59　选择性必修3　第九单元　第50讲　动物细胞工程

第50讲动物细胞工程1.阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。2.阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。3.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。考点1动物细胞培养一、动物细胞培养1．原理细胞增殖。2．地位动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。3．培养条件(1)营养：除糖类、氨基酸、无机盐和维生素等细胞所需的营养物质外，通常还需加入血清等一些天然成分。(2)无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。培养液需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。(3)温度、pH和渗透压：哺乳动物细胞培养的温度多以(36.5±0.5)℃为宜，多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，此外，渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数。(4)气体环境：95%空气＋5%CO2(维持培养液的pH)。4．过程(如图)1．(选择性必修3P45“图2-12”)用胰蛋白酶处理动物组织，长时间后细胞会(填“会”或“不会”)被消化，原因是二、干细胞培养及其应用2．(选择性必修3P46“相关信息”)科学家借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞。1．使用合成培养基培养动物细胞时，通常需要加入血清等天然成分。(√)2．培养动物细胞一般使用液体培养基。(√)3．已分化的T淋巴细胞也能被诱导为iPS细胞。(√)4．一般认为，成体干细胞具有发育成完整个体的能力。(×)提示：一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。5．神经干细胞在治疗阿尔茨海默病方面具有重要的应用价值。(√)艾弗里在证明DNA是遗传物质的实验中，通过分别向不同实验组加入各类酶来确认“转化因子”的化学本质，利用了自变量控制的减法原理。参考此方法，如果要了解Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因在诱导iPS细胞时，每个基因作用的相对大小，该如何进行实验？请你给出实验设计的思路。依次去掉1个基因，将其他3个基因转入小鼠成纤维细胞中，通过与转入4个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的基因对诱导iPS细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小。动物细胞培养1．(2025·广东梅州模拟)下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图，下列叙述错误的是()A．步骤①的操作需要在无菌环境中进行B．步骤②应向锥形瓶中加入无菌水制成细胞悬液C．步骤③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理D．步骤③到④分装时需调整到合适的细胞密度B[步骤①为将组织块剪碎，需要在无菌环境中进行操作，A正确；步骤②应向锥形瓶中加入培养液制成细胞悬液，B错误；由于动物细胞培养时常出现接触抑制现象，步骤③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理，且需要更换培养液，C正确；步骤③到④分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大，仍会存在接触抑制，D正确。]干细胞的培养及其应用2．通过大量实验，在多种候选基因中筛选得出Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc(简称SKOM)4种基因。将这些基因导入高度分化的体细胞，可使其重编程，形成类似胚胎干细胞(ES细胞)的一种细胞类型，称为iPS细胞。下列说法正确的是()A．不同类型的干细胞分裂和分化的潜能基本相同B．胚胎干细胞因需要从胚胎中获取涉及伦理问题而限制了其应用C．诱导产生iPS细胞的过程中需用到基因工程技术和核移植技术D．iPS细胞和ES细胞具有相同的基因组成且都能体现出细胞的全能性B[不同类型的干细胞，它们的分化潜能是有差别的，如胚胎干细胞的分化潜能较大，A错误；胚胎干细胞全能性较高，但会涉及伦理问题，其在医学上的应用有一定的限制，B正确；据题意将Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因导入高度分化的体细胞可使其重编程，形成iPS细胞，需要用到基因工程，不使用核移植技术，C错误；ES细胞直接从胚胎中提取，iPS细胞是通过体细胞导入Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因诱导产生，基因组成不同，但是都能体现出细胞全能性，D错误。]