首医大临床生物化学实验课件08氯及铁的测定

实验九硫氰酸汞比色法测定血清氯

亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力【目的要求】1、

掌握硫氰酸汞比色法测定血清氯化物的原理。2、掌握亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力原理。氯离子是细胞外液中的主要阴离子，总体氯仅有30%存在于细胞内液。Cl-不仅维持细胞外液渗透压，还对酸碱平衡有影响。Cl-亦受肾脏调节。

测定方法硝酸汞滴定法硫氰酸汞比色法库仑滴定法离子选择电极法酶法同位素稀释质谱法【实验原理】

血清氯化物的氯离子与未解离的硫氰酸汞溶液混合时，氯离子首先与汞结合形成难以解离的氯化汞，并释放相应的硫氰酸离子，此离子与试剂中的铁离子结合，生成红色的硫氰酸铁，其色泽与氯的含量呈正比。【实验操作】取试管4支加入物试剂空白管标准管测定空白管测定管血清0.050.05氯标准液0.05空白试剂3.0显色应用液3.0

3.03.0

混匀，置室温10min,以试剂空白管调零，在460nm波长处比色，分别读取各管的吸光度。

【计算】氯化物（mmol/L）=（A测-A测定空白）/A标*100【参考范围】血清氯化物96-108mmol/L脑脊液氯化物120-132mmol/L尿液氯化物170-250mmol/L【临床意义】1.血清氯离子增加

(1)急性肾小球肾炎和慢性肾小球肾炎，有Cl-潴留，它常与Na+同时滞留。

(2)碳酸氢盐丧失，常有相对的Cl-增高，导致高氯性酸中毒，如II型肾小管性酸中毒；或输入含Cl-量高的药物时，如盐酸精氨酸的输入、大量服用氯化铵，可引起血清氯增高。

血清氯离子减少

(1)频繁呕吐和胃肠道减压，丢失大量胃液，使血清氯离子减少。

(2)代谢性减中毒。

(3)肾上腺皮质机能亢进，如柯兴综合征，可表现低钾和低氯性碱中毒。

(4)限制氯化钠的摄入。脑积液低氯症【注意事项】1、此法对其他卤族元素也防身同样的呈色反应。但在正常人血液中上述元素含量低，可忽略不计。2、显色液的呈色强度与硫氰酸汞和硝酸汞的含量有关。如呈色过强，线性范围在125mmol/L以下，增加硝酸汞的用量；呈色太弱，增加硫氰酸汞的用量，使用前二者进行调整，使其色泽在460nm波长，10cm光径比色杯测定，吸光度在0.4左右为宜。3、本法校正曲线不经过原点，但汞离子调控适当，在70-140mmol/L范围线性良好。4、本法呈色温度应不低于20度，室温过低易产生浑浊，影响比色。5、可用于自动生化分析仪。6、每批标本测定，应同时测定正常和异常值的质控血清，所得值应该在允许误差范围内，否则应查找原因。【评价】线性范围75-125mmol/L

显色稳定性2h内呈色稳定干扰试验胆红素达到225.7umol/L，结果增加2.9%，Hb达到5g/L，结果增加3.3%，β-脂蛋白达到15.94g/L和17.0g/L时，结果分别增加4.3%和7.8%。温度的影响亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力【原理】血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，被还原成二价铁，在于亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物，与同样处理的铁标准液比较，求得血清铁含量。总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即总铁结合力。【实验操作】1、血清铁测定取试管3支加入物空白管标准管测定管血清0.2铁标准液0.2去离子水0.2甘氨酸-盐酸缓冲液1.01.01.0混匀，37度5min,于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白）亚铁嗪显色液(B)0.20.2

0.2混匀37度5min,再次读取各管吸光度。2、血清总铁结合力测定

在试管中加入血清0.45ml，179umol/LTIBC铁标准液0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀，放置室温10min,加入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次，3000r/min离心10min,取上清液操作。取试管3支加入物空白管标准管测定管血清0.45铁标准液0.45去离子水0.45甘氨酸-盐酸缓冲液1.21.21.2混匀，于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白）亚铁嗪显色液0.050.050.05混匀，放置室温15min,再次读取各管吸光度。【计算】血清铁（umol/L）=（A测-A测空白*0.86）/A标*17.9TIBC（umol/L）=（A测-A测空白*0.97）/A标*71.6【参考范围】血清铁成年男性：11-30umol/L

成年女性：9-27umol/LTIBC成年男性：50-77umol/L

成年女性：54-77umol/