DB1304∕T 516-2025 噬菌体及其裂解酶防控禽气源性病原菌感染技术规程

ICS11.220

CCSB41

1304

邯郸市地方标准

DB1304/T516—2025

噬菌体及其裂解酶防控禽气源性病原

菌感染技术规程

2025-06-27发布2025-07-20实施

邯郸市市场监督管理局发布

DB1304/T516—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由河北工程大学提出。

本文件起草单位：河北工程大学。

本文件主要起草人：钟翠红、王方方、崔国林、左海龙、王艳梅、张占丽、霍志闯、和彦泽、张永

英、张延明、李培、刘嘉楠、石玉祥、左海堂、韩晓飞、康金哲、冯莎莎。

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DB1304/T516—2025

噬菌体及其裂解酶防控禽气源性病原菌感染技术规程

1范围

本文件规定了噬菌体及其裂解酶防控禽气源性病原菌感染技术的术语和定义、空舍消毒、引种补栏、

饲养管理。

本文件适用于规模化养禽场气源性病原菌感染的防控。猪、羊、兔等其它舍饲动物养殖场也可参照

执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB13078饲料卫生标准

GB/T25886养鸡场带鸡消毒技术要求

NY5027无公告食品畜禽饮用水质

NY/T388畜禽场环境质量标准

NY∕T472绿色食品兽药使用准则

DB13/T6114—2025养鸡场饮水线杀菌技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

禽气源性病原菌感染

存在于禽舍空气的病原菌，通过空气、饲料等媒介感染禽类呼吸道、消化道等组织器官，进而引起

机体发生疾病。

3.2

禽舍通风系统

为保证禽舍空气温度、湿度、空气卫生和气流速度等参数达到畜禽场环境质量标准的要求，对禽舍

空气进行集中处理、输送的所有设备、管道及附属设施的总称。

4空舍消毒

用1:600过硫酸氢钾等消毒剂或火焰喷枪焚烧等方法对禽舍地面和墙面消毒处理，将清洗干净的饲

养禽类所需物品移到舍内，然后再按空气熏蒸剂说明对禽舍环境进行熏蒸消毒，消毒过程中，封闭鸡舍，

舍内温度保持在20℃以上，相对湿度达到60%～80%。

5引种补栏

从具备种畜禽生产经营资格的场区引进禽类，引进的禽类应有产地动物检疫合格证明。对即将进场

（舍）的禽类需进行检疫，参照家禽产地检疫规程农医发[2010]20号执行。

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DB1304/T516—2025

6饲养管理

6.1禽舍空气质量监测

根据养禽场空气污染和禽发病状况，确定禽舍空气环境质量监测频度。参照NY/T388检测方法要求，

采集禽舍内空气样品并进行检测，禽舍空气细菌浓度、总悬浮微粒(TSP)、PM10、硫化氢、氨气等空气

环境质量指标符合NY/T388要求；否则，调控禽舍通风系统加强禽舍通风，同时增加消毒次数。

6.2禽舍环境消毒

参照GB/T25886进行带禽消毒，利用禽舍喷雾消毒线或消毒设备向禽舍喷洒1×106PFU/ml噬菌体

噬菌体及其0.2mg/ml的裂解酶悬液，每周喷洒噬菌体及其裂解酶悬液、消毒液各1次。利用消毒设备向

禽舍粪便传送带、地面喷洒噬菌体及其裂解酶悬液，每周喷洒1-2次；及时更换通风口的空气净化过滤

滤膜。禽发病期间，增加禽舍环境消毒次数。

6.3饮水质量

按照DB13/T6114-2025进行禽舍饮水线消毒，每周1次。保证饮生质量达到NY5027畜禽饮用水质

标准要求。

6.4饲料质量

保证饲料质量达到GB13078饲料卫生标准要求。

6.5人员和物品管理

禁止无关人员进入禽舍，工作人员应经消毒后才能进入禽舍，禁止串舍。进入禽舍的所有物品都应

消毒处理，各栋舍之间禁止串用饲养工具、器具。

6.7无害化处理

参照GB16548规定对病死及病害动物进行无害化处理；及时清理禽舍内粪便，粪便及其污物处理按

NY/T1168规定执行。

6.8禽气源性细菌疾病的防治

6.9禽气源性细菌疾病的预防

向禽饲料中添加0.1%浓度为3×1010PFU/g噬菌体微囊和0.5‰裂解酶脂质体，每月2次。禽类疾病

发生流行期间，增加消毒次数和饲喂噬菌体微囊和裂解酶脂质体次数。也可参照NY∕T472要求，进行

预防性投喂兽药。

6.10禽气源性细菌疾病的治疗

参照NY∕T472要求，结合药敏试验投喂兽药。向饲料中添加3×1010PFU/g噬菌体微囊和0.5‰裂解

酶脂质体。

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DB1304/T516—2025

A

A

附录A

（规范性）

噬菌体混悬液的制备方法

A.1采样

按照GB/T5750从养鸡场饮水管道采集水样。

A.2分离鉴定

A.2.1细菌分离鉴定

按照GB4789.3、GB4789.4、GB4789.5分离鉴定沙门氏菌、大肠杆菌和志贺氏菌；按传统细菌分

离纯化方法和16srRNA鉴定铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌。

A.2.2噬菌体分离鉴定纯化

A.2.2.1分离

将鉴定的病原菌作为诱导菌，利用双层琼脂平板法培养噬菌体，挑选大小一致噬菌斑。

A.2.2.2形态鉴定

吸取噬菌体培养液，加至电镜专用铜网上，用2%醋酸铀染色，干燥，通过透射电子显微镜观察噬

菌体超微结构。

A.2.2.3纯化

利用双层琼脂平板法对具有典型形态特征的噬菌体进行纯化。

A.3混悬液制备

将上述纯化后的大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌和志贺氏菌噬菌体按照1:1:1:1:1

的比例，制备成噬菌体混悬液，效价应不低于109PFU/ml。

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DB1304/T516—2025

B

B

附录B

（规范性）

噬菌体裂解酶混悬液的制备方法

B.1噬菌体裂解酶基因鉴定

B.1.1噬菌体全基因组测序

提取噬菌体基因组并测序，对测序原始数据进行质控与组装，采用注释工具（如RAST、Prokka、

PHANOTATE）预测开放阅读框（ORFs）。

B.1.2噬菌体裂解酶基因鉴定

通过NCBIBLAST进行同源性比对，利用保守结构域数据库（NCBICDD、Pfam、InterPro）确认裂解

酶功能域。

B.2噬菌体裂解酶表达系统构建

B.2.1噬菌体裂解酶表达质粒构建

根据噬菌体裂解酶碱基序列设计引物，PCR扩增裂解酶基因，采用限制性内切酶对裂解酶基因及表

达载体进行双酶切，使用T4DNA连接酶构建重组裂解酶表达质粒。

B.2.2噬菌体裂解酶大肠杆菌表达系统构建

采用热激法将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株，涂布于含相应抗性的培养基，筛选阳性表达菌株。

B.3噬菌体裂解酶诱导表达

将阳性菌株接种至含相应抗性的LB培养基，37℃振荡培养至菌液OD600值达0.6，加入终浓度为0.8

mM的IPTG诱导剂，28℃诱导培养10h。

B.4噬菌体裂解酶纯化

B.4.1表达菌株超声破碎

收集诱导后菌液，5000r/min离心5min，菌体沉淀用非变性裂解液洗涤3次，菌体沉淀用非变性裂

解液重悬，采用超声破碎仪破碎菌体，释放裂解酶。

B.4.2噬菌体裂解酶纯化

超声后菌液于10000r/min离心5min