发育生物学第六讲-辅助生育技术、试管婴儿、克隆技术课件

不育不孕辅助生育技术克隆技术

发育生物学第六讲思考题：几种试管婴儿的适应症2010年诺贝尔生理学或医学奖授予英国生理学家RobertEdwards

,以表彰他在体外受精技术领域做出的开创性贡献。不育孕症的发病率发达国家5%-8%,我国为6-10%女性不孕占60%，男性占40%全世界：约8000万-1.1亿

由于学习、就业压力，性传播疾病、环境污染的加重，发病率有上升的趋势。

女性不孕的原因1、排卵障碍3.子宫因素2.输卵管不通畅或功能不良

4.子宫颈因素5.子宫内膜异位症6.不明原因不孕：有10%的不孕夫妇经各种检查不能发现异常。A）精液异常：精子＜2000万/毫升，活精率＜50%，畸形精子＞50%。

先天发育异常：如双侧隐睾

全身因素：抽烟，酗酒等

局部因素：睾丸结核，精索静脉曲张男性不育的原因B）妨碍精子运送：阳痿，早泄C）免疫因素：精浆产生抗精子的抗体不孕不育症的检查：

1.有无排卵

2.输卵管是否通畅

3.B超检查有无子宫病变、内膜异位症等

4.男方精液是否正常

辅助生育技术概述辅助生育技术（AssistedReproductionTechnology，ART）：

指人工辅助受精或胚胎体外培养和胚胎移植的生殖方法。观察胚胎发育过程，揭示生殖奥秘治疗不育不孕症生殖医学成为21世纪生命科学研究的核心。1978年7月25日世界上第1例试管婴儿LouiseBrown,20世纪世界医学史上最伟大的事件之一。辅助生育技术发展史1997年12月美国报道了人克隆胚胎成功，但由于禁止人克隆的呼声，12天后被销毁。1998年11月美国获得5个胚胎干细胞系和人胚胎生殖细胞建系工作。1984年，世界上第一例冰冻胚胎的婴儿在

英国诞生。1988年北京医科大学附属三院诞生首例试管婴儿，与世界首例相差10年时间(原因：中国的计划生育国策，国内技术设备落后，住处闭塞等)中国辅助生育技术的发展赠卵试管婴儿于1992年6月12日首例冻融胚胎移植试管婴儿于1995年2月6日1996年中山医科大学单精子卵胞浆内注射技术(第二代试管婴儿)，解决了男性不育的问题，与先进国家差距仅为4年。首例代孕试管婴儿于1996年9月8日诞生。我国试管婴儿临床妊娠率保持在30%-40%左右，近期出生试管婴儿达到3万多个。

全球试管婴儿超过三百万人七十对试管婴儿“回娘家”1.宫腔内丈夫精液人工授精方法:洗涤精液并使制之获能，在女方排卵期内通过导管注入宫腔.主要适合下列病人：1.中度少精，弱精症的患者2.精液不液化3.宫颈粘液或精液中有抗体4.不明原因不孕5.阳痿，早泄的病人泸医附院顺利通过省卫生厅生殖技术校验检查四川省卫生厅专家一行对泸医附院的“夫精人工授精技术”进行校验检查，自2010年开展以来，已成功授孕22例，分娩10例。试管婴儿三关：人工诱发超排卵和采集卵细胞体外受精、体外培养胚胎移植A人工诱发排卵----超排卵（superovulation）枸橼克罗米酚（CC）、人绝经期促性腺激素（hMG）、卵泡刺激素（FSH）、生长激素（GH）、促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）。常规用GnRH-a进行调节，当有2个或两个以上卵泡直径大于16～18mm时，注射5000～10000IU的hCG，诱发卵细胞成熟及便于卵细胞从卵泡壁脱离。

精液液化进行常规检查;处理精子,使精子获能和发生顶体反应;将含精子混悬液与成熟卵细胞培养受精;C体外受精和体外培养在37℃培养中完成受精,30h左可见第一次卵裂为2细胞胚卵；在40h左右二次卵裂成4细胞胚卵；到48h后，胚卵一般处于4～8细胞阶段。胚卵发育到16细胞阶段约需85h，早期胚囊约需120h。D胚胎移植

