自身免疫性肝炎发病机制及相关干预研究进展

自身免疫性肝炎发病机制及相关干预研究进展03定义Sept2013自身免疫性肝炎AutoimmuneHepatitis(AIH)原因不明，主要发生于女性，以血清转氨酶升高、高免疫球蛋白G和/或γ-球蛋白血症、自身抗体、组织学界面性肝炎为特征的进行性肝脏炎症性疾病。免疫抑制治疗有效，严重者可导致肝硬化、肝衰竭。NatRevGastroenterolHepatol,2011.8(6):p.320-9.PART1AIH的流行病学”AIH的GWAS，蛋白组学，代谢组学研究进展AIH与肠道菌群及微生物组学研究进展流行病学全球范围内AIH发病率和患病率的差异DigestiveDiseasesandSciences,2017.62(9):p.2277-2292WorldJournalofGastroenterology,2016.22(19):p.4651AIH在西方国家更为多见西欧发病率：0.8～3人/10万人患病率：11～24人/10万人。亚洲国家AIH相对较少以色列发病率：0.67人/10万人患病率：4人/10万人；日本AIH发病率为0.08～0.15人/10万人。”流行病学自身免疫性肝炎诊断和治疗共识（2015）,中华医学会.JournalofGastroenterologyandHepatology,2015.30(8):p.1230-1236目前我国尚无AIH的发病率和患病率统计数据，但近年来报道发病率明显增加。亚洲与欧洲AIH病人的临床特征比较AIH呈全球性分布，可发生于任何年龄段，大部分病人年龄大于40岁。最近，我国开展的一项全国范围内的回顾性调查（入选病人年龄大于14岁）。发现，AIH的峰值年龄为51岁（范围：14～77岁），89%为女性病人。疾病防治链条预防消除病因阻断发病机制纠正异常病理生理效应替代治疗AIH病因不明及遗传易感等复杂性特征导致预防和消除病因困难；发病后针对纠正病理生理效应和替代治疗临床疗效不佳或副反应严重；从发病机制着手研究AIH的干预手段是理论上的最佳选择。JournalofHepatology2014vol.60j210–223

AIHarecomplexdisorders

meaningtheyarelikelyassociatedwiththeeffectsofmultiplegenesincombinationwithenvironmentalfactors暴露异位显性基因表观遗传学药物性别感染年龄免疫基因非免疫基因发病机制AIH发病机制的“基因易感性学说”和“分子模拟学说”已成为学术界的普遍共识。

纠正“免疫调节紊乱”是当下的研究热点。”JCliniHepatol,June2011,Vol.27,No.61AIH是一种“复杂遗传病”多种基因单独或共同作用，增强或减弱个体的遗传易感性遗传易感性肝细胞损伤机制Th1/Th2；Treg/Th17；NKTcell免疫调节紊乱具有遗传易感性个体暴露于与人体自身抗原具有相似表位的外源抗原后通过分子模拟机制激发自身抗体的产生自身抗原与分子模拟发病机制T细胞介导的细胞毒性作用抗体依赖性细胞介导细胞毒性作用诱发因素：病毒、细菌、药物、食物等外源性抗原过去认为基因组学基因组学转录转录组学蛋白祖学代谢组学翻译功能AIH的遗传因素与全基因组关联分析（GWAS）GWAS（Genome-wideassociationstudy），即全基因组关联分析，是指在人类全基因组范围内找出存在的序列变异，即单核苷酸多态性（SNP），从中筛选出与疾病相关的SNPs。2009年第一项关于PBC的GWAS研究发表。2010年第一项关于PBS的GWAS研究发表。2014年第一项关于AIH的GWAS研究发表。AILD的遗传因素与全基因组关联分析（GWAS）GWAS发现AIH明确的遗传因子与主要组织相容性抗原（HLA）有很强的相关性，主要位于6p21染色体上Gastroenterology2014;147:443–452临床存在AIH/PBC或PSC重叠综合征，GWAS研究发现遗传学上三种疾病遗传易感位点也存在“重叠”。例如，SH2B3和MMEL1同时出现于PBC、PSC和AIH。Gastroenterology2014;147:443–452GWAS存在的问题目前制约遗传预测的关键因素是没有足够大的样本获得足够精确的多基因风险积分（polygenicriskscore）——相较PBS和PSC，关于AIH的GWAS研究仍较少，尚未见关于II型及III型AIH的研究报道。东西方人群中可能存在极大的遗传易感性差异，这使得针对我国人群GWAS研究显得格外迫切。仅通过基因学特征不能准确预测AILD发病，需要进一步建立联合包括基因、地域、环境及各种诱因的风险预测模型。Farh,K.K.,etal.,Nature,2015.518(7539):p.337-43.GWAS共同位点和疾病表型的聚类结果揭示常见人类疾病的共同遗传特征

