色谱柱柱压升高的常见原因及处理办法

色谱柱柱压升高的常见原因及处理办法 1 1 3 3色谱柱是化学分析中常用的一种分离工具，但在使用过程中可能会出现柱压升高的问题。虽然柱压在长时间使用过程中缓慢增加是正常现象，但如果柱压突然升高，则需要及时排查原因并采取解决办法。以下是常见的柱压升高原因及解决方法：如果确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。色谱柱入口筛板堵塞是最常见问题之一，会导致柱压升高、色谱峰拖尾、塔板数降低等问题。通常分析的样品中微粒杂质最有可能堵塞色谱柱入口，因此分析时需要先过滤或者离心，乳浊或浑浊样品应以0.25μm滤膜处理，也可以用针头过滤器过进样器与泵密封垫的磨损也会带入微粒，在进样阀与色谱柱之间使用0.25μm或0.45μm的在线过滤器，通常可避免这类问题。色谱柱反压的逐渐增加通常说明在线过滤器需要更换；筛板部分堵塞或色谱柱进口处固定相塌陷会如果确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。填料污染的原因剖析2)蛋白类样品累积：生物类样品易在柱头端2)使用保护柱，需要注意的是，保护柱的柱压，柱压提高10%以上就建议更换柱芯。法进行色谱柱维护，目的是定期的去用洗脱能力较4)如检测这类产品的色谱柱出现超压，柱效不符合说明书的异常再生方法进行处理。如还是不能2)定期进行色谱柱维护冲洗，推荐去除蛋白溶剂(乙腈-水-三氟乙酸=4)因这类原因，柱子一旦出现柱压升高，柱效下降第3页共9页3.色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶如果确定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换2、老化温度应高于分析使用温度25℃以上，但不能超过固定液允许的最解度约为100mg·L-1,且在pH1~9的范围内溶解的硅胶量几乎是常量，考虑到第4页共9页键合相硅胶填料则由于键合层的屏蔽作用，使填料大增加，如现在广泛使用的反相色谱填料C18(十八烷基硅烷键合硅胶),其pH适用范围可达2~10。当流动相pH值超出酸性范围时，键合相易发生水解而流目前，广泛使用的填料颗粒粒径范围在3~10μm,孔径在6~10nm,色谱物质会破坏硅胶填料柱，正丁醇、二氯甲烷等极性小样品因素第5页共9页待测试样中的各种组分与填料之间应具有化用氨基键合柱时，应避免使用含羰基的化合物和等，以免固定相中的NH2和酐、酮发发希夫(Schiff)缩合而使固定相破坏。其它因素影响色谱柱寿命的因素很多，除流动相和样品因压力传感器故障除外),以下列举了部分常见原因及解决办法：解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。解决方法：如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细解决方法：如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然第6页共9页进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡体积的20倍左右。况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度(注意把填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH=2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。第7页共9页在柱二端包起来，放到盒子里室温避光保存。毛细裁成二块，分别插在毛细管二段。填充柱用小塑料来。因为分析室有许多化学试剂，特别在橱内会有谱柱。放置时也要有序放置，毛细管柱还是用盒子装好拆下后，两头用橡胶垫密封，橡胶垫原本色谱盒去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器，但滤器保护柱填料应与分析柱一致，粒径可较分析柱一定次数的样品分析(50~100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况用色谱纯级，水用石英亚沸水或其它超纯水时，在滤膜过滤。要注意区分水系和油系，二者不可混用第8页共9页染。装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000psi(磅/平方英寸),但过高及(2)当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。(3)使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时，一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃,以低于40℃为宜，相的水解和硅胶的溶解，从而，使填料性质改变，柱峰形。目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2~10,但在实际使用时第9页共9页反相键合硅胶柱适宜的保存环境是纯甲醇，如分析用流动相为缓冲液2有机溶剂，可先用较低甲醇含量(<20%)的甲醇2水置换掉原来的纯甲醇，再进分析用流动相，以防止在柱内发生盐的沉淀；试验冲洗系统并最终过渡到纯甲醇冲洗，