移植时间：受精48h后，选择约8细胞阶段或胚泡阶段。

移植过程：吸入含有胚胎的移植液，应试者取卧位，在超声波引导下插入导管于宫腔中，注入胚胎移植液，静置60s后慢慢拔出导管。术后护理：应试者卧床24h，限制活动3～4天，同时接受黄体酮等孕激素助孕，于10天后进行早期妊娠检查与诊断。①少精、弱精：精子密度＜20×106ml，活精子＜50%,快速前向移动精子＜25%；②输卵管堵塞、子宫内膜异位症等的不孕症患者；③原因不明的不育症：夫妻双方经过检查均无异常发现。

(3)体外受精-胚胎移植的适应症3.卵母细胞单精子注射技术（ICSI)---

第二代试管婴儿适应症：严重的少、弱、畸精子症（数量约低于2千万/m1，且活率低于50％，活力II级以下）；不可逆的梗阻性无精子症；生精功能障碍、阻塞性无精等

（如输精管梗阻，而睾丸或附睾穿剌活检有精子）；男性免疫性不育（存在抗精子抗体等，通过单精子注射技术进行洗涤处理）；体外受精--胚胎移植受精失败；精子无顶体或顶体功能异常。方法：选择活力好、形态正常的单个精子用显微注射器将其直接注射到卵细胞内，培养至分裂后，将胚胎移植到子宫腔内使其继续生长发育成胎儿。卵母细胞单精子显微注射Intra-cytoplasmicsperminjection(ICSI)4.胚胎植入前遗传学诊断PGD—

第三代试管婴儿指将患者的卵子用第一代试管婴儿(IVF)技术或第二代试管婴儿技术授精，当胚胎培养到6-8细胞期，取出1-2个细胞进行分析，诊断染色体病或基因病，挑选正常的胚胎移植，可以避免将遗传病传给下一代。适应症为：单基因相关遗传病、染色体病、性连锁遗传病及可能生育异常患儿的高风险人群等。

中山医科大学已经成功地对胚胎进行活检并基因诊断Genetictestingperformedpriortoembryotransfer5.冷冻胚胎移植后尚有剩余的胚胎可以冷冻储存,用于补充治疗，但冻融对胚胎是损伤，影响胚胎生命力。6.赠卵试管婴儿7.卵胞浆置换术----第四代试管婴儿

由于胚胎中存在第三者的卵浆，人们对其遗传特征产生质疑，这对社会伦理观念构成了一定的挑战。2003年10月1日，卫生部开始实施的《人类辅助生殖技术规范》，对禁止使用技术作了明确规定。第一代“试管婴儿”主要适合于输卵管堵塞、子宫内膜异位症等的不孕症患者，把精子和卵子放在一起，增加两者相遇机会。第二代“试管婴儿”技术是将单个精子直接注射入卵子里，从而“制造”出受精卵、胚胎，它适用于男方少精、弱精、甚至无精的情况第三代“试管婴儿”技术主要适合于植入前遗传学诊断，解决遗传病及优生问题。第四代“试管婴儿”技术主要适合于年龄大的患者。

第一、二、三、四代试管婴儿只是适应症不同，不是一代比一代好

分析：有一位母亲是血友病基因的携带者，她自己虽然不发病，但是，她的两个儿子都是血友病患者，接连不幸夭折。这位悲伤的母亲来到试管婴儿中心，要求给她做试管婴儿。请分析该妇女适合做那种试管婴儿？

血友病是一种X染色体连锁隐性遗传性疾病

“第三代”试管婴儿超排卵方案二、辅助生育技术的开展的影响因素种植前遗传学诊断比最初设想的复杂单精子卵胞浆内注射（ICSI）的安全性2012-07-20卫生部批准102家医疗机构可进行辅助生育技术,9家机构设置人类精子库（cryopreservedsemen,spermbank）

四川省：(4家)

1、四川大学华西第二医院：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射、供精人工授精技术。

2、成都市锦江区妇幼保健院：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射技术。

3、四川省人民医院：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射技术。

4、四川生殖学院附属医院：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射技术。

重庆市：(2家)1、重庆市妇产科医院生殖与遗传研究所：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射、胚胎移植前遗传学诊断、供精人工授精技术。2、重庆医科大学附属第一医院：体外受精-胚胎移植、卵胞浆内单精子显微注射技术

