CN110702764B 一种生物传感器的复合过滤膜及其制备方法 （上海硕创生物医药科技有限公司）

(19)国家知识产权局(12)发明专利(65)同一申请的已公布的文献号(73)专利权人上海硕创生物医药科技有限公司地址201203上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区爱迪生路330号301-1室(72)发明人姚修权请求不公布姓名(74)专利代理机构上海汉声知识产权代理有限公司31236专利代理师封喜彦胡晶G01N27/31(2006.01)法本发明公开了一种生物传感器的复合过滤膜，负载于传感器的电极表面，复合过滤膜的结构从外至内依次包括：生物相容性亲水层、多孔支撑层、分析物质过滤层、生物活性功能层和石墨烯衍生物层。负载于电极上的石墨烯衍生物层，可以提高酶的负载率，减少电极渗出有毒物质对生物活性功能层的干扰；分析物质过滤层提高传感器检测的线性范围和生物活性功能层的使用寿命；多孔支撑层增加膜的力学强度，防止生物活性功能层被挤压；生物相容性亲水层提高生物相容性；本发明复合过滤膜的多层复合结构，以及各层之间表面功能基团和链段的选择，提高复合层间的亲和力，提高了生物传感器的使21.一种生物传感器的复合过滤膜，其特征在于，所述复合过滤膜负载于生物传感器的电极表面，所述复合过滤膜的结构从外至内依次包括：生物相容性亲水层、多孔支撑层、分所述分析物质过滤层、所述多孔支撑层以及所述生物相容性亲水层的材料中包含相同的硬段结构；所述石墨烯衍生物层接枝有亲水功能基团；并且，所述分析物质过滤层包含亲水材料和透氧高分子材料，所述亲水材料和透氧高分子材料共混或共聚形成所述分析物质过滤层，所述亲水材料为含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物，所述透氧高分子材料为包含硅氧烷软段的聚氨酯嵌段共聚物，所述包含硅氧烷软段的聚氨酯嵌段共聚物作为连续相，所述含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物作为分散相，并且硅氧烷软段的含量比例高于PVP链段的含量比例。2.根据权利要求1所述的复合过滤膜，其特征在于，所述生物相容性亲水层的材料选自3.根据权利要求1所述的复合过滤膜，其特征在于，所述多孔支撑层的材料包含聚砜或其衍生物中的一种或多种；所述多孔支撑层的孔径为10纳米-1000纳米。4.根据权利要求1所述的复合过滤膜，其特征在于，所述PVP链段与所述硅氧烷软段的含量比为0.1~4:5~12。5.根据权利要求1所述的复合过滤膜，其特征在于，所述生物活性功能层的材料为生物酶或催化材料；所述生物酶选自葡萄糖氧化酶或乳酸氧化酶中的一种，所述催化材料选自纳米金或纳米银。6.根据权利要求1所述的复合过滤膜，其特征在于，所述石墨烯衍生物层厚度为5nm-7.一种权利要求1-6中任一所述的生物传感器的复合过滤膜的制备方法，其特征在于，(1)配置氧化石墨烯溶液，并涂覆于所述生物传感器的电极表面，得到石墨烯层，对所述石墨烯层进行表面修饰得石墨烯衍生物层；(2)配置生物活性功能层的溶液，并涂覆于步骤(1)得到的所述石墨烯衍生物层表面，(3)含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物、含硅氧烷软段的聚氨酯嵌段共聚物按预定比例混合配成均一的过滤层溶液，涂覆于步骤(2)的生物活性功能层表面，干燥制得分析物质过滤(4)配置聚砜或其衍生物材料的溶液，和PVP混合、溶解形成浸涂液，涂覆于步骤(3)制(5)将生物材料和交联剂溶于水中形成混合溶液，涂覆于步骤(4)制得的多孔支撑层表8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述石墨烯层经化学方法或等离子处理方法表面修饰上羧基、胺基、羟基或醛基，再通过偶联反应修饰上氧化还原导电高分子。9.