2025年核酸检测方法试题及答案

2025年核酸检测方法试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.以下哪种核酸检测技术属于基于扩增的方法？A.核酸杂交技术B.基因测序技术C.聚合酶链式反应（PCR）技术D.原位杂交技术答案：C。聚合酶链式反应（PCR）技术是典型的基于核酸扩增的检测方法，它可以在体外大量扩增特定的核酸片段，从而提高检测的灵敏度。核酸杂交技术主要是利用核酸分子的互补性进行检测，不涉及核酸的扩增；基因测序技术是对核酸序列进行测定，并非专门的扩增方法；原位杂交技术也是基于核酸杂交原理，在组织或细胞原位进行检测，不进行核酸扩增。2.实时荧光定量PCR技术中，荧光信号的产生与以下哪种物质有关？A.引物B.模板C.荧光染料或探针D.Taq酶答案：C。在实时荧光定量PCR中，荧光信号的产生主要与荧光染料（如SYBRGreen）或荧光探针（如TaqMan探针）有关。荧光染料可以与双链DNA结合，在PCR扩增过程中随着双链DNA的增加而发出荧光；荧光探针则是根据目标序列设计的，在PCR扩增时会被特异性切割或结合，从而产生荧光信号。引物是引导DNA合成的起始序列，模板是待扩增的核酸，Taq酶是催化DNA合成的酶，它们本身并不直接产生荧光信号。3.核酸提取过程中，常用的裂解液成分不包括以下哪种？A.蛋白酶KB.乙醇C.表面活性剂D.缓冲盐答案：B。核酸提取时，裂解液的作用是破坏细胞结构，释放核酸。蛋白酶K可以消化蛋白质，使核酸从蛋白质复合物中释放出来；表面活性剂（如SDS）可以溶解细胞膜和核膜；缓冲盐可以维持溶液的pH值和离子强度，保证裂解过程的稳定性。而乙醇主要用于核酸的沉淀，在裂解液中一般不使用。4.数字PCR技术与传统PCR技术的主要区别在于？A.反应体系不同B.扩增原理不同C.检测灵敏度不同D.对模板的要求不同答案：C。数字PCR技术与传统PCR技术的扩增原理基本相同，都是基于DNA的半保留复制。它们的反应体系也有相似之处，都包含引物、模板、酶等成分。对模板的要求也大致相同。数字PCR技术的主要优势在于其检测灵敏度更高，它可以将反应体系分割成大量的微小反应单元，对每个单元进行单独检测，从而实现对核酸分子的绝对定量，能够检测到低丰度的核酸分子。5.以下哪种样本类型在核酸检测中相对较难提取到高质量的核酸？A.血液B.痰液C.尿液D.组织活检样本答案：B。血液中含有丰富的白细胞等细胞，核酸提取相对容易；尿液中虽然核酸含量较低，但经过适当的处理也可以提取到一定量的核酸；组织活检样本可以通过合适的裂解和提取方法获得高质量的核酸。而痰液中含有大量的黏液、蛋白质和杂质，这些物质会干扰核酸的提取过程，并且黏液会包裹细胞，使得核酸难以释放出来，因此相对较难提取到高质量的核酸。6.在核酸检测中，为了避免交叉污染，以下操作错误的是？A.不同样本的操作在不同的区域进行B.移液器使用后及时更换枪头C.实验结束后统一清理工作台D.对实验器材进行严格的消毒处理答案：C。为了避免交叉污染，不同样本的操作应在不同的区域进行，以防止样本之间的相互污染；移液器使用后及时更换枪头，避免残留的样本污染下一个样本；对实验器材进行严格的消毒处理，可以有效杀灭可能存在的核酸污染。而实验结束后统一清理工作台可能会导致在清理过程中污染其他样本或实验区域，应该在每次操作后及时清理，保持工作区域的清洁。7.环介导等温扩增技术（LAMP）的特点不包括以下哪项？A.反应速度快B.特异性高C.需要复杂的仪器设备D.可在等温条件下进行答案：C。环介导等温扩增技术（LAMP）具有反应速度快的特点，一般在1小时内即可完成扩增反应；它通过设计多对引物，特异性识别目标核酸序列，因此特异性较高；该技术可以在等温条件下进行，不需要像PCR那样进行变温循环。而且LAMP技术不需要复杂的仪器设备，只需要一个恒温装置即可，操作相对简单。8.