再生医学 qPCR 检测工程师岗位考试试卷及答案

再生医学qPCR检测工程师岗位考试试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共10题）1.qPCR中“q”代表什么？A.qualityB.quantityC.queryD.quick答案：B2.以下哪种不是qPCR常用的荧光定量方法？A.染料法B.探针法C.比色法D.TaqMan探针法答案：C3.qPCR反应体系中，Taq酶的作用是？A.解链DNAB.连接DNAC.合成DNAD.降解DNA答案：C4.进行qPCR实验时，RNA提取后首先要进行？A.反转录B.直接扩增C.加样D.离心答案：A5.标准曲线的横坐标一般是？A.Ct值B.荧光强度C.模板浓度D.扩增效率答案：C6.理想的qPCR扩增效率接近？A.50%B.100%C.150%D.200%答案：B7.qPCR实验中，阴性对照的作用是？A.检测污染B.确定扩增效率C.优化条件D.评估灵敏度答案：A8.以下哪种物质不属于qPCR反应缓冲液成分？A.Tris-HClB.MgCl₂C.SDSD.dNTPs答案：C9.进行qPCR实验，样本的保存温度一般是？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室温答案：C10.qPCR技术可以用于检测？A.DNA含量B.RNA含量C.基因表达水平D.以上都是答案：D二、多项选择题（每题2分，共10题）1.qPCR实验中影响结果准确性的因素有？A.样本质量B.引物设计C.反应条件D.仪器性能答案：ABCD2.反转录过程需要用到的物质有？A.逆转录酶B.dNTPsC.引物D.Mg²⁺答案：ABCD3.以下属于qPCR优点的是？A.灵敏度高B.特异性强C.可定量D.操作简单答案：ABC4.设计qPCR引物时需要考虑的因素有？A.引物长度B.退火温度C.GC含量D.引物二聚体答案：ABCD5.qPCR实验中，常用的内参基因有？A.GAPDHB.β-actinC.18SrRNAD.P53答案：ABC6.荧光定量PCR仪的主要部件包括？A.热循环系统B.荧光检测系统C.数据分析系统D.进样系统答案：ABC7.实验中导致qPCR扩增失败的原因可能是？A.引物错误B.模板降解C.Taq酶失活D.荧光染料失效答案：ABCD8.qPCR可以应用于哪些领域？A.疾病诊断B.药物研发C.基因功能研究D.食品安全检测答案：ABCD9.优化qPCR反应条件包括？A.调整退火温度B.改变Mg²⁺浓度C.优化引物浓度D.更换Taq酶品牌答案：ABC10.下列哪些物质可作为qPCR反应的模板？A.基因组DNAB.cDNAC.线粒体DNAD.叶绿体DNA答案：ABCD三、判断题（每题2分，共10题）1.qPCR实验对样本纯度要求不高。（×）2.荧光定量PCR只能检测mRNA水平。（×）3.标准曲线的线性关系越好，实验结果越准确。（√）4.引物的退火温度越高越好。（×）5.qPCR反应体系中，dNTPs浓度越高扩增效果越好。（×）6.实验中可以用自来水配制反应缓冲液。（×）7.反转录产物可直接用于qPCR扩增。（√）8.荧光定量PCR仪不需要定期校准。（×）9.内参基因在不同组织和细胞中表达量恒定。（√）10.qPCR实验不需要设置重复孔。（×）四、简答题（每题5分，共4题）1.简述qPCR相对定量和绝对定量的区别。答案：相对定量是比较不同样本中目的基因表达量的相对变化，常以内参基因做校正，反映基因表达的变化倍数。绝对定量则是精确测定样本中目的基因的实际拷贝数，需要构建标准曲线，用已知浓度的标准品来推算未知样本中基因的含量。2.简述RNA提取过程中的注意事项。答案：RNA提取要防止RNA酶污染，操作需在无RNA酶环境，使用的耗材和试剂要经过处理。提取时注意样品的新鲜度，快速匀浆裂解。严格控制各步骤的温度和时间，如离心条件等。提取后尽快进行后续实验或妥善保存，防止RNA降解。3.引物设计不合理可能会导致哪些问题？答案：引物设计不合理可能导致引物二聚体形成，消耗反应体系中的dNTPs和引物，影响扩增效率；可能出现非特异性扩增，导致扩增出非目的条带；退火温度不合适，过高可能引物与模板结合不佳，过低则会增加非特异性结合，影响实验结果准确性。4.简述qPCR实验中设置阴性对照和阳性对照的意义。答案：阴性对照可检测实验过程是否存在污染，若阴性对照有扩增信号，说明实验体系或操作有污染。阳性对照用于验证实验体系的有效性，若阳性对照无扩增信号，表明反应体系、仪器等可能存在问题，通过两者可保障实验结果的可靠性。五、讨论题（每题5分，共4题）1.在再生医学研究中，qPCR技术用于检测干细胞分化相关基因表达，如何确保实验结果能准确反映干细胞分化状态？答案：首先要保证样本的质量，从合适的取材部位和时间获取干细胞样本，避免样本损伤和降解。引物设计要针对分化相关基因高度特异，优化反应条件保证扩增效率。设置多个生物学重复减少误差，采用合适内参基因校准。同时与其他检测技术如免疫组化等结果相互验证，综合判断才能准确反映干细胞分化状态。2.当qPCR实验结果出现异常扩增曲线（如曲线形状不规则、Ct值异常等）时，应该从哪些方面进行分析和解决？答案：从样本方面，检查样本是否降解、浓度是否合适。引物方面，看是否存在引物二聚体、特异性不佳等问题。反应体系上，考虑各成分浓度是否正确，Taq酶是否失活。仪器方面，检查仪器的温度准确性、荧光检测是否正常。此外，还需排查操作过程是否规范，如加样是否准确等，根据排查结果进行相应调整和改进。3.随着再生医学发展，对qPCR检测工程师的技术要求也在提高，谈谈你认为工程师应具备哪些新技能和知识？答案：工程师需掌握更多新兴的再生医学知识，如各类干细胞特性、组织工程原理等。在技术上，要熟悉高通量qPCR技术、数字PCR等新技术并能熟练操作。掌握生物信息学知识，用于分析复杂的基因表达数据。还需了解基因编辑技术与qPCR结合应用，能解决再生医学研究中特殊样本和复杂实验需求下的qPCR检测问题。4.在再生医学临床试验中，qPCR检测数据作为重要指标，如何保证数据的可靠性和可重复性？答案：要严格规范实验操作流程，从样