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中氧化石墨烯溶液的浓度3为0.5-5g/L,所述石墨烯层的厚度为5nm-100nm;所述步骤(2)中生物活性功能层溶液包括BSA和生物酶，所述BSA和所述生物酶质量比为0.1~5:0.1~5,所述生物活性功能层溶液的质量浓度为5-15%,所述交联温度为25-37℃,交联时间为20-50分钟；所述步骤(3)含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物与所述含硅氧烷软段的聚氨酯嵌段共聚物的质量比为0.1~5:0.1~5;所述过滤层溶液的质量浓度为0.1-8%;所述步骤(4)中，所述聚砜或其衍生物材料溶液的质量浓度为10-30%,所述PVP的含量为0.1-4%,溶解时间为15-25小时，挥干溶剂的时间为30s-2min,在水中浸泡的时间为3-10min。10.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述生物材料选自胶原蛋碳二亚胺或水性异氰酸酯的一种或多种。11.根据权利要求10所述制备方法，其特征在于，所述生物材料至少包括透明质酸钠和胶原蛋白，所述透明质酸钠和所述胶原蛋白的质量比为0.1~10:0.1~10,所述步骤(5)的混合溶液的浓度为0.1-20%,所述交联剂的浓度为0.01%-2%,挥干溶剂的时间为5-20h,在水中浸泡的时间为30min-3h。4一种生物传感器的复合过滤膜及其制备方法背景技术[0002]生物传感器是用来检测相应物质和生物分子，生物传感器选择性的识别生物分[0005]根据把葡萄糖氧化酶上的电子的转移到电极表面的过程不同，传感器分为三代。到电极表面方式不一样，第一代是通过氧气来转移电子，第二代通过其他电子媒介物，5长后外膜会因PEG的水解或氧化而破坏，失去外膜功能。为解决抗水解和抗氧化的问题，专利US20030042137A1采用了含N的吸水高分子聚乙烯吡啶，虽然提高了外膜的稳定性，但是该材料与透氧性的材料相容性差，不能与硅氧烷共混制作成完整的外膜，氧透过率太差。[0011]专利WO2017089380A1提供了一种在连续结构的材料中加入PTFE颗粒或酶颗粒分散在高分子材料中，形成多孔的外膜结构，由于PTFE和酶容易聚集，不容易分散，所以做出来的外膜孔径很大，工艺上很难控制孔径大小，空间分布不均匀，很难达到控制葡萄糖透过[0012]且现有的外膜多为单层或双层结构，功能单一，电极之间的有毒物质也会渗透出外膜，特别是印刷电极油墨中的有毒物质会渗透出来，从而影响传感器的生物相容性。[0013]传感器电极的外膜既要控制葡萄糖和氧气的透过率，提高生物活性功能层的使用寿命，线性范围和测试的准确度，又要保证一定的力学强度，使外膜不至于破裂。现有外膜之间的矛盾。[0014]因此传感器的外膜过滤性能和生物相容性与外膜的力学性能，抗氧化，抗水解之间的矛盾亟需解决。发明内容[0015]本发明提供了一种复合过滤膜及其在生物生物传感器上的应用，可以解决现有技术中的上述缺陷。本发明的技术方案如下：[0016]一种生物传感器的复合过滤膜，所述复合过滤膜负载于生物传感器的电极表面，所述复合过滤膜的结构从外至内依次包括：生物相容性亲水层、多孔支撑层、分析物质过滤层、生物活性功能层和石墨烯衍生物层。所述生物活性功能层指的是酶的催化功能层。[0017]本发明的复合过滤膜的结构应用于植入式连续监控传感器，所述生物相容性亲水层提高生物传感器的生物相容性；所述多孔支撑层负载于所述分析物质过滤层上，起到力学支撑作用，增加膜的力学强度，防止生物活性功能层被挤压影响生物活性功能层性能；所述分析物质过滤层调节分析物质的透过率，提高生物传感器检测的线性范围和生物活性功能层的使用寿命；所述生物活性功能层提高对测试标的物的选择性和专一性；所述石墨烯衍生物层可以提高导电物质的比表面积，从而提高酶的负载率，减少电极材料的有毒物质[0018]本发明复合过滤膜的多层复合结构，通过各层材料的选择及结构的配合，可以减少电极中的有毒物质渗透出复合过滤膜产生干扰信号，降低了细胞毒性，提高了生物传感器的生物相容性，从而提高了使用寿命。