核酸检测中，使用的阳性对照样本的作用是？A.检测实验体系是否正常工作B.确定样本的浓度C.评估检测方法的灵敏度D.排除假阳性结果答案：A。阳性对照样本是已知含有目标核酸的样本，在核酸检测中加入阳性对照样本，可以验证实验体系（包括试剂、仪器、操作等）是否正常工作。如果阳性对照样本检测结果为阴性，说明实验体系可能存在问题，需要进行排查。阳性对照样本不能用于确定样本的浓度，评估检测方法的灵敏度通常需要使用一系列已知浓度的样本进行检测；排除假阳性结果主要通过设置阴性对照等方法。9.以下哪种核酸检测方法可以直接测定核酸的序列？A.核酸杂交技术B.基因测序技术C.荧光定量PCR技术D.等温扩增技术答案：B。基因测序技术是专门用于测定核酸序列的方法，它可以准确地确定核酸分子中碱基的排列顺序。核酸杂交技术主要是检测核酸分子之间的互补性，不能直接测定序列；荧光定量PCR技术主要用于定量检测核酸的含量，不涉及序列测定；等温扩增技术（如LAMP）主要是扩增核酸片段，也不能直接测定序列。10.在核酸提取过程中，离心操作的目的不包括以下哪项？A.分离细胞和上清液B.沉淀核酸C.去除杂质D.裂解细胞答案：D。离心操作在核酸提取过程中有多种作用。在细胞裂解后，通过离心可以分离细胞碎片和上清液，使核酸存在于上清液中；在核酸沉淀步骤中，离心可以使核酸沉淀下来；在洗涤核酸的过程中，离心可以去除杂质。而裂解细胞通常是通过裂解液等化学方法来实现的，不是离心操作的目的。11.多重PCR技术是指在一个反应体系中同时扩增？A.多个不同的基因片段B.同一个基因的多个拷贝C.不同样本中的相同基因D.不同样本中的不同基因答案：A。多重PCR技术是在一个反应体系中同时加入多对引物，从而同时扩增多个不同的基因片段。它可以提高检测效率，在一次反应中检测多个目标基因。不是扩增同一个基因的多个拷贝，也不是针对不同样本中的基因，而是在同一个样本中同时检测多个不同的基因片段。12.核酸检测试剂的有效期主要取决于以下哪个因素？A.试剂的成分B.储存条件C.生产工艺D.以上都是答案：D。核酸检测试剂的有效期受到多种因素的影响。试剂的成分不同，其稳定性也不同，一些成分可能容易受到环境因素的影响而发生变化；储存条件如温度、湿度、光照等对试剂的稳定性至关重要，不合适的储存条件会加速试剂的失效；生产工艺的好坏也会影响试剂的质量和稳定性，优质的生产工艺可以保证试剂在一定时间内保持有效。13.以下哪种情况可能导致核酸检测出现假阴性结果？A.样本采集量不足B.样本中存在抑制物C.检测时间过早D.以上都是答案：D。样本采集量不足可能导致目标核酸的含量过低，无法被检测到，从而出现假阴性结果；样本中存在抑制物（如血液中的血红蛋白、痰液中的黏液等）会抑制核酸扩增反应，影响检测结果；检测时间过早，病原体在体内可能还未大量繁殖，核酸含量较低，也容易出现假阴性结果。14.微流控芯片技术在核酸检测中的优势不包括以下哪项？A.样品和试剂用量少B.检测速度快C.可以实现高通量检测D.对操作人员要求低答案：D。微流控芯片技术具有样品和试剂用量少的优点，因为芯片上的反应通道非常微小，可以减少试剂的消耗；该技术可以将多个检测步骤集成在芯片上，实现快速检测，检测速度快；通过在芯片上设计多个检测通道，可以同时对多个样本或多个目标核酸进行检测，实现高通量检测。但是微流控芯片技术对操作人员的要求并不低，需要操作人员具备一定的专业知识和技能，能够熟练操作芯片和相关设备。15.核酸检测中，使用的内参基因的作用是？A.校正样本间的加样误差B.提高检测的灵敏度C.确定样本的来源D.区分不同的病原体答案：A。内参基因是在细胞中稳定表达的基因，在核酸检测中加入内参基因进行检测，可以校正样本间的加样误差、核酸提取效率差异等因素对检测结果的影响。内参基因不能提高检测的灵敏度，也不能用于确定样本的来源和区分不同的病原体。16.核酸杂交技术中，常用的探针标记物不包括以下哪种？