大部分免疫调控疾病的共同遗传位点可能形成了一个复杂网络；虽然两种自身免疫性疾病之间共有的遗传位点不超过38%，但每种自身免疫性疾病平均有69%的相关遗传位点与其它一些自身免疫性疾病共有。通过GWAS揭示消化免疫性疾病共同遗传特征炎症性肠病IBD自身免疫性胃炎AIG自身免疫性胰腺炎AIP自身免疫性肝病AILDNatGenet：PSC与其他自身免疫病之间的关系被确定NatGenet.2013Jun;45(6):670–675.

2013年4月发表在《NatGenet》杂志上的一篇研究显示，约70%的PSC病人同时患有IBD。该研究显示，有半数新相关基因区域为与炎性肠病（IBD）共有。这项研究首次明确证明了PSC在基因上与IBD相关。通过GWAS揭示AIH与其他消化免疫性疾病具有共同遗传特征Nature:GWAS位点精细化定位到单个碱基

2017年6月Nature在线发表了一个国际团队的最新成果：他们在炎症性肠病中，在GWAS分析后进行精细化定位(fine-mapping)，进一步缩小易感位点，排除掉仅有关联性，而没有因果性的序列变异。这项研究可以把致病变异锁定到单碱基精度，为了解炎症性肠病的发病机制打下了重要的基础，也为新药的研发提供了潜在的新靶点。Nature.2017July13;547(7662):173–178.GWAS是在全基因组水平找出和疾病有关联的位点，从而了解疾病的遗传学机理。通过GWAS分析找到的基因组易感位点往往范围很大，其中很多序列变异仅仅具有统计学意义上的相关性(association)，而并不具有逻辑上的因果性(causation)。自身免疫性肝炎的代谢组学研究基因组学转录转录组学蛋白祖学代谢组学翻译功能代谢组学是对某一生物或细胞在特定生理时期内分子量小于1000的代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科。目前代谢组学已被广泛应用于疾病诊断（阐明疾病发病机制）、探讨药物治疗的药理机制进一步寻找新药作用靶点等方面。（48%）（52%）

一项回顾性研究表明，经病理学确诊的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）病人48%(26/54例)血清抗核抗体或抗线粒体抗体阳性ClinicRevAllergImmunol(2013)45:143–14814三种NASH哺乳动物模型观察到AIH组织学特征。肝脏本身的代谢性损伤影响AIH

另一项回顾性研究表明，初始ALT升高的SMA阳性病人22%在长达12年随访过程中被诊断为AIH。R.Healeyetal./AutoimmunityReviews15(2016)668–672肝脏本身的代谢性损伤影响AIHMüller等研究表明，给予高脂饮食的CYP2D6小鼠期AIH表型明显加重，提示NASH等肝脏代谢性疾病的背景可能促进AIH的发生及发展。ClinicRevAllergImmunol(2013)45:143–14814肝脏本身的代谢性损伤影响AIH代谢组学研究→自身免疫性肝炎