[0019]较佳地，所述生物相容性亲水层的材料选自胶原蛋白、透明质酸钠、弹力蛋白中的一种或多种。生物相容性亲水层是由生物材料制作，亲水性好，可以提高外膜的生物相容广泛应用于医药和人体植入材料，是很安全的生物材料。[0020]较佳地，所述多孔支撑层的材料选自聚砜或其衍生物中的一种或多种；所述多孔支撑层的孔径为10纳米-1000纳米，增加膜的力学强度。6[0021]较佳地，所述分析物质过滤层包含亲水材料和透氧高分子材料，所述亲水材料和透氧高分子材料共混或共聚形成所述分析物质过滤层。本发明中测试标的物为葡萄糖，所述分析物质过滤层是透葡萄糖和透氧层，抗水解和抗氧化。[0022]较佳地，所述亲水材料选自含PVP链段、环糊精链段中的一种或两种的聚氨酯嵌段共聚物；所述透氧高分子材料为包含硅橡胶链段的聚氨酯嵌段共聚物。所述透氧高分子材料可以选择天然橡胶，硅胶或二者的混合物。[0023]所述分析物质过滤层包括连续相和分散相，所述分散相为亲水分散相，所述连续相包括由硅氧烷组成的软段。连续相和分散相通过聚氨酯嵌段共聚物中的硬段组份来增加材料的相容性，防止亲水软段和疏水软段发生相分离。所述含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物，与PEG链段聚氨酯相比，具有更好的抗水解和抗交联亲水聚氨酯材料；含硅氧烷的聚氨酯是一种弹性体聚氨酯，疏水性透氧性较好。PVP和硅胶都是生物相容性较好的材料。[0024]较佳地，由于人体中的葡萄糖浓度大大高于氧气浓度，所以我们选择配方中硅氧烷的含量比例高于PVP链段的含量比例，所述PVP链段与所述硅氧烷软段的含量比为0.1~4:5~12,优选为0.5~3:6~10。硅橡胶链段的聚氨酯嵌段共聚物作为连续相，PU-b-PVP作为分散相，这样能控制氧气的透过率大于葡萄糖透过率，能测高血糖，传感器的线性范围扩大到[0025]通过选择聚氨酯软硬段的结构，使得PU-b-PVP与硅橡胶聚氨酯结构中有相同的链段，不需要利用第3种聚氨酯来调节它们的相容性，提高了膜的稳定性。[0026]较佳地，所述生物活性功能层的材料为生物酶或人工合成的催化材料。[0027]所述生物酶材料可以是葡萄糖氧化酶，乳酸氧化酶，根据测试标的物选择相适应[0028]较佳地，所述石墨烯衍生物层为经表面修饰的石墨烯，所述石墨烯表面接枝羧基、胺基、羟基或醛基，并且偶联有氧化还原导电高分子。采用石墨烯衍生物作为生物活性功能层与电极之间的过滤层，可以减少干扰物质渗透到电极表面产生干扰信号，石墨烯薄膜表面衍生化处理带电荷后有良好的导电性和比表面积，有利于酶的吸附负载；同时石墨烯的电催化活性能够减少电极化，降低生物传感器工作电压。[0029]石墨烯是属于二维纳米材料，是很好的导体，本发明采用石墨烯衍生物作为生物活性功能层与电极之间的过滤层，石墨烯薄膜表面衍生化处理带电荷后既有催化性能又有良好的导电性和比表面积，有利于酶的吸附负载，石墨烯的电催化活性能够减少电极化，降低传感器工作电压。[0030]一种生物传感器的复合过滤膜的制备方法[0031](1)石墨烯衍生物层的制作方法[0032]配置氧化石墨烯溶液，把表面处理的传感器电极，通过化学气相沉积制备CVD或者厚度的氧化石墨烯后，用丁二酸酰基过氧化物对氧化石墨烯(GO)修饰上羧基或者PLASMA等[0033](2)配置生物活性功能层的溶液，在步骤(1)得到的所述石墨烯衍生物层表面涂覆所述生物活性功能层溶液，交联；所述生物活性功能层的材料为生物酶或人工合成的催化7[0035]含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物、含硅氧烷的聚氨酯嵌段共聚物按一定比例混合配成均一的过滤层澄清溶液；[0036]采用浸涂的方法，在步骤(2)的生物活性功能层表面浸涂上分析物质过滤层，自然干燥或者在真空下抽干交联，温度不能高于37℃,以防止酶高温失活。