A.放射性同位素B.荧光素C.生物素D.蛋白酶答案：D。在核酸杂交技术中，常用的探针标记物有放射性同位素（如32P）、荧光素（如FITC）、生物素等。放射性同位素标记的探针灵敏度高，但存在放射性污染的问题；荧光素标记的探针可以通过荧光检测，操作方便；生物素标记的探针可以通过与亲和素等结合进行检测。而蛋白酶是一种催化蛋白质水解的酶，不能作为核酸探针的标记物。17.以下哪种核酸检测方法对样本的RNA完整性要求较高？A.RTPCR技术B.核酸杂交技术C.数字PCR技术D.LAMP技术答案：A。RTPCR技术是先将RNA逆转录为cDNA，然后进行PCR扩增。如果样本的RNA完整性较差，可能会导致逆转录过程中产生不完整的cDNA，从而影响后续的PCR扩增结果。核酸杂交技术、数字PCR技术和LAMP技术对RNA完整性的要求相对较低，尤其是当检测的是DNA时，与RNA完整性无关。18.核酸检测结果的报告应包含以下哪些信息？A.样本类型、检测方法、检测结果B.患者姓名、年龄、性别C.检测时间、检测机构D.以上都是答案：D。核酸检测结果的报告应包含样本类型（如血液、痰液等）、检测方法（如PCR、LAMP等）、检测结果（阳性、阴性等），以便临床医生了解检测的具体情况；患者姓名、年龄、性别等基本信息有助于准确识别患者；检测时间和检测机构可以明确检测的时效性和可靠性。19.核酸检测实验室的生物安全防护措施不包括以下哪项？A.穿戴个人防护装备B.对实验废弃物进行妥善处理C.定期对实验室进行清洁和消毒D.增加实验人员数量答案：D。在核酸检测实验室中，穿戴个人防护装备（如口罩、手套、防护服等）可以保护实验人员免受样本中病原体的感染；对实验废弃物进行妥善处理（如高压灭菌、化学消毒等）可以防止病原体的传播；定期对实验室进行清洁和消毒可以保持实验室的卫生环境，降低生物安全风险。而增加实验人员数量并不能直接提高生物安全防护水平，反而可能增加人员流动和交叉感染的风险。20.以下哪种核酸检测技术可以用于检测病毒的变异情况？A.基因测序技术B.荧光定量PCR技术C.等温扩增技术D.核酸杂交技术答案：A。基因测序技术可以直接测定核酸的序列，通过对病毒核酸序列的测定和分析，可以准确地检测病毒的变异情况。荧光定量PCR技术主要用于定量检测病毒核酸的含量，不能检测病毒的变异；等温扩增技术和核酸杂交技术主要是检测病毒核酸的存在与否，对病毒变异的检测能力有限。二、多项选择题（每题3分，共30分）1.常见的核酸提取方法包括以下哪些？A.酚氯仿抽提法B.硅胶膜吸附法C.磁珠法D.盐析法答案：ABCD。酚氯仿抽提法是经典的核酸提取方法，通过酚和氯仿的作用，使蛋白质变性并与核酸分离；硅胶膜吸附法利用硅胶膜对核酸的特异性吸附作用，在不同的缓冲液条件下实现核酸的吸附和洗脱；磁珠法是利用磁珠表面的功能基团与核酸结合，通过磁场分离磁珠核酸复合物；盐析法是通过调节盐浓度，使核酸沉淀下来。2.实时荧光定量PCR技术的定量方法有以下哪些？A.绝对定量法B.相对定量法C.内标法D.外标法答案：AB。实时荧光定量PCR技术的定量方法主要有绝对定量法和相对定量法。绝对定量法是通过制作标准曲线，根据标准曲线计算样本中目标核酸的绝对含量；相对定量法是比较不同样本中目标核酸相对于内参基因的表达水平。内标法和外标法是制作标准曲线的不同方式，不是独立的定量方法。3.核酸检测中，可能影响检测结果准确性的因素有以下哪些？A.样本采集方法B.试剂质量C.仪器设备的性能D.操作人员的技术水平答案：ABCD。样本采集方法不当（如采集部位不准确、采集量不足等）会导致样本中目标核酸的含量和质量受到影响，从而影响检测结果的准确性；试剂质量不佳（如试剂过期、试剂污染等）会导致检测结果不可靠；仪器设备的性能（如温度准确性、荧光检测灵敏度等）不稳定会影响扩增和检测过程；操作人员的技术水平（如操作不熟练、操作不规范等）也会对检测结果产生影响。