培养基中，通过振荡或静置进行培养。液体培养固体培养半固体培养将微生物接种于固体培养基表面或内部，通过观察菌落形态和生长情况来判断微生物的种类和特性。介于液体培养和固体培养之间的一种培养方法，常用于观察微生物的运动性和扩散性。030201培养类型与方法5无菌器具如无菌吸管、无菌移液管等，用于取样、接种等操作，保证实验的无菌性。高压蒸汽灭菌器对培养基、器皿等进行灭菌处理，保证实验的准确性和可靠性。显微镜观察微生物的形态和结构，判断其种类和特性。无菌操作台提供无菌操作环境，避免杂菌污染。恒温培养箱提供适宜的温度和湿度条件，促进微生物的生长繁殖。实验室设备及要求602微生物营养与培养基7碳源氮源无机盐生长因子微生物营养需求01020304提供微生物细胞合成所需的碳元素，如葡萄糖、蔗糖等。提供微生物合成蛋白质、核酸等含氮物质的原料，如铵盐、硝酸盐等。维持微生物细胞渗透压、酸碱平衡以及酶活性，如磷酸盐、硫酸盐等。某些微生物生长所必需的微量有机物质，如维生素、氨基酸等。8

培养基类型与成分天然培养基成分不确定，如麦芽汁、牛肉膏蛋白胨培养基等。合成培养基成分明确，根据微生物营养需求设计，如MS培养基、查氏培养基等。选择性培养基加入某种试剂或化学物质，依据微生物的某种特性进行选择培养，如伊红美蓝培养基用于筛选大肠杆菌。9按照一定比例称取各种成分，混合均匀后调节pH值至适宜范围。培养基配制采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法等方法对培养基进行灭菌处理，以消除杂菌污染。在配制过程中要注意避免产生沉淀或分层现象，确保培养基成分均匀分布。同时，根据微生物的不同需求，可以选择添加适当的抗生素、抗氧化剂等物质以提高培养效果。培养基灭菌培养基配制与灭菌1003微生物接种与培养技术11通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。平板划线法将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释涂布平板法用接种针将菌种穿刺接入半固体培养基中，此法用于观察细菌的运动能力和保藏菌种。穿刺接种法接种方法12pH值微生物的生长还需要适宜的pH值。不同种类的微生物对pH值的要求不同，因此在实验室培养中需要选择合适的缓冲液或调节剂来控制pH值。温度微生物的生长需要适宜的温度，不同种类的微生物对温度的要求不同。在实验室培养中，一般通过恒温培养箱或水浴等方式控制温度。湿度湿度对微生物的生长也有重要影响。在固体培养基上培养微生物时，需要保持一定的湿度，以利于菌落的生长和繁殖。光照某些微生物的生长需要光照，而另一些则不需要。在实验室培养中，可以通过控制光照时间和强度来满足不同微生物的需求。培养条件控制13通过观察菌落的大小、形状、颜色、透明度等特征来判断微生物的种类和生长情况。菌落形态观察通过定期测量微生物的生长量（如菌落直径、菌液浓度等），绘制生长曲线，了解微生物的生长规律和特点。生长曲线测定检测微生物代谢产生的物质，如有机酸、酒精、抗生素等，以了解微生物的代谢类型和产物特点。代谢产物检测通过一系列的生理生化试验，如糖发酵试验、蛋白质分解试验等，进一步了解微生物的生理特性和分类地位。生理生化试验生长现象观察与记录1404微生物分离纯化技术15通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。原理灭菌接种环、取菌种、连续划线、培养观察。操作步骤操作简单，但易产生杂菌污染，分离效果相对较差。优缺点平板划线法16操作步骤制备稀释液、涂布平板、培养观察。原理将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。