涂覆方式也可以是喷涂。[0037](4)多孔支撑层的制作[0038]配置聚砜或其衍生物材料的溶液，和PVP混合、物质过滤层浸涂在所述浸涂液中，取出自然晾干30s-2min,再浸入到水中3-10min,取出自[0039](5)生物相容性亲水层的制作[0040]将生物材料和交联剂溶于水中形成混合溶液，将步骤(4)的多孔支撑层表面浸涂在所述混合溶液中，取出后自然晾干5-20h,再在水中浸泡30min-3h,干燥得含复合过滤膜的生物传感器。[0041]较佳地，所述石墨烯层经化学方法或等离子处理方法表面修饰上羧基、胺基、羟基或醛基，再通过偶联反应修饰上氧化还原导电高分子，如Poly(AnilineQuinone/Hydroquinone)、polyaniline或含锇，铁的[0042]进一步地，所述步骤(1)中氧化石墨烯溶液的浓度为0.5-5g/L,优选为0.5-3g/L;所述石墨烯层的厚度为5nm-100nm,优选20-50nm;所述步骤(2)中生物活性功能层溶液包括BSA和生物酶，所述BSA和所述生物酶质量比为0.1~5:0.1~5,优选0.5~3:0.5~3;所述生物活性功能层溶液的质量浓度为5-15%,优选为7-14%;所述交联温度为25-37℃,交联时间为20-50分钟，优选为25-45分钟；所述步骤(3)含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物与所述含硅橡胶链段的聚氨酯嵌段共聚物的质量比为0.1~5:0.1~5,优选为0.5~3:0.5~3;所述过滤层溶液的质量浓度为0.1-8%,优选为1-6%;所述步骤(4)中，所述聚砜或其衍生物材料溶液的质量浓度为10-30%,优选为15-25%;所述PVP的含量为0.1-4%,优选为1-3%;溶解时间为15-25小时，优选为18-23小时；挥干溶剂的时间为30s-2min,在水中浸泡的时间为3-10min。的一种或多种。[0044]进一步地，所述生物材料至少包括透明质酸钠和胶原蛋白，所述透明质酸钠和所述胶原蛋白的质量比为0.1~10:0.1~10,优选为0.1~5:1-10;所述步骤(5)的混合溶液的浓度为0.1-20%,优选为5%-15%;所述交联剂的浓度为0.01%-1%,挥干溶剂的时间为5-20h,优选为8-16小时；在水中浸泡的时间为30min-3h。[0046]第一，本发明的生物传感器，负载于电极上的石墨烯衍生物层，减少电极渗出有毒物质至膜表面，减少干扰，降低了外膜的细胞毒性；分析物质过滤层提高传感器检测的线性范围和生物活性功能层的使用寿命；多孔支撑层增加膜的力学强度，防止生物活性功能层被挤压；生物相容性亲水层提高生物相容性；本发明的复合过滤膜，通过生物相容性亲水8层、多孔支撑层、分析物质过滤层、生物活性功能层和石墨烯衍生物层结构上的相互配合，以及各层材料的选择，防止了电极材料的有毒物质渗出复合过滤膜外，降低了细胞毒性，降低了有机体的排他反应，提高了生物传感器的生物相容性，从而提高了使用寿命；很好的解决了传统传感器外膜的过滤性能和生物相容性与外膜的力学性能，抗氧化，抗水解之间的[0047]第二，本发明的分析物质过滤层、多孔支撑层以及生物相容性亲水层的材料中均包含相同的硬段结构，提高了各层之间的复合作用力；同时石墨烯衍生物层接枝有亲水功能基团，提高了与生物活性功能层之间的结合力；多孔支撑层的多孔结构，提高了与分析物质过滤层、生物相容性亲水层两相邻层之间的结合力；本发明的复合过滤层的各层之间结合紧密，防止了复合过滤膜开裂，提高了膜的稳定性和使用寿命。[0048]第三，本发明通过分析物质过滤层的连续相、分散相材料的选择，选择聚氨酯嵌段共聚物软硬段的结构，使得PU-b-PVP与硅橡胶聚氨酯结构中有相同的链段，提高了连续相与分散相的材料相容性，且不需要利用第3种聚氨酯来调节它们的相容性，提高了膜的稳定性，从而提高复合过滤膜的使用寿命。