4.环介导等温扩增技术（LAMP）的引物设计特点包括以下哪些？A.需要多对引物B.引物特异性识别目标核酸序列C.引物可以形成环状结构D.引物长度较长答案：AB。环介导等温扩增技术（LAMP）需要设计多对引物（通常46对），这些引物可以特异性识别目标核酸序列的不同区域，从而提高扩增的特异性。引物本身不会形成环状结构，而是在扩增过程中形成环状中间体；LAMP引物的长度一般适中，并非较长。5.核酸检测实验室的分区设置一般包括以下哪些区域？A.样本处理区B.核酸扩增区C.产物分析区D.试剂准备区答案：ABCD。核酸检测实验室一般分为试剂准备区、样本处理区、核酸扩增区和产物分析区。试剂准备区用于准备核酸检测所需的试剂；样本处理区用于样本的采集、前处理和核酸提取；核酸扩增区进行核酸的扩增反应；产物分析区对扩增产物进行检测和分析。合理的分区设置可以避免交叉污染，保证检测结果的准确性。6.数字PCR技术的应用领域包括以下哪些？A.肿瘤早期诊断B.病原体检测C.基因表达分析D.转基因成分检测答案：ABCD。数字PCR技术具有高灵敏度和绝对定量的特点，在肿瘤早期诊断中，可以检测到肿瘤细胞释放到血液中的微量核酸，有助于早期发现肿瘤；在病原体检测中，能够准确检测低丰度的病原体核酸；在基因表达分析中，可以精确测定基因的表达水平；在转基因成分检测中，可以对转基因生物中的外源基因进行定量检测。7.微流控芯片技术在核酸检测中的应用形式有以下哪些？A.集成核酸提取、扩增和检测功能B.实现高通量核酸检测C.用于现场快速检测D.进行核酸序列测定答案：ABC。微流控芯片技术可以将核酸提取、扩增和检测等多个步骤集成在芯片上，实现自动化操作；通过在芯片上设计多个检测通道，可以同时对多个样本或多个目标核酸进行检测，实现高通量核酸检测；由于芯片体积小、操作简便，适合用于现场快速检测。但是微流控芯片技术一般不用于进行核酸序列测定，核酸序列测定主要依靠基因测序技术。8.核酸杂交技术的类型包括以下哪些？A.Southern杂交B.Northern杂交C.斑点杂交D.原位杂交答案：ABCD。Southern杂交用于检测DNA，是将DNA片段转移到膜上，然后与标记的探针进行杂交；Northern杂交用于检测RNA，原理与Southern杂交类似；斑点杂交是将核酸样本直接点样在膜上进行杂交，操作相对简单；原位杂交是在组织或细胞原位进行核酸杂交，能够定位目标核酸在细胞或组织中的位置。9.核酸检测中，质量控制措施包括以下哪些？A.使用标准物质B.参加室间质量评价C.定期校准仪器设备D.进行内部质量监控答案：ABCD。使用标准物质（如已知浓度的核酸样本）可以校准检测方法和仪器，保证检测结果的准确性；参加室间质量评价可以与其他实验室进行比对，评估本实验室的检测水平；定期校准仪器设备可以确保仪器的性能稳定；进行内部质量监控（如设置阳性对照、阴性对照、内参基因等）可以及时发现实验过程中的问题，保证检测结果的可靠性。10.以下哪些是核酸检测技术未来的发展趋势？A.更高的灵敏度和特异性B.更加快速、简便的检测方法C.与其他技术的融合应用D.向基层和现场检测发展答案：ABCD。核酸检测技术未来的发展趋势包括不断提高灵敏度和特异性，以便能够检测到更低丰度的核酸和更准确地识别目标核酸；开发更加快速、简便的检测方法，减少检测时间和操作难度；与其他技术（如纳米技术、生物传感器技术等）融合应用，拓展检测的功能和应用范围；向基层和现场检测发展，使核酸检测能够更广泛地应用于临床诊断、疫情防控等领域。三、简答题（每题10分，共20分）1.简述核酸提取的基本步骤和原理。核酸提取的基本步骤和原理如下：基本步骤：（1）样本采集与预处理：根据检测目的采集合适的样本（如血液、痰液、组织等），并对样本进行预处理，如对痰液进行液化处理，以破坏样本的结构，使细胞或病毒释放出来。（2）细胞裂解：使用裂解液（如含有蛋白酶K、表面活性剂等成分）破坏细胞膜和核膜，使核酸释放到溶液中。