二、批准设置人类精子库的机构(11家)

1、中信湘雅不孕与遗传专科医院2、江苏省人民医院3、广东省计划生育专科医院4、上海交通大学医学院附属仁济医院5、浙江省计划生育科学技术研究所6、国家人口和计划生育委员会科学技术研究所7、山东省立医院8、山西省计划生育科学研究所附属医院9、河南省妇幼保健院(2008年通过)10、湖北省人类精子库

11、重庆计划生育科学研究所附属医院精子库(2012-03-09

)精子库的建立优点甚多：冷冻精子可贮存20年，男子放心作结扎手术；二是有利于优生，选择健康的精子可使患有遗传性疾病男子的妻子受孕，杜绝父方的有害遗传；三是为解决男性不育症提供了有效的方法；四是为优生学提供了科学依据；五是有利于解决珍稀动物和濒危动物的种族繁衍。费用促排卵药物的费用：进口药和国产药3000-20000元不等，一般花费在5000-10000元左右.手术及实验室操作费用,一般大约1万元左右。总的花费在1万多至3万多元不等。

那些人不适合做试管婴儿

1.女方有重要的脏器功能异常者，如心脏、肝脏、肾脏疾病等而不能经受妊娠及分娩

2.女方体内存在急性或慢性活动性传染性疾病、急性感染性急病

3.女方有卵巢、子宫或乳腺恶性肿瘤者，不能接受接受胚胎移植着床、生长

影响成功率的因素（1）女方因素：超过35周岁时影响妊娠率;单纯因双侧输卵管梗阻引起的不孕，其成功率较高。（2）男方因素：严重的精液异常等，其成功率较低（4）诱发超排卵影响：卵泡的数量、大小及发育速率等均影响其成功率。（5）实验室环境及操作的影响(白人夫妇生出黑孩子)4、医学专家呼吁规范辅助生育技术

我国不育的发病率在10％左右，只有1％至2％（1／3）的试管婴儿不靠试管就可以来到人间。经济效益的驱动使个别医疗机构盲目扩大试管婴儿的适应征。美国的一个医生未经患者许可，用自己的精子为几十名妇女做了人工受精，结果有了75个自己的孩子，被法院判处他256年监禁。（1）人工受精技术给我们带来的一系列社会与道德问题。1987年我国第一例因人工受精引起的法律纠纷发人深省。婴儿相貌与供精者（生物学）父亲相似，但与养父（社会学父亲）长相全然不同，在巨大的社会舆论下，养父的心理防线崩溃，最终导致家庭的破裂。

5、辅助生育技术使用带来的问题精源的商业化造成了严重的社会问题，不仅给社会和不孕家庭带来了痛苦和负担，也违背了人工受精的初衷。从技术上讲，目前人类已具备使一个孩子有5位父母的可能：精子的捐赠者、卵子的捐赠者、怀孕母亲、抚养孩子的父母社会学问题：谁是人工受精出生孩子的合法父亲？社会学父亲应负的责任是什么？抚养、继承权的问题如何通过法律的形式确定？

这些问题不解决，对婴儿的成长、家庭、社会都是极为不利的。目前自愿供精的人比较少，精源紧张，而且不易控制。若干年后，很可能出现同父异母的孩子相恋、通婚，酿成恶果。（2）代孕母亲涉及的伦理问题。代孕母亲分娩婴儿的，能从其中得到报酬，因此这完全是一种商业行为，可能使某些人出于经济目的，使自己的子宫成为制造婴儿、换取金钱的工具。同时，这样就形成了遗传学父母，生物学父母，社会学父母之间错综复杂的关系，容易出现法律上的纠纷。冷冻技术涉及的伦理学问题。冷冻胚胎的命运由谁来决定？冷冻胚胎在法律上是否作为一个人？胚胎冷冻后延迟种植时间过长，是否会引起辈分的改变等。生不了就生个试管婴儿，这种观念目前在年轻人中颇有市场，有的年轻人甚至因此“有恃无恐”。可事实上，由于各种原因，不是所有的不孕不育夫妇都可以通过辅助生殖技术获得孩子的。