[0049]第四，本发明的分析物质过滤层中，硅橡胶链段含量比例高于PVP链段的含量比例，硅橡胶链段的聚氨酯嵌段共聚物作为连续相，PU-b-PVP作为分散相，这样能控制氧气的[0050]第五，具有本发明的复合过滤膜的生物传感器，在30mM葡萄糖浓度下可以工作20天；并且本发明的复合过滤膜的工艺操作性强。[0051]当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。附图说明[0052]图1是本发明实施例1的复合过滤膜的示意图；[0053]图2是本发明实施例1的石墨烯衍生物层的红外光谱测试图；[0055]图4是本发明实施例1的多孔支撑层的SEM截面图；[0056]图5是本发明实施例1的多孔支撑层SEM表面图；[0057]图6是本发明实施例2的生物传感器的线性测试图。具体实施方式[0059]专利CN1219676,CN108931568A,CN2372689公开了一种试纸条型的传感器外膜结构，这种外膜的稳定性和过滤性能不稳定，无法满足植入皮下组织的连续血糖仪的外膜要求。US20020123087A1,US8050731,CN104761697A,CN101018599解决方案是通过3种以上的聚氨酯材料混合，其中2种聚氨酯分别含有PEG链段，和硅氧烷链段，因为上述2种材料相容性不好，需要第3种聚氨酯作为连续相，PEG聚氨酯和硅氧烷聚氨酯作为2分散相，3种材料共混后，没有化学交联或物理交联，因为材料的相容性问题，所以外膜会有缺陷，随着时间变器的使用寿命。9[0060]另，现有的传感器外膜都是单层结构，外膜的功能单一，外膜和电极之间的有毒物质也会渗透出外膜，特别是印刷电极油墨中的有毒物质会渗透出来，影响传感器的生物相织的挤压，外膜起不到支撑作用，酶层易被外力破坏空间结构，影响酶的活性和效率，减少使用寿命。外膜会因PEG的水解或氧化而破坏，失去外膜功能。为解决这个水解和抗氧化的问题，专利US20030042137A1采用了含N的吸水高分子聚乙烯吡啶，虽然提高了外膜的在体液环境下的稳定性，但是该材料与透氧性的材料相容性差，不能与硅氧烷共混制作成完整的外膜，氧透过率太差，对于第一代传感器需要氧的参与电子传递，氧含量减少，影响测试结果的准确性和测试线性范围，特别是高血糖时测试不准。[0062]专利WO2017089380A1提供了一种在连续结构的材料中加入PTFE颗粒或酶颗粒分散在高分子材料中，形成多孔的外膜结构，由于PTFE和酶容易聚集，不容易分散，所以做出来的外膜孔径很大，工艺上很难控制孔径大小，空间分布不均匀，很难达到控制葡萄糖透过率的作用，而且连续材料和PTFE,酶的相容性很差很难均匀分散，形成的外膜会因为分相而[0063]现在传感器都是把生物活性功能层直接固定在电极材料上，这样有一个缺点是生物活性功能层与电极结合不牢固，负载率不高，而且干扰物质容易通过外膜与电极接触反应产生干扰信号，电极材料释放出来的小分子物质会对酶的活性产生影响，所以要在生物活性功能层和电极之间加一层过滤膜，有专利CN103462615B用醋酸纤维素(CTA)作为该层[0064]外膜所处的工作环境要求外膜需要亲水性与抗水解性平衡，透过率和力学性能的抗水解之间的矛盾，本发明提供了一种生物传感器的复合过滤膜，所述复合过滤膜负载于生物传感器的电极表面，所述复合过滤膜的结构从外至内依次包括：生物相容性亲水层、多孔支撑层、分析物质过滤层、生物活性功能层和石墨烯衍生物层。[0065]其中，分析物质过滤层的连续相和分散相通过聚氨酯嵌段共聚物中的硬段组份来增加材料的相容性，防止亲水软段和疏水软段发生相分离。含PVP链段的聚氨酯嵌段共聚物，具有更好的抗水解和抗氧化性能，稳定性好，是一种很好的物理交联亲水聚氨酯材料；含硅氧烷的聚氨酯是一种弹性体聚氨酯，疏水性透氧性较好，解决了材料相容性、抗氧化、抗水解之间的矛盾。