高二理化生动物细胞工程2

高二生物备课组

2002年１２月３０日，

两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃”终于顺利诞生。STS“太空婚礼”项目植物体细胞杂交原理融合前处理促融方法

用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性酶解法去壁物理法化学法原生质体的制备原生质体的融合与筛选杂种细胞的形成与培养杂种植株的鉴定与筛选克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株AB同核体同核体异核体（杂交细胞）人工诱导AAABBB还有3个3个以上细胞的融合-------AABBBA请同学们阅读课本P57动物细胞融合内容问题：什么是动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？

鼠B淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导一、动物细胞融合的概念杂交瘤细胞动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。1.动物细胞融合过程、原理与诱导方法为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留抗原性质1.动物细胞融合过程、原理与诱导方法2.动物细胞融合技术的意义和应用问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？1抗体一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应B细胞，分泌特异性抗体。抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点：

产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.单克隆抗体的概念单:单个细胞克隆:无性繁殖单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？问题：如何大量生产单克隆抗体？单克隆抗体的制备

一个效应B细胞只分泌一种特异性抗体

杂交瘤细胞动物细胞培养技术3.方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞能无限增殖+实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：实验过程：1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验单克隆抗体的制备

看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

4.单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选21.注射抗原的目的是什么？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选22.诱导细胞融合的手段有哪些？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选23.若细胞两两融合后，有几种融合情况？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选24.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？效应B细胞B淋巴细胞注射抗原骨髓瘤细胞融合B-B细胞杂交瘤细胞瘤-瘤细胞选择性培养基

筛选1多种杂交瘤细胞符合要求的杂交瘤细胞抗原-抗体杂交法

筛选2克隆化体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖6.单克隆抗体的突出优点：特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大容易标化生产

克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。

5.原理：细胞膜的流动性、细胞增殖7：单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速运载药物

(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)治疗疾病比较项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理融合前处理促融方法

用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞增殖酶解法去壁小鼠免疫处理、细胞分散物理法化学法物理、化学、生物法原生质体的制备融合亲本细胞的准备原生质体的融合与筛选动物细胞融合与两次筛选杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防

获得具优良性状的杂种植株小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指