J.ProteomeRes.2014,13,3792−38012014年我国的研究团队，采用核磁共振氢谱技术对自身免疫性肝炎病人的血清进行了代谢组学分析，发现了包括乙酰乙酸盐、丙酮、柠檬酸盐和肌酸在内的9个自身免疫性肝炎的代谢组学辅助诊断标志物，引起国内外代谢组学医学专家的广泛关注。自身免疫性肝炎的代谢组学研究

Mol.BioSyst.,2016,2016年一项基于小鼠急性自身免疫性肝炎模型的代谢组学研究发现，胆汁酸与视黄醇与自身免疫肝病早期预后相关。自身免疫性肝炎的代谢组学研究AIH的代谢组学研究大有可为需要AIH大样本代谢组学研究报道；需要随访研究确认代谢组学标志物与临床预后的关系；需要通过功能学研究验证。蛋白质组学Proteomics自身免疫性肝炎的蛋白质组学研究基因组学转录转录组学蛋白组学代谢组学翻译功能蛋白质组学指“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质表达水平，翻译后修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识自身免疫性肝炎的蛋白质组学研究HEPATOLOGY,March20082008年通过蛋白质组学研究鉴定出包括肝精氨酸酶、角蛋白8/18、热休克蛋白60/70/90及VCP(含缬酪肽蛋白)在内6种潜在的AIH自身免疫性抗体。自身免疫性肝炎的蛋白质组学研究Lietal.JournalofTranslationalMedicine2013,11:1462013年一项蛋白质组学研究提示，补体C3及α2巨球蛋白在ConA诱导动物模型及AIH病人血清中明显升高。近几年，科学界开始重视微生物，尤其是肠道细菌对人类的各个方面的影响。最新的一期国际著名期刊《Cell》杂志竟然破天荒地用了整整一期，几十篇文章来专门聚焦微生物研究，为这一领域再烧上一把烈火。而他们的社论主题取名为：LivinginTheirWorld（活在它们的世界中），这里的“它们”指的就是微生物。AIH的微生物组学研究LiveinTheirWorld《Cell》杂志评论中一段文字比较有意思：我皱起了眉头。“它们只是细菌。它们不思考，也不作计划。它们只是…存在。”“只是存在？它们做我们梦寐以求的事情。它们繁殖旺盛、强壮有力，它们可以通过化学物质和光线交谈，它们可以组成团队—哦，一支由它们组成的团队。数百万强大的（细菌）在一起完美工作。如果我们能够这样合作，哪怕是我们接近这样的一种状态，我们就将解决所有问题。它们可以生活在海洋底部。它们可以住在火山里面。它们可以永远活下去。”---RobinSloan，一个热爱微生物的人微生物组学研究LiveinTheirWorldAIH的微生物组学研究马雄，自身免疫性肝病2016年研究进展，中华肝脏杂志2017年2月第25卷第二期

PSC病人中炎症性肠病（IBD）发生率可高达60%～80%，正是这两种肠肝疾病间存在的特殊联系使得近年来围绕PSC的肠道微生态研究成为热点。回顾文献发现，PSC病人肠道微生态的多样性较单纯IBD病人和健康对照组降低，并且表现出独特的肠道微生物群落构成。微生物组学研究肠道菌群在AILD中的作用AIH的微生物组学研究AIH发病机制新视角——“作恶”的肠道细菌最近，耶鲁大学的研究小组发现一种称之为Enterococcusgallinarum的细菌能够自发地转移到肠道外，进入淋巴结、肝脏和脾脏。小鼠模型证实，E.gallinarum启动了自身抗体和炎症产生，AIH病人肝脏中也检出该菌。Science.2018Mar9;359(6380):1156-1161.doi:10.1126/science.aar7201研究小组证实，用针对E.gallinarum的抗生素或疫苗可抑制小鼠的自身免疫。并认为使用抗生素和疫苗进行治疗可能是改善AIH病人生活很有前景的办法。AIH发病机制新视角——“作恶”的肠道细菌自身免疫性肝炎的微生物组学研究肠道菌群在AILD研究存在的问题研究中观察到的PSC病人肠道微生态的改变究竟是因还是果虽无定论，但已现曙光。需多中心、更大样本的前瞻性研究。文献报道抗生素可能改善PSC病人的ALP水平，但长期使用抗生素也可能增加肠道微生态的紊乱，失去肠道共生菌及其代谢物对PSC等胆管疾病的保护作用。在微生物组学基础上，需进一步通过功能学实验验证。自身免疫性肝炎微生物组学研究口腔菌群——Cell子刊：揭示口腔细菌可能导致结直肠癌恶化CellHostMicrobe.2016Aug10;20(2):215-25.