试管婴儿技术的妊娠成功率虽已提高，但基本仍在35%左右。而且，做一次试管婴儿手术需要几万元费用。因此，对一般家庭也是一笔不小的负担。还有，要做“试管婴儿”有一定风险。比如，用比较大量的促排卵的药物，有些人会引起恶心、呕吐、腹部不适、体重增加、少尿、肾衰等卵巢过度刺激综合征。而且，取卵、移植手术也有可能引起并发症。克隆技术克隆(clone)：就是一种人工诱导的无性繁殖方式,被称为“生物放大技术”。细胞核移植得到的个体都叫做克隆。通常所说的动物克隆指体细胞克隆，即动物的无性繁殖。1、克隆与无性繁殖不同无性繁殖是指不经过雌雄两性生殖细胞的结合、只由一个生物体产生后代的生殖方式，常见的有孢子生殖、出芽生殖和分裂生殖。由植物的根、茎、叶等经过压条或嫁接等方式产生新个体也叫无性繁殖。

绵羊、猴子和牛等动物没有人工操作是不能进行无性繁殖的。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆，这门生物技术叫克隆技术。

2、克隆发展三个时期：微生物克隆，即用一个细菌很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，而变成一个细菌群生物技术克隆，比如用遗传基因――DNA克隆；动物克隆，即由一个细胞克隆成一个动物。3、克隆技术的基本过程:将细胞核移植到去除了细胞核的卵细胞中，用人工的方法将其培养成胚胎，再将胚胎植入雌性动物体内，就可孕育出新的个体。4、克隆羊“多莉”的意义

（1）理论上证明：同植物细胞一样，分化了的动物细胞核也具有全能性，在分化过程中细胞核中的遗传物质没有不可逆变化；

（2）在实践上证明了：利用体细胞进行动物克隆的技术是可行的，从而为大规模复制动物优良品种和生产转基因动物及稀有物种的繁殖提供了有效方法。（1）培育优良畜种和生产实验动物；（2）生产转基因动物；（3）生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法；（4）复制濒危的动物物种，保存和传播动物物种资源。5、克隆技术的应用前景在理论上，分化的体细胞克隆对遗传物质重编（细胞核内所有或大部分基因关闭，细胞重新恢复全能性的过程）的机理还不清楚6、克隆技术存在的问题在实践中，克隆动物的成功率还很低。维尔穆特研究组在培育“多莉“的实验中，融合了277枚移植核的卵细胞，仅获得了“多莉”这一只成活羔羊，成功率只有0.36％，同时进行的胎儿成纤维细胞和胚胎细胞的克隆实验的成功率也分别只有1.7％和1.1％。1998年4月与威尔士山羊戴维产下邦尼，证明了克隆动物也能生育。2003.2.14日苏格兰向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫实施了安乐死。由于早衰问题，人们怀疑“多莉是穿着羔羊服装的老羊”。生出的部分个体表现出生理或免疫缺限（早衰迹象）

如果克隆人真能存活下来，那么世界上基因多样性和生物多样性的原则就会被破坏。这正是生物学界反对克隆人的主要意见，因为克隆出来的基因完全是相同的等位基因，缺乏多样性，无异于近亲繁殖，疾病的发生率会大大提高。

基因和生物的多样性会被破坏除了以上的理论和技术障碍外，克隆技术（尤其是在人胚胎方面的应用）对伦理道德的冲击和公众对此的强烈反应也限制了克隆技术的应用。

人被克隆：是技术胜利还是人性悲哀？布瓦瑟利耶宣称的首名克隆婴儿“夏娃”据称现在已经随父母出院回家。但关于对其克隆身份进行鉴定一事则一拖再拖。早先布瓦瑟利耶曾以夏娃的父母不同意为由表示相关基因测试要迟些进行。但3日有媒体报道说，布瓦瑟利耶所属的雷尔教派创始人雷尔已经拒绝对夏娃进行基因测试。第二名克隆婴儿在荷兰诞生

塞缪尔•伍德成为世界上第一个克隆自己的人

克隆人距离我们到底还有多远？意大利狂人医生-安蒂诺里---

一心想当“克隆人之父”外号“狂人”