考点2动物细胞融合技术与单克隆抗体一、动物细胞融合技术1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2．方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。3．原理：细胞膜的流动性。4．结果：形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。5．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，为制造单克隆抗体开辟了新途径。1．(选择性必修3P49“旁栏思考”)19世纪30年代，科学家发现患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中存在多核细胞，这些多核细胞的来源可能是患者体内的病毒直接诱导多个细胞融合而形成多核细胞。二、单克隆抗体及其应用1．制备原理：一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能(填“能”或“不能”)无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量繁殖，又能产生足够数量的特定抗体。2．制备过程3．优点(1)能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合。(2)可以大量制备。4．应用(1)被广泛用作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。(2)运载药物，形成抗体—药物偶联物，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。(3)用于治疗疾病。2．(选择性必修3P50“思考·讨论”)ADC中抗体的作用是通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。1．制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。(×)提示：制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。2．每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体。(√)3．在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的。(√)4．单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，且可大量制备。(√)5．动物细胞融合与植物体细胞杂交的原理都涉及细胞膜的流动性。(√)已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。小鼠骨髓瘤细胞中尽管只有D途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加入聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请根据以上信息，设计一种方法(不考虑机械方法)，从培养液中筛选出杂交瘤细胞，并写出其依据的原理。向培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞，因为加入氨基嘌呤后，使D途径阻断，仅有D途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人的淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。动物细胞融合技术1．(2025·广东深圳模拟)某些肿瘤细胞表面的PD-L1与细胞毒性T细胞(CTL)表面的PD-1结合，能抑制CTL的免疫活性，导致肿瘤细胞免疫逃逸。将化疗药物与PD-L1单克隆抗体结合，形成抗PD-L1的偶联药物(抗PD-L1-ADC)，既可阻断PD-1与PD-L1结合，恢复CTL的活性，又能使化疗药物靶向肿瘤细胞，从而达到治疗目的，流程如图所示。下列说法错误的是()A．通过步骤①诱导形成的细胞可能有部分不能产生抗体B．通过步骤②筛选后能生长的细胞是杂交瘤细胞C．步骤③中进行克隆化培养和抗原检测，可获得目的细胞D．通过步骤④得到的单克隆抗体可使化疗药物靶向肿瘤细胞C[经步骤①诱导融合的细胞有同种核两两融合和不同核融合细胞，形成的细胞可能有部分不能产生抗体，需要经过特定的选择培养基筛选，A正确；步骤②经选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞既能迅速大量增殖又能产生抗体，B正确；步骤③为克隆化培养和抗体检测，经过步骤③可最终筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，C错误；抗体能与抗原发生特异性结合，步骤④得到的PD-L1-ADC中的抗体能与肿瘤细胞特异性结合，将药物带到肿瘤细胞，D正确。]单克隆抗体的制备及应用2．(2023·湖北卷改编)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。