优缺点能够分离得到单菌落，但操作相对复杂，且对菌液的浓度有一定要求。稀释涂布平板法17123利用液体培养基对微生物进行增菌培养，然后通过离心、过滤等手段将微生物分离出来。液体培养基分离法利用选择性培养基对特定种类的微生物进行筛选和分离，如利用高盐培养基分离耐盐微生物。选择性培养基分离法在显微镜下直接对微生物进行观察和操作，如利用显微操作器对微生物进行单细胞分离。显微操作法其他分离纯化方法1805微生物计数与生长测定19原理利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。缺点不能区分死菌和活菌。优点直观、快速。注意事项保证计数室清洁无污染，盖玻片下无气泡，计数时通常选择计数室四角及中央的5个中方格内的菌体进行计数。显微镜直接计数法20原理优点缺点注意事项比浊法微生物的生长引起培养物混浊度的增高，通过测量培养液的混浊度来间接测量微生物的生长量。准确性较低，受多种因素影响。操作简便，可用于连续测定。选择合适的比浊管，保证比浊管清洁无污染，比浊前需充分摇匀。21原理：将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。平板菌落计数法22优点结果准确可靠，可测定样品中的活菌数。缺点操作繁琐，需要时间较长。注意事项选择合适的稀释度，保证平板表面干燥、无菌落生长；涂布时要均匀，不要出现堆积现象；培养条件要适宜，包括温度、湿度和pH值等。平板菌落计数法2306微生物菌种保藏与复苏24方法常用的菌种保藏方法包括斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、滤纸保藏法、真空冷冻干燥保藏法等。液体石蜡保藏法向斜面菌种培养物中加入灭菌后的液体石蜡，使其与空气隔绝，降低菌种代谢活性。真空冷冻干燥保藏法将菌种悬浮液进行真空冷冻干燥处理，然后密封在安瓿管中保藏。原理菌种保藏是通过降低微生物体内的代谢活性，使其处于休眠状态，从而达到长期保存菌种的目的。斜面低温保藏法将菌种接种在斜面培养基上，置于4℃左右的冰箱中保藏。滤纸保藏法将带有菌种的滤纸放入密封袋中，低温干燥保藏。010203040506菌种保藏原理与方法25接种后需对培养物进行定期检查，确保菌种生长正常。复苏操作需在无菌条件下进行，避免杂菌污染。复苏前需对保藏菌种进行仔细检查，确保无杂菌污染。操作步骤：从保藏库中取出菌种→在无菌操作台内打开安瓿管或取出滤纸→将菌种接种到适宜的培养基上→置于适宜的温度和湿度条件下培养。注意事项菌种复苏操作及注意事项26菌种保藏库管理规范保藏库环境要求保藏库应位于阴凉、干燥、通风良好的地方，避免阳光直射和高温高湿环境。菌种存放要求菌种应按种类、编号、保藏日期等信息有序存放，便于查找和管理。定期检查与维护定期对保藏库进行清洁、消毒和除湿处理，确保环境符合菌种保藏要求；同时定期对菌种进行检查，及时淘汰污染或变异的菌种。安全与保密措施保藏库应设置门禁系统和监控设备，确保菌种安全；同时建立菌种信息档案和保密制度，防止信息泄露。2707实验安全与废弃物处理28实验前必须充分了解实验步骤和操作规程，确保个人和他人的安全。穿戴适当的防护服，如实验服、手套、护目镜等，避免直接接触有害物质。使用尖锐工具或玻璃器皿时要小心谨慎，避免割伤或刺伤。熟悉紧急情况下的应对措施，如火灾、泄漏等，知道如何正确使用灭火器和紧急洗眼器等设备。01020304实验安全注意事项29根据废弃物的性质和危害程度进行分类，如感染性废弃物、化学废弃物、放射性废弃物等。化学废弃物应按照其化学性质进行分类，使用专用容器收集，并标注明显的标识和警示信息。对于感染性废弃物，必须在指定地点进行高压灭菌或化学消毒处理，确保无害化。放射性废弃物应严格按照国家相关法规和标准进行处理和处置，确保不会对环境和人类造成危害。废弃物分类与处理流程30实