通过在所述分析物质过滤层上设置多孔支撑层，提高了膜的力学性能。同时，通过在所述电极与生物活性功能层之间设置石墨烯衍生物层，所述多孔支撑层表面设置生物相容性亲水层，防止了电极渗出的有毒物质透过外膜，降低了细胞毒性，提高了生物相容性。[0066]本发明的复合过滤膜的多层复合结构，通过材料的选择，提高了各层结构的相容性，同时石墨烯衍生物层上的功能基团与分析物质过滤层的亲水材料之间的相容性；以及多孔支撑层的多孔结构，提高了与分析物质过滤层、生物相容性亲水层之间的结合力，防止复合过滤膜开裂，提高了传感器的使用寿命。[0067]在本文中，由「一数值至另一数值」表示的范围，是一种避免在说明书中一一列举该范围中的所有数值的概要性表示方式。因此，某一特定数值范围的记载，涵盖该数值范围内的任意数值以及由该数值范围内的任意数值界定出的较小数值范围，如同在说明书中明文写出该任意数值和该较小数值范围一样。[0068]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应该理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。在实际应用中本领域技术人员根据本发明做出的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。[0069]生物活性功能层实施例1[0070]本实施例的生物传感器采用三电极体系的印刷柔性电极，绝缘材料为PI,工作电极和对电极为金浆印刷，银电极为参比电极，工作电极和对电极电镀上一层铂黑，工作电极、对电极和参比电极外制备一层复合过滤膜，如图1所示，所述复合过滤膜制备在电极1表面，所述复合过滤膜的结构从外至内依次包括：生物相容性亲水层1-5、多孔支撑层1-4、分析物质过滤层1-3、生物活性功能层1-2和石墨烯衍生物层1-1。所述复合过滤膜经过如下制作过程：[0071]第一步.制备石墨烯衍生物层：[0072]所用氧化石墨烯由改进的Hummers方法制备：[0073]取适量氧化石墨烯，加入到一定量去离子水中，并进行超声化石墨烯溶液，待用。以清洁处理后的传感器工作电极为正极，铂电极为负极，在上述配置溶液中进行沉积成膜300秒，取出后吹干，并进行固化，传感器表面即沉积得到氧化石墨烯膜层。[0074]所述氧化石墨烯膜层厚度在5nm-100nm之间，优选20-50nm。[0075]制作好一定厚度的氧化石墨烯后，用丁二酸酰基过氧化物对氧化石墨烯(GO)修饰上羧基。[0076]具体的，把涂覆好氧化石墨烯膜层的传感器浸泡在5g/L的丁二酸酰基过氧化物的气氛进行修饰上羧基或胺基。[0077]制作的生物传感器样品用FT-IR的ATR来测试，用a.丁二酸(SA),b.丁二酸酰基过氧化物，c.GO(氧化石墨烯),d.GO-COOH(接枝羧基的氧化石墨烯),测试图如图2所示。基基团。[0079]石墨烯衍生物层是石墨烯的表面改性，石墨烯衍生物层可以提高导电物质的比表面积，从而提高酶的负载率，石墨烯导电率高，可以降低工作电压，减少干扰物质电化学反应产生的干扰信号，降低传感器能耗，同时石墨烯的表面修饰后带电荷，孔径纳米级别，在不影响测试物质透过同时可以减少带电荷干扰物质透过石墨烯与铂电极接触发生电化学反应，从而减少干扰信号，提高测试的准确性，因为石墨烯的过滤功能，所以减少电极材料的有毒物质渗透出石墨烯层，影响生物活性功能层及生物相容性。[0080]第二步.制备葡萄糖氧化酶层：[0081]用BSA和葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲溶液，BSA和葡萄糖氧化酶的质量比为1:1,总浓度为10%(m/v),加入0.01%戊二醛，涂覆于第一步制得的所述石墨烯衍生物层上。用喷墨打[0083]合成PU-b-PVP,将合成的PU-b-PVP和TPSE345(热塑性有机硅弹性体