来自以色列希伯来大学等机构的研究人员研究结果显示：口腔的梭杆菌可能通过血液精确地靶向到达直结肠癌，并增殖和加快结直肠癌发展。自身免疫性肝炎微生物组学研究口腔细菌保护肿瘤细胞免受免疫攻击Immunity期刊上发表的一项最新研究表明，口腔致病菌——具核梭杆菌能保护多种肿瘤细胞免于被免疫细胞杀死。这一发现可能为癌症病人的治疗开辟新的途径。ImmunityVolume42,Issue2,17February2015自身免疫性肝炎的微生物组学研究口腔菌群与AIH的关系？尚未见口腔菌群与AIH相关的微生物组学研究AIH时口腔菌群是否对免疫有调控作用？口腔菌群紊乱能否通过分子模拟机制在AIH发病的机制中同样扮演重要角色？PART2AIH的发病机制研究进展”AIH动物模型研究进展基于发病机制研究的干预方法研究进展动物模型1992年，Tiegs等首次利用刀豆蛋白A（concanavalinA，ConA）在小鼠中成功建立了T细胞依赖的实验性肝损伤动物模型，是目前最广泛用于研究AIH发病机制的动物模型，但其是一个急性肝损伤模型，小鼠体内未能出现自身抗体和肝脏纤维化，故并不能模拟AIH的发病过程。诱导AIH动物模型的五种途径的理论机制Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.2018.13:11.1–11.46为深入研究AIH的发病机制首先需要理想的动物模型。目前国内外尚无理想的慢性AIH动物模型。06JClinInvest,1992.90(1):196-203刀豆蛋白A（conA）1992J.Exp.Med,2008.Vol.205No.61409-1422JAutoimmun.2017Mar;78:39-45.对于Ad-CYP2D6模型的可重复性提出争议异种肝脏匀浆与弗氏完全佐剂动物模型1972ApplMicrobiol.1972Oct;24(4):634-72008过表达CYP2D6（腺病毒作为载体）20162018我们的探索文章正在投稿中动物模型CYP2D6-Admousemodel2008年MartinHoldener等的研究显示，用腺病毒作为载体过表达CYP2D6感染野生型小鼠，能够打破小鼠的自身免疫耐受，产生淋巴细胞浸润、肝脏纤维化和自身抗体的产生。J.Exp.Med.2008.Vol.205No.61409-1422”2017年Matthias等的研究对于此模型的可重复性提出了异议。他们在腺病毒为载体过表达CYP2D6的几种品系小鼠中均没有观察到AIH的产生。JAutoimmun.2017Mar;78:39-45.动物模型CYP2D6-Admousemodel研究MartinMatthias载体AdenoviralAdenoviral小鼠品系FVB/NNOD/Ltj；BALB/c;C57Bl/6;FVB/N;

感染方式

intraperitoneally+Intravenouslyintravenously感染次数OnceOnce取材时间1,2,4,8weekspostadenoviralinjection12weekspostadenoviralinjection两个研究结果不同的原因可能与感染方式、取材时间、不同来源小鼠的基因易感性有关。也可能与单次注射腺病毒基因表达的不稳定性有关。建立一个稳定可重复的AIH动物模型，在体内模拟AIH慢性炎症的发生发展过程，是研究其发病机制的基础，也是首当其冲需要解决的关键问题。”动物模型动物模型我们在单独注射Ad或单独质粒过表达CYP2D6的小鼠中也未诱发AIH的产生动物模型我们与华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学系冯作化教授合作，在前期研究的基础上，探索出一套新的造模方案，腺病毒和质粒反复多次在小鼠肝脏过表达CYP2D6抗原，在造模第4、5、6周取材。观察到小鼠肝脏出现AIH特异性组织学改变、逐渐加重的纤维化、自身抗体的产生和淋巴细胞浸润。天狼星红染色红色显示胶原纤维：纤维化逐渐加重动物模型