回答下列问题：(1)添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是__________________________________________________________________。(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对__________________和__________________生长具有抑制作用。(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是___________________________________________________________________________。(4)构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是________。解析：(1)脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原—抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。(4)DNA连接酶能连接DNA片段，脱氧核苷酸的磷酸基团位于5′端，羟基(—OH)位于3′端，①②③脱氧核苷酸链的两端基团有误；DNA连接酶能催化合成磷酸二酯键，即将一条脱氧核苷酸链的5′端的磷酸基团与另一条脱氧核苷酸链的3′端的—OH相连，④符合题意。答案：(1)使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合(2)未融合的亲本细胞融合的具有同种核的细胞(3)通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞(4)④考点3动物体细胞核移植技术和克隆动物一、动物细胞核移植技术1．概念：将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。2．原理：动物细胞核的全能性。3．分类(1)胚胎细胞核移植。(2)体细胞核移植。4．体细胞核移植的过程1．(选择性必修3P53“图2-18”)通常用去核的卵母细胞作为受体的原因是二、体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题前景畜牧业加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群繁育保护濒危物种前景医药卫生①作为生物反应器生产医用蛋白；②转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以用于异种移植；③人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，可用于器官移植问题①该技术成功率非常低；②绝大多数克隆动物存在健康问题，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷2．(选择性必修3P54“相关信息”)目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也可采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。1．体细胞核移植时，去核卵母细胞的“核”是指纺锤体。(×)提示：去核卵母细胞的“核”是指纺锤体—染色体复合物。2．非人灵长类动物的体细胞核移植非常困难。(√)3．应用体细胞核移植技术生出的犊牛与供体奶牛遗传物质完全相同。(×)提示：应用体细胞核移植技术生出的犊牛与供体奶牛遗传物质基本相同。4．目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是采用化学物质处理。(×)提示：目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。5．体细胞核移植技术有望增加濒危物种的存活数量。(√)6．动物体细胞核移植过程中，从屠宰场收集牛卵巢，采集卵母细胞，可直接用于实验。(×)提示：采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养到MⅡ期才可使用。为了探究蛋白酶抑制剂MG-132在高产奶牛核移植过程中的作用，研究人员在核移植整个过程中添加5μmol·L－1MG-132，操作结束后再进行激活，实验结果如表。MG-132核移植细胞个数卵裂率桑葚胚率囊胚率不添加5035/5025/357/25添加5037/5029/3711/29注：同列数据之间差值<0.05表示差异不显著，>0.05表示差异显著。分析表中数据，表述该实验的结论。结论：蛋白酶抑制剂MG-132对核移植细胞的卵裂率无显著影响，但可以显著提高核移植细胞的桑葚胚率和囊胚率。动物体细胞核移植技术及应用(2025·广东深圳模拟)2017年，我国科学家首次培育出体细胞克隆猴。2023年11月，我国首只全流程国产化培育的克隆猫在山东青岛诞生，这表明我国在动物克隆领域具有了完整的产业链，将进一步提升我国在全球生物医疗领域的地位和影响力。下列有关叙述错误的是()A．该克隆猫的培育过程涉及体外受精和动物细胞培养技术B．