尿液干化学法检测尿液红细胞与白细胞假阴性结果分析

尿液干化学法检测尿液红细胞与白细胞假阴性结果分析尿液干化学法凭借操作简便、检测快速、自动化程度高的优势，已成为临床尿液常规筛查的主流方法，其检测原理主要基于抗原抗体反应、酶促反应及化学显色反应，可快速定性或半定量检测尿液中红细胞（RBC）、白细胞（WBC）等关键指标。但在实际应用中，受标本质量、检测系统、临床病理状态等多种因素影响，易出现假阴性结果，导致漏诊、误诊，影响临床诊疗决策。本文针对尿液干化学法检测红细胞与白细胞假阴性结果的常见原因、作用机制及应对措施进行系统分析，为提高检测准确性提供参考。一、红细胞检测假阴性结果分析尿液干化学法检测红细胞的核心原理是：红细胞内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，可催化试剂条中过氧化氢释放新生态氧，氧化邻联甲苯胺等色原物质产生显色反应，显色强度与血红蛋白含量正相关。假阴性结果指尿液中实际存在红细胞或血红蛋白，但检测结果呈阴性，其主要影响因素及机制如下：（一）标本相关因素标本采集与保存不当：①尿液标本采集后未及时检测，放置时间过长（超过2小时），红细胞会因渗透压变化、pH值影响发生破裂，血红蛋白被分解，导致检测信号减弱；②标本冷藏保存会抑制血红蛋白的过氧化物酶活性，同时红细胞膜通透性改变，血红蛋白释放不充分，影响显色反应；③采集的尿液标本被大量水分稀释（如饮水过多、尿比重＜1.005），红细胞浓度低于检测下限（一般为5～10个/μL），无法触发显色反应。尿液理化性质异常：①尿液pH值过高（＞8.0），碱性环境会破坏血红蛋白的过氧化物酶活性，同时降低过氧化氢的稳定性，导致反应无法正常进行；②尿液中存在高浓度维生素C（＞500mg/L），维生素C具有强还原性，可优先与过氧化氢反应，阻断血红蛋白对色原的氧化作用，使试剂条不显色或显色变浅，出现假阴性。维生素C主要来源于患者服用维生素C补充剂、大量食用新鲜蔬果，或糖尿病、肝病等患者的代谢异常。（二）检测系统因素试剂条质量问题：①试剂条过期、受潮或密封不严，导致过氧化氢试剂失效、色原物质降解，无法与血红蛋白发生有效反应；②试剂条生产工艺缺陷，如试剂涂层不均匀、反应区域污染，影响显色的均匀性和强度，造成结果误判。检测仪器误差：①仪器校准不及时，光学检测系统灵敏度下降，无法准确识别微弱的显色信号；②仪器检测温度偏离最佳范围（一般为15～30℃），温度过低会抑制酶促反应速率，温度过高会加速试剂降解，均可能导致假阴性；③仪器加样量不足或加样位置偏移，试剂条反应区域未充分接触尿液，无法完成完整的显色过程。（三）临床病理与干扰物质因素红细胞形态异常或破坏：①肾小球源性血尿中，红细胞因通过肾小球滤过膜时受到挤压损伤，细胞膜完整性破坏，血红蛋白释放到尿液中，若血红蛋白浓度过低或已被分解，会导致检测阴性；②溶血性贫血、输血反应等患者尿液中存在游离血红蛋白（血红蛋白尿），若血红蛋白分子发生聚合或变性，其过氧化物酶活性丧失，无法被检测；③尿液中存在大量陈旧性红细胞，红细胞破裂后血红蛋白被氧化分解，失去检测活性。其他干扰物质：尿液中存在高浓度的蛋白质（＞5g/L）、葡萄糖（＞20g/L）或酮体，会覆盖红细胞表面或抑制酶促反应，降低检测灵敏度；部分药物（如头孢类抗生素、磺胺类药物）可与试剂条成分发生反应，干扰显色过程，导致假阴性。二、白细胞检测假阴性结果分析尿液干化学法检测白细胞的原理是：白细胞内的酯酶（主要是中性粒细胞特异性酯酶）可水解试剂条中的吲哚酚酯，生成吲哚酚，吲哚酚与重氮盐发生偶联反应产生紫色化合物，显色强度与白细胞数量正相关。