激光共聚焦观测到模型鼠肝脏中淋巴细（CD4+T细胞为主）的浸润

间接Elisa法：我们提取小鼠自身肝脏组织蛋白包被Elisa板，收集不同天数AIH模型组和正常组小鼠血清，分别用各组小鼠自身血清免疫其肝脏组织蛋白，检测其是否发生抗体抗原结合反应。如左图所示，正常组无显色阳性反应或阳性反应较弱，而AIH模型组小鼠阳性反应较强，经统计学分析有显著差异。说明小鼠体内产生了自身抗体。

小鼠体内自身抗体的具体类型我们正在研究中。

同济医院肝病研究所与华中科技大学基础医学院生物化学系实验室，在不同的实验环境下由不同的执行者实施相同的造模方案，均成功重复并模拟出了AIH模型。相关论文已经投稿。这为我们在后续AIH方向的研究奠定了良好的基础。d0d42目前我们在同济医院肝病研究所已经成功熟练稳定重复出此模型我们已将AIH小鼠模型进行蛋白质组学信息采集分析，筛选并验证差异性蛋白，结合临床标本进行更进一步的机制研究动物模型发病机制①遗传易感性AIH的遗传易感性主要与6号染色体短臂上的人类白细胞抗原（HLA）区域相关，尤其是特定的等位基因DRB1的突变。ChinJHepatol，December2017，V01．25，No．12Autoimmunehepatitis.Lancet,2013.382(9902):p.1433-1444遗传易感人群病毒、细菌、药物、食物等外源性抗原肠道菌群紊乱CYP2D6?发病机制自身抗体Th1/Th2紊乱Treg/Th17紊乱NKTcellγδTcellM1/M2巨噬细胞比例失调炎症因子分泌失调效应T细胞颗粒酶等综合国内外研究：肠道菌群紊乱可能作为原发始动因素或者继发改变在肠肝对话中传递外源性抗原，通过分子模拟机制在AIH发病的机制中扮演重要角色。发病机制②自身抗原与分子模拟循环中出现多种自身抗体是AIH的特征。细胞色素P450ⅡD6(CYP2D6)是目前鉴定得较为清楚的2型AIH的自身抗原。

表位CYP2D6193-212CYP2D6257-269CYP2D6321-351CYP2D6410-429CYP2D6373-389识别比例（2型AIH）93%85%51%13%7%GASTROENTEROLOGY,2010,Vol.139,No.1HEPATOLOGY,Vol.43,No.2,Suppl.1,2006