蛋白酶K可以消化蛋白质，使核酸从蛋白质复合物中解离出来；表面活性剂可以溶解细胞膜和核膜。（3）核酸分离：通过不同的方法将核酸与其他杂质（如蛋白质、多糖等）分离。常见的方法有酚氯仿抽提法，利用酚和氯仿的作用使蛋白质变性并与核酸分离；硅胶膜吸附法，利用硅胶膜对核酸的特异性吸附作用，在不同的缓冲液条件下实现核酸的吸附和洗脱；磁珠法是利用磁珠表面的功能基团与核酸结合，通过磁场分离磁珠核酸复合物。（4）核酸纯化：去除核酸溶液中的残留杂质和盐离子等，常用的方法是用乙醇或异丙醇沉淀核酸，然后用70%乙醇洗涤，最后将核酸溶解在适当的缓冲液中。（5）核酸定量与质量检测：使用分光光度计或荧光定量等方法测定核酸的浓度和纯度，评估核酸的质量。原理：核酸提取的原理主要基于核酸的物理和化学性质。核酸是带负电荷的生物大分子，在一定的条件下可以与其他物质分离。例如，在酚氯仿抽提中，酚和氯仿可以使蛋白质变性，蛋白质不溶于水相而进入有机相，核酸则留在水相中，从而实现核酸与蛋白质的分离；硅胶膜吸附法是利用硅胶膜在高盐低pH条件下对核酸有吸附作用，在低盐高pH条件下核酸又可以从硅胶膜上洗脱下来；磁珠法是利用磁珠表面的功能基团（如羧基、氨基等）与核酸在特定条件下结合，通过磁场将磁珠核酸复合物分离出来。2.比较实时荧光定量PCR技术和数字PCR技术的异同点。相同点：（1）扩增原理：两者都是基于DNA的半保留复制原理，通过引物引导和DNA聚合酶的作用，在体外对目标核酸进行扩增。（2）检测目标：都可以用于检测特定核酸序列的存在和含量，可应用于病原体检测、基因表达分析等领域。（3）基本反应体系：都需要引物、模板、DNA聚合酶、dNTP等基本成分。不同点：（1）定量方式：实时荧光定量PCR技术是通过与标准曲线比较来进行相对定量或绝对定量，其结果是基于荧光信号的强度与标准曲线的拟合；数字PCR技术可以实现对核酸分子的绝对定量，它将反应体系分割成大量的微小反应单元，每个单元中要么有目标核酸分子，要么没有，通过统计阳性反应单元的数量来计算目标核酸的含量。（2）检测灵敏度：数字PCR技术的检测灵敏度更高，能够检测到低丰度的核酸分子，尤其适用于检测样本中微量的目标核酸；实时荧光定量PCR技术的灵敏度相对较低，对于极低含量的核酸可能无法准确检测。（3）仪器设备：实时荧光定量PCR技术需要专门的荧光定量PCR仪，能够精确控制温度循环和荧光检测；数字PCR技术需要数字PCR仪，其主要特点是能够将反应体系进行微滴化或微腔室化处理，设备相对复杂且价格较高。（4）数据处理：实时荧光定量PCR技术的数据处理主要是根据荧光信号的变化绘制扩增曲线，并通过软件分析计算Ct值等参数；数字PCR技术的数据处理主要是统计阳性和阴性反应单元的数量，然后根据泊松分布原理进行计算。（5）应用场景：实时荧光定量PCR技术广泛应用于临床诊断、科研等领域，是目前核酸定量检测的常用方法；数字PCR技术主要应用于肿瘤早期诊断、病原体的低水平检测、基因编辑的精确评估等对灵敏度和定量准确性要求较高的领域。四、论述题（10分）论述核酸检测技术在疫情防控中的重要作用及面临的挑战。核酸检测技术在疫情防控中具有至关重要的作用：（1）早期诊断与疫情监测：核酸检测技术可以在感染早期检测到病原体的核酸，有助于及时发现感染者，为疫情的早期诊断提供关键依据。通过对大规模人群进行核酸检测，可以实时监测疫情的传播情况，了解疫情的分布和动态变化，为疫情防控策略的制定提供数据支持。例如在新冠疫情防控中，核酸检测成为了筛查无症状感染者和确诊病例的主要手段，对于控制疫情的传播起到了关键作用。（2）传染源追踪与隔离：准确的核酸检测结果可以帮助追踪传染源，确定感染的源头和传播链。对于检测出阳性的患者和密切接触者，能够及时进行隔离和治疗，防止疫情的进一步扩散。通过对重点人群（如入境人员、高风险地区居民等）进行核酸检测，可以有效阻断疫情