GB∕T 39104.2-2020 纺织品 抗真菌性能的测定 第2部分：平皿计数法

纺织品抗真菌性能的测定第2部分：平皿计数法Textiles—Determinationofantifung国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I●删除了ISO105-F02和ISO7218;●增加引用了GB/T20944.2—2007(见第2章);Ⅱ1GB/T39104的本部分规定了采用平皿计数GB/T20944.2—2007纺织品抗菌性能的评价第2部分：吸收法237.23桨式搅拌器(三角型):速度为6击/s～8击/s,具有相应的一次性容器。7.25冰箱：温度能保持在2℃~8℃,允差为±2℃。7.30水浴锅：一个温度可保持(46±2)℃,另一个温度可保持70℃~90℃。锅在121℃条件下灭菌20min,形成50mg/L的含阴离子表面活性剂的无菌水。使用按以下步骤制备的培养基。经验证后可用商业培养基代替。对于制备后不立即使用的培养基，应在5℃~10℃环境中储存，保质期1个月。8.4.1沙氏葡萄糖肉汤(SDB)灭菌后pH8.4.2马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)灭菌后pH5.6±0.24灭菌后pH8.4.4.1将10mL完全溶解并预热后的PDA(8.4.2)倒入灭菌后的试管中。8.4.5中和液SCDLP培养基吐温8030g灭菌后pH7.2±0.2如果不能充分中和，可调节吐温80或卵磷脂的用量，或加入其他中和剂。商业中和液经试验与9.4每次对不同类型的真菌进行传代培养时，使用经火焰灭菌后的铂接种环(7.4)或L型铂接种钩9.5将传代培养斜面培养基在(25±2)℃条件下的培养箱(7.6)中放置至少8d,并确认在5℃~10℃9.6在3个月内，将传代培养的真菌转移到新斜面培养基中，以便进一步培养和保存。每3个月传代一次。传代培养的真菌传代次数最多应不超过5次。不要使用超过3个月的真菌做进一步传代培养。5图1斜面培养基传代培养示意图10孢子悬液孢子悬液的制备和调节过程见图2。图2孢子悬液的调节步骤10.2在培养基中悬浮孢子10.2.1用短巴斯德吸管(7.10)或等效装置吸取0.5mL含阴离子表面活性剂的无菌水(8.3)(步骤1)。10.2.2分5次将其分散到PDA琼脂平板中心的孢子中，缓慢清洗表面(步骤2)。10.3从培养基中收集和分散孢子悬液10.3.1用短巴斯德吸管(7.10)或类似装置吸取10.2中孢子悬液。610.3.3吸吹100次或用振荡器(7.22)搅拌3次共20s,或用低超声波清洗5min,使孢子充分分散。10.5.3在10.5.2中加入5mL含阴离子表面活性剂的无菌水(8.3)。10.5.4充分吸吹使孢子分散或使用振荡器(7.22)搅拌3次共20s,或用低超声波清洗约5min,使孢子充分扩散(步骤5)。10.6.2确保孢子数量为1×10⁶CFU/mL～3×10⁶CFU/mL,且90%以上为无菌丝单孢子。至1×10⁶CFU/mL～3×10⁶CFU/mL,并重新检查孢子数量。10.7.1对于吸收法，用含5%SDB培养基的阴离子表面活性剂溶液将孢子悬液浓度调至1×10510.7.2对于转移法，仅在含阴离子表面活性剂的无菌水(8.3)中制备接种液(不需要5%的SDB)。10.7.4在3℃~4℃条件下冷藏孢子悬液，并在4h内使用。11.2.4中给出了用阴离子表面活性剂稀释稀释度为10-²~10-³的计数示例。7从样品上裁取代表性试样，并裁剪为合适尺寸，称取(0.40±0.05)g作为1个试样。分别取6个对照样和6个试样。d)将瓶盖和装有试样的螺口玻璃瓶(7.7)放入高压灭菌锅(7.3),于121℃(103kPa)灭菌11.1.2.4.2分别准确移取0.2mL10.7中制备的1×10⁵CFU/mL8911.2.3培养48h后洗脱对于吸收法，在培养后的各小瓶中分别加入20mLSCDLP培养基，盖紧瓶盖，按11.2.1洗脱。对于转移法，培养结束后，将各试样装入装有20mLSCDLP培养基的无菌袋或无菌螺口玻璃小11.2.4平皿计数法计数11.2.4.1.1制备11.2.1或11.2.3悬液作为稀释度为10°的稀释悬液。11.2.4.1.2用移液管(7.9)移取1mL11.2.1或11.2.3洗脱液，将其加入装有(9.0±0.1)mL含阴离子表面活性剂的无菌水(8.3)的试管中并混匀，作为稀释度为10-¹的稀释悬液。11.2.4.1.3依次重复以上步骤，分别制备稀释度为10°和10-¹的稀释系列用于“0”接触时间和稀释度为10°至10-⁴的稀释系列用于培养48h后测试。在直径为90mm装有SDA(8.4.3)的培养皿(7.2)中计数。11.2.4.2.1在SDA培养基表面进行计数。用塑料或热灭菌移液管将0.1mL洗脱液和0.1mL稀释系列扩散到SDA培养基表面(每个培养皿单独计数)。11.2.4.2.2在SDA培养基内部计数。分别用新的移液管从稀释系列中各取1mL分别注入2个培养皿(7.2)中。用水浴锅(7.30)将约15mLSDA加热到45℃~46℃,并加入培养皿中混匀。在室温中静置使之凝固。11.2.4.2.3将培养皿倒置，并在(28±2)℃条件下培养24h～48h,观察真菌菌落生长。11.2.4.3.1培养后，计数出现1CFU～300CFU个菌落的稀释系列培养皿(7.2)上的菌落数。11.2.4.3.2按式(1)计算液体中的真菌浓度：N——真菌浓度，单位为个菌落数每毫升(CFU/mL);ZC———两个连续稀释度培养皿上的菌落数之和，至少有一个不小于5CFU;当所有培养皿中真菌浓度均未达到5CFU时，试验无效。第二个稀释度(10-³):14CFUA.1总则表A.1真菌菌株由世界菌种保藏联合会(WFCC)成员提供。表A.1试验用真菌菌株菌株类型菌株编号菌株保藏机构美国模式培养物研究所(美国)巴斯德研究所(法国)德国培养物及细胞保藏联盟(德国)国家技术与评估研究所，生物资源中心(日本)Evaluation,Biologic