某些外源性抗原可能含有与人体自身抗原相似的表位。入侵人体后，活化并促进有着相似抗原表位的自身抗原的提呈，激活细胞毒性T细胞，对表达自身抗原的肝细胞产生特异性杀伤作用。分子模拟学说：发病机制③免疫调节紊乱Treg/Th17细胞平衡Th1/Th2细胞平衡NKT细胞γδT细胞巨噬细胞AlimentPharmacolTher2013;38:887–913③免疫调节紊乱AIH病人外周血和肝脏浸润的淋巴细胞的比例差异Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.2018.13:11.1–11.46AIH病人肝脏中浸润的单个核细胞以CD4+T细胞为主，多聚集于门脉周围；CD8+T细胞也有浸润，但比其他慢性肝病少。Treg细胞数量的改变因统计时治疗因素影响而尚有争议。发病机制③免疫调节紊乱Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.2018.13:11.1–11.46由于免疫调节紊乱，AIH病人外周血和肝脏炎症因子表达的改变促炎因子IL-6等在AIH病人中相对于正常人群或其他慢性肝炎病人均增高。发病机制③免疫调节紊乱——Treg/Th17细胞平衡Autoimmunehepatitis.Lancet,2013.382(9902):p.1433-1444Th17与Treg均来源于初始T细胞，且两者的分化均需要TGF-β1的参与。前者可诱导严重的自身免疫反应，后者对维持机体免疫耐受起重要作用。Treg/Th17平衡紊乱，可能是AIH发生的重要发病机制之一。发病机制③免疫调节紊乱——Th1/Th2细胞平衡Th1细胞主要产生Th1类细胞因子（IL-2,IFNγ等），由转录因子T-bet调控。有效介导细胞免疫。Th2细胞主要产生Th2类细胞因子（IL-4,IL-10等），由转录因子GATA-3调控。介导体液免疫和抗体产生。Behfarjam等的研究发现，在AIH病人中，T-bet基因的mRNA表达及外周血IFNγ水平显著升高，而GATA-3基因表达较正常人无显著差异，提示Th1细胞数量增多，Th1/Th2细胞平衡可能在AIH的发病中起着重要作用。ChinJHepatol，December2017，V01．25，No．12发病机制研究进展③免疫调节紊乱——NKT细胞关于Ⅱ型NKT细胞的研究尚少，但有研究表明，在conA诱导的小鼠肝脏免疫损伤模型中，Ⅰ型NKT细胞促使免疫介导肝损伤的发生，而Ⅱ型NKT细胞起到保护作用。NKT细胞NKT细胞表面既有T细胞受体TCR，又有NK细胞受体的特殊细胞亚群。在先天性和适应性免疫应答均有作用。AIH发生时，Ⅰ型NKT细胞产生促炎型细胞因子，促进Th1、Th17的炎症作用，刺激肝内抗原特异的CD8+淋巴细胞的免疫反应，诱导肝细胞的凋亡。AIH病人体内的NKT细胞产生IL-4等抑炎因子水平降低。JCellPhysiol.2009February;218(2):246–250.发病机制研究进展③免疫调节紊乱——γδT细胞γδT细胞执行固有免疫功能的T细胞，其TCR由γ和δ链组成。在外周血中只占CD3+T细胞的0.5%～1%，在肝脏中相对较丰富（占T细胞的15%~25%）正常人群（HC），AIH（A：自发性；R：诱发性）病人肝脏γδT细胞内颗粒酶B染色的百分比和MFI（平均荧光强度）γδT细胞可以识别1型MHC类分子提呈的特异抗原，分泌促炎性细胞因子IL-17和IFNγ。AIH病人外周血和肝脏中γδT细胞数量增多，产生更多的炎性因子IFNγ和致肝损伤的颗粒酶B。HEPATOLOGY,Vol.52,No.3,2010发病机制研究进展③免疫调节紊乱——巨噬细胞CD163为巨噬细胞的激活标记。最新研究表明，sCD163（可溶性）在AIH急性期明显升高，在正规激素治疗后恢复正常水平，但对激素不完全应答的病人体内sCD163仍处于高水平。AlimentPharmacolTher2016;44:1062–1070AIHNormal发病机制研究进展③免疫调节紊乱——巨噬细胞HEPATOLOGY,Vol.50,No.1,2009InactiveAIHActiveAIH一项包含51位病人和27位健康人的调查研究显示，自身免疫性肝病病人外周血单个核细胞及肝脏巨噬细胞增多，其迁徙能力增强，分泌TNF-α水平升高，IL-10分泌减少，TLR4表达增高。单核/巨噬细胞在AIH发生时在肝脏门脉周围浸润聚集。发病机制研究进展T细胞介导的细胞毒性作用CD4+Th1细胞激活CD8+细胞毒性T淋巴细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用CD4+Th2细胞将B细胞激活为浆细胞并分泌大量针对肝细胞抗原的自身抗体，后者与肝细胞膜上的蛋白成分反应形成免疫复合物炎性细胞因子的直接作用各种免疫细胞释放的毒性细胞因子直接破坏肝细胞Fas介导的细胞凋亡穿孔素、颗粒酶BNK细胞通过Fc受体识别免疫复合物后引起肝细胞破坏。穿孔素、颗粒酶B直接攻击肝细胞。Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.2018.13:11.1–11.46④基于以上因素最终导致肝细胞损伤发病机制”基于发病机制研究的干预方法研究进展基于发病机制的干预治疗研究进展目前临床治疗AIH的标准疗法是激素或联用硫唑嘌呤进行治疗，但疾病复发和药物副反应在临床上不可避免。故基于发病机制的替代性干预是亟待研究的问题。”激素和硫唑嘌呤在AIH中的作用机制DigDisSci.DOI10.1007/s10620-009-1122-8