核移植过程形成的重构胚，具有发育成完整个体的能力C．与哺乳动物体细胞核移植相比，胚胎细胞核移植更易成功D．构建特定疾病的克隆动物模型有利于相应疾病药物的开发A[该克隆猫的培育过程涉及细胞核移植技术、胚胎移植技术、动物细胞体外培养技术等，不涉及体外受精技术，A错误；核移植过程形成的重构胚，具有发育成完整个体的能力，B正确；动物胚胎细胞分化程度低，细胞核全能性更容易表达，与动物体细胞核移植相比，胚胎细胞核移植更容易成功，C正确；克隆特定疾病动物模型，可以为该疾病的致病机制和开发相应的药物提供强有力的证据，为疾病治疗提供帮助，D正确。]课时分层作业(五十)1．(2025·广东名校联考)动物细胞核移植技术中能用作受体细胞的通常有MⅡ期卵母细胞和受精卵。早期核移植技术中常用受精卵，后来基本上用MⅡ期卵母细胞取代了受精卵，主要原因是两者的()A．细胞大小不同B．基因数目不同C．染色体形态不同D．细胞质环境不同D[动物细胞核移植中受体细胞主要提供细胞继续分裂、分化并发育成完整个体的细胞质环境，所以受精卵和MⅡ期卵母细胞作为受体的区别主要是细胞质环境不同，D符合题意。]2．肿瘤是机体细胞异常增生形成的一类疾病，最突出的特点是在身体局部形成肿块。肿瘤细胞培养是研究抗癌药检测的重要手段，研究人员从寄主为夹竹桃的红花桑寄生叶中提取一种物质——Nispex，在两组相同的培养瓶中装入等量的癌细胞悬浮液，实验组和对照组做相关处理后，一段时间后观察肿瘤细胞的生长速度和细胞凋亡率。下列分析错误的是()A．肿瘤细胞培养的原理是细胞增殖B．肿瘤细胞培养过程中需加入抗生素以防止杂菌污染C．实验组和对照组需分别加入一定量的Nispex和等量蒸馏水D．若实验组比对照组凋亡率高，则Nispex具有抗肿瘤的作用C[动物细胞培养技术的原理是细胞增殖，A正确；通常在动物细胞培养液中加一定量的抗生素，以防止培养过程中的杂菌污染，B正确；对照组加入等量生理盐水，C错误；实验组中癌细胞的凋亡率比对照组凋亡率高，则说明Nispex具有抗肿瘤的作用，D正确。]3．双特异性抗体(BsAb)是一种能够同时结合两种抗原的抗体。CD19和CD47是淋巴瘤细胞广泛表达的表面标记物(CD19在B细胞表面普遍存在，CD47在正常组织细胞上普遍存在)。研究人员将两种产生不同抗体的杂交瘤细胞融合成双杂交瘤细胞，最终得到了能同时结合CD19和CD47的BsAb，它可以结合同一靶细胞上两种不同的抗原，通过这种“双靶向”模式增强对肿瘤细胞的选择性，在体内体外实验中均可显著杀伤淋巴瘤细胞。下列叙述错误的是()A．同时注射2种抗原后提取B细胞，易得大量同时分泌两种抗体的浆细胞B．获得BsAb的过程中，筛选双杂交瘤细胞的依据是抗原抗体的特异性结合C．使用BsAb治疗对正常细胞的损伤小于联合使用CD19单抗和CD47单抗D．若BsAb的部分结构发生改变，可能会出现治疗效果降低的情况A[浆细胞不能同时分泌两种抗体，一个浆细胞只能分泌一种相应的抗体，A错误；双杂交瘤细胞能产生两种特异性抗体，根据抗原与抗体可特异性结合，可筛选出能产生抗CD19和CD47的双杂交瘤细胞，B正确；CD19在B细胞表面普遍存在，CD47在正常组织细胞上普遍存在，使用BsAb治疗，可识别同时具有CD19和CD47的淋巴瘤细胞，能特异性杀伤淋巴瘤细胞，而联合使用CD19单抗和CD47单抗，能杀伤淋巴瘤细胞的同时，也可杀伤B细胞和正常细胞，因此使用BsAb治疗对正常细胞的损伤小于联合使用CD19单抗和CD47单抗，C正确；若BsAb的部分结构发生改变，识别能力减弱，可能会出现治疗效果降低的情况，D正确。]4．(2025·广东深圳模拟)呼吸道合胞病毒(RSV)是一种引起下呼吸道感染的RNA病毒。科研人员选取病毒NS2基因获得具有免疫原性的NS2蛋白，利用该蛋白及小鼠制备获得了四株能分泌不同单克隆抗体的细胞系，为后续建立RSV检测系统提供了实验材料。下列说法错误的是()A．为获得更多的B淋巴细胞，需向小鼠多次注射NS2蛋白B．用NS2蛋白可诱导小鼠产生能分泌多种抗体的B淋巴细胞C．若要区分上述四株细胞系，可用NS2蛋白进行抗体检测D．单克隆抗体可准确识别抗原的细微差异并能够大量制备C[给小鼠多次注射NS2蛋白是为了刺激机体产生更多的已免疫的B淋巴细胞，A正确；由题意可知，用NS2蛋白可诱导小鼠产生能分泌多种抗体的B淋巴细胞，B正确；四株细胞系均是利用NS2蛋白获得的，所分泌的抗体可以和NS2蛋白的不同部位结合，区分上述四株细胞系，不能用NS2蛋白进行抗体检测，C错误；单克隆抗体可准确识别抗原的细微差异，与相应的抗原特异性结合，并且可以大量制备，D正确。]5．单克隆抗体在疾病诊断治疗和病原体鉴定中发挥重要作用。下列叙述正确的是()A．将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后就获得了产生单克隆抗体的杂交瘤细胞系B．单克隆抗体是由杂交瘤细胞系所产生的不同于天然抗体的人工合成生物分子C．将细胞毒素与单克隆抗体结合可以实现特异性识别肿瘤抗原并杀伤肿瘤细胞D．将一种灭活病原体作为疫苗接种人体后会产生针对抗原的特异性单克隆抗体C[将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后就获得了产生抗体的杂交瘤细胞系，但不是一种抗体，A错误；单克隆抗体是由杂交瘤细胞系所产生的与天然抗体相同生物分子，B错误；将细胞毒素与单克隆抗体结合可以实现特异性识别肿瘤抗原并杀伤肿瘤细胞，C正确；将一种灭活病原体作为疫苗接种人体后会产生针对抗原的特异性的抗体，但不是单克隆抗体，单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，D错误。]