假阴性结果指尿液中存在白细胞，但检测结果呈阴性，其影响因素及机制与红细胞检测有所差异，具体如下：（一）标本相关因素标本采集与保存不当：①尿液标本放置时间过长（超过2小时），白细胞会发生溶解，酯酶活性丧失，无法触发显色反应；②标本冷藏或冷冻会破坏白细胞细胞膜结构，导致酯酶释放不足，同时抑制酯酶活性，影响检测结果；③尿液标本被大量稀释，白细胞浓度低于检测下限（一般为10～20个/μL），出现假阴性。尿液理化性质异常：①尿液pH值＜5.0或＞8.5，强酸或强碱环境会抑制酯酶活性，导致反应无法进行；②尿液中存在高浓度维生素C、葡萄糖、蛋白质等，会竞争性抑制酯酶与底物的结合，降低显色强度，造成假阴性；③尿液比重过低（＜1.003），细胞外渗透压过低导致白细胞肿胀破裂，酯酶释放后被稀释，影响检测灵敏度。（二）检测系统因素试剂条质量问题：试剂条过期、受潮、污染，或酯酶底物、重氮盐等成分含量不足，会导致显色反应减弱或消失；试剂条反应区域设计不合理，无法充分捕获尿液中的酯酶活性，也会造成假阴性。仪器检测偏差：仪器光学检测系统波长校准不准确，无法准确识别紫色化合物的特征吸收峰；仪器检测速度过快，反应时间不足，显色不充分；仪器清洁不彻底，检测通道残留污染物干扰信号检测，均可能导致假阴性结果。（三）临床病理与干扰物质因素白细胞类型与形态异常：尿液干化学法试剂条主要针对中性粒细胞酯酶设计，对淋巴细胞、单核细胞等无特异性，若尿液中以淋巴细胞为主（如肾移植排斥反应、病毒感染等），会出现假阴性；②白细胞发生变性、坏死（如急性肾盂肾炎晚期、尿液标本放置过久），酯酶活性丧失，无法被检测；③尿液中存在大量脓细胞（白细胞吞噬细菌后形成），其酯酶活性较低，也可能导致检测结果阴性。药物与其他干扰物质：患者服用抗生素（如青霉素、头孢类）、糖皮质激素等药物后，会抑制白细胞的酯酶活性，或减少尿液中白细胞数量，导致假阴性；尿液中存在甲醛（用于尿液防腐）、氯己定（消毒用品残留）等物质，会破坏酯酶结构，抑制显色反应。三、减少假阴性结果的应对措施（一）规范标本采集与保存指导患者正确采集清洁中段尿，避免尿液被污染；标本采集后1小时内完成检测，若无法及时检测，需在2～8℃冷藏保存，保存时间不超过4小时，检测前恢复至室温。检测前核查标本状态，若尿液出现浑浊、沉淀、异味等异常，或尿比重＜1.005、pH值＜5.0或＞8.5，需重新采集标本检测。（二）优化检测系统管理严格把控试剂条质量，使用正规厂家生产、在有效期内的试剂条，储存时密封防潮，避免阳光直射；定期对试剂条进行质量抽检，确保显色反应正常。定期对检测仪器进行校准、维护和保养，按照仪器说明书要求设定检测参数（温度、反应时间等），每日检测前进行空白校准和质控品检测，确保仪器处于正常工作状态；及时清洁仪器检测通道，避免污染。（三）结合临床情况与联合检测检测时结合患者临床症状（如血尿、尿频尿急、发热等）、病史（如肾小球疾病、感染、用药史等），对疑似假阴性结果的标本进行复查。推行干化学法与显微镜检查联合检测模式：干化学法检测阴性，但临床高度怀疑血尿、脓尿时，必须进行显微镜镜检，直接观察红细胞、白细胞形态和数量，避免漏诊；对于肾小球源性血尿、淋巴细胞为主的尿液等，显微镜检查可弥补干化学法的不足。（四）加强人员培训与质量控制加强检验人员操作规范培训，熟悉干化学法检测原理、影响因素及异常结果处理流程，提高操作准确性和结果判读能力。建立完善的室内质量控制体系，每日使用高低值质控品进行检测，定期参加室间质评，及时发现和纠正检测偏差；对假阴性结果进行溯源分析，总结原因并优化检测流程。四、结论尿液干化学法检测红细胞与白细胞的假阴性结果受标本质量、检测系统、临床病理状态及干扰物质等多方面因素影响，其核心