基于发病机制的干预治疗研究进展现阶段Treg疗法由于临床试剂、GMP级别的房间设施，分离细胞技术要求及最终细胞治疗的制作非常昂贵。

GMP级别的Treg疗法的投入应用和越来越多的关于Treg细胞生物功能的认知有望生产更经济实用的，基于临床的替代终身免疫抑制剂的细胞疗法。CanadianJournalofGastroenterologyandHepatology.2016病人体内分离过滤并重输Treg疗法

利用Treg治疗AIH是最有希望的策略之一基于发病机制的干预治疗新进展体内分离回输Treg疗法目前广泛应用于临床尚有难度，寻找体内可以调控Treg比例的靶点，重建免疫平衡，诱导AIH肝炎免疫耐受，是一个新思路。”基于发病机制的干预治疗研究进展③免疫调节紊乱——Treg/Th17细胞平衡我们关注到IL-37b是一种近年来受关注的炎症抑制因子，尚无其诱导CD4+T细胞分化的相关报道。本项目组在研究中(国家自然科学基金,8160030049)发现，IL-37b在体内可通过改变IL-6/IL-10的分泌水平，协同TGF-β诱导CD4+T细胞向Treg转变。基于发病机制的干预治疗研究进展③免疫调节紊乱——Treg/Th17细胞平衡体内实验：在AIH小鼠体内过表达IL-37b，观察到其显著的缓解炎症的作用。并观测到治疗组小鼠体内Treg比例增加。IL-37b可以在肝脏同时上调IL-10的表达、下调IL-6的表达，增加Treg的比例，缓解AIH小鼠肝脏炎症（课题组相关论文已经投稿并接收）。机制研究正在进行，预实验证明IL-37b可能是通过改变肝脏巨噬细胞的表型影响细胞因子分泌。基于发病机制的干预治疗研究进展③免疫调节紊乱——Treg/Th17细胞平衡IL-27作为一个新型的细胞因子，具有免疫抑制与免疫促进的双重作用，在AIH中尚无研究，前期我们在AIH病人和造模小鼠血清中检测到IL-27高表达。体外实验证实：IL-27体外不能改变Treg的比例，但是可以增强Treg免疫抑制功能基于发病机制的干预治疗研究进展③免疫调节紊乱——Treg/Th17细胞平衡体内实验：IL-27可以缓解conA诱导急性免疫性肝损伤小鼠肝脏的炎症。IL-27预刺激的Treg回输入小鼠体内可以增强其治疗功能。（国家自然科学基金，8150041221；81471612）不同于IL-37b，IL-27是通过增强Treg的抑制功能而非增加其比例而实现保护作用。ConA+Treg(IL-27预刺激)ConA+Treg(无IL-27预刺激)

ConA模型组空白对照组基于发病机制的干预治疗研究进展③免疫调节紊乱——γδT细胞在弗氏完全佐剂诱导自身免疫性肝炎小鼠模型中，检测到AIH小鼠中γδT细胞数量增多，是IL-17的主要来源。清除肝脏γδT细胞可降低AIH小鼠的血清转氨酶水平ProginMicrobiolImmunol，Jun．2017，Vol