6．我国科学家攻坚克难，经过多年反复试验，成功培育出全球首例体细胞克隆猴(2n＝54)，技术流程如图所示。下列叙述正确的是()A．重构胚细胞中含有4个染色体组，108条染色体B．克隆猴的遗传物质全部来自胎猴的体细胞C．组蛋白的甲基化和乙酰化都不利于细胞全能性的体现D．对重构胚进行基因编辑可获得用于研究的突变型克隆猴D[根据题干和题图可知，重构胚细胞中含有2个染色体组，54条染色体，A错误；去核卵母细胞中也含有遗传物质，因此克隆猴的遗传物质来自胎猴的体细胞和母猴的卵母细胞的细胞质，B错误；组蛋白的甲基化不利于细胞全能性的体现，而乙酰化有利于细胞全能性的体现，C错误；对重构胚进行基因编辑可改变其基因，从而获得用于研究的突变型克隆猴，D正确。]7．成体组织细胞能够被用于两种不同意义的“克隆”，具体流程如图所示。下列有关克隆的叙述错误的是()A．图中含“纺锤体”的细胞为MⅡ期的卵母细胞B．经“细胞融合”形成的重组细胞中，细胞质中的遗传物质来自成年母体的卵母细胞和另一成体组织细胞C．图中“早期胚胎”内部的空腔为囊胚腔，此时期胚胎可进行孵化过程D．图中两种“克隆”均需要经过动物细胞培养和胚胎移植等过程D[应将卵母细胞培养至MⅡ期，再通过显微操作去核，因此图中含有“纺锤体”的细胞是处于MⅡ期的卵母细胞，A正确；由图可知，重组细胞是由成体组织细胞注入去核的卵母细胞形成的，因此经“细胞融合”形成的重组细胞中，细胞质中的遗传物质来自成年母体的卵母细胞和另一成体组织细胞，B正确；图中“早期胚胎”是囊胚期胚胎，其内部的空腔为囊胚腔，囊胚可进行孵化过程，即囊胚进一步扩大，导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，C正确；治疗性克隆最终只获得细胞或组织，不需要经过胚胎移植过程获得个体，D错误。]8．现代生物工程的操作常常涉及下面的流程，下列说法正确的是()A．若图为核移植过程，则②从卵巢中获取的卵母细胞直接作为受体细胞和①供体细胞融合B．若图为单克隆抗体的制备过程，需要筛选出产生所需抗体的杂交瘤细胞C．若图为试管动物的培育过程，需培育到原肠胚才能进行胚胎分割与胚胎移植D．若图为植物体细胞杂交过程，则形成③常用灭活的病毒直接处理两种植物细胞B[若题图为核移植过程，在体细胞核移植过程中，应选择处于MⅡ期的卵母细胞作为受体细胞，因此需要将卵母细胞培养至MⅡ期，不是直接作为受体，A错误；若题图为单克隆抗体的制备，则①和②是经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，形成融合细胞需要经过筛选，筛出产生所需抗体的杂交瘤细胞，B正确；若题图为试管动物的培育过程，需培育到桑葚胚或者囊胚才能进行胚胎分割与胚胎移植，C错误；诱导原生质体融合的方法有物理法，包括电融合法、离心法等，化学法，一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂，灭活的病毒是诱导动物细胞融合的方法，D错误。]9．2019年1月，中国科学家首次利用CRISPR/Cas9技术，获得一只生物节律核心基因BMAL1敲除的猕猴。并通过体细胞克隆技术，获得5只生物节律紊乱的猕猴，用于研究生物节律机制，技术流程如图所示(①②表示操作过程)。下列说法错误的是()A．在核移植操作前，应对成纤维细胞进行动物细胞培养B．①是利用显微操作技术去核，去核前需要先将采集的卵母细胞培养至MⅡ时期C．②可以通过电融合法使两细胞融合，形成重组胚D．该技术得到的敲除BMAL1基因的克隆猕猴的遗传物质与猕猴甲相同D[在核移植操作前，应将成纤维细胞置于适宜条件下进行动物细胞培养，A正确；①是利用显微操作技术去核，去核前需要先将采集的卵母细胞培养至MⅡ时期，MⅡ时期细胞具备受精能力，B正确；②可以通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成重构胚，C正确；该技术得到的敲除BMAL1基因的克隆猕猴的遗传物质主要来自猕猴甲，少量来自卵母细胞的细胞质，D错误。]10．抗原可分为胸腺依赖性抗原(TD抗原)和胸腺非依赖性抗原(TI抗原)。其中TI抗原直接与B细胞结合就能激活B细胞，但不产生记忆细胞。脂多糖(LPS)是细菌的主要致病毒素，属于TI抗原，这制约了LPS疫苗的研发。多肽类抗原属于TD抗原，利用多肽模拟细菌LPS，有望解决这个问题。(1)胸腺在免疫系统中属于________。在胸腺中发育的淋巴细胞是________。(2)与TI抗原相比，TD抗原激活B细胞的方式有何不同？________________________________________________________________________________________。(3)在研发伤寒沙门氏菌LPS疫苗的过程中，为初步鉴定多肽A、B模拟LPS抗原特征的相似程度，研究人员利用抗LPS抗体进行检测，部分实验步骤如图1，实验结果如图2。①图1步骤c中与多肽结合的抗体会被洗脱掉，未被洗脱的抗体因与________结合而残留在检测板上。②多肽模拟LPS抗原特征的相似程度越高，其与LPS竞争抗体结合位