2025EBUS-TBNA样本采集与处理操作指南课件

2025CHEST指南：EBUS-TBNA样本采集与处理解读精准操作，规范处理目录第一章第二章第三章操作前准备要点标准化操作流程样本质量控制目录第四章第五章病理处理规范并发症防治操作前准备要点1.设备校准与消毒规范需确保支气管内超声探头的频率设置符合标准（通常为7.5-12MHz），避免因频率偏差导致图像分辨率不足或穿刺定位误差。超声探头频率校准每次操作前需检查穿刺针的伸缩灵活性、锁止装置稳定性及针尖完整性，防止术中发生断裂或样本残留。穿刺针机械性能检测遵循"先酶洗后高温灭菌"原则，对超声探头接触黏膜部分采用低温等离子灭菌，穿刺针组件需独立包装并高压蒸汽灭菌。多级消毒流程血小板计数<50×10⁹/L或INR>1.5列为绝对禁忌，需提前纠正凝血状态；近期服用抗凝药物者需根据半衰期调整停药时间。凝血功能异常对主支气管狭窄>70%、气管软化或近期气道支架植入患者，需评估EBUS探头通过可能引发的窒息风险。气道狭窄风险FEV1<1L或静息血氧饱和度<90%需配备体外膜氧合(ECMO)备用方案，严重肺动脉高压(>60mmHg)禁止操作。心肺功能代偿能力对困难气道、恶性高热病史或BMI>35kg/m²患者，需麻醉科会诊制定个性化镇静方案。麻醉耐受评估患者禁忌症筛查标准抗凝剂选择细胞学标本推荐使用CytoLyt溶液固定，组织块标本需预装10%中性福尔马林（体积比1:10），微生物检测需无菌生理盐水保存。温度控制链分子检测标本需立即置于-80℃冷冻转运盒，常规病理标本应保持4℃冷藏状态，所有容器需标注"生物危害"标识。条形码追踪系统采用双码核对制度（患者ID+穿刺站点编号），容器标签需耐受甲醛和低温，建议使用热转印打印的聚酯纤维标签。010203标本容器预处理要求标准化操作流程2.准确识别纵隔或肺门淋巴结的超声特征，包括大小、形状、回声模式及血流信号，确保穿刺靶点定位精准。超声图像识别保持穿刺针与支气管壁呈30-45度角进针，避免垂直穿刺导致穿透风险，同时减少气道黏膜损伤。针道角度控制在超声实时引导下，根据呼吸运动同步调整穿刺深度，确保针尖始终位于目标病灶中心区域。实时动态调整通过多普勒超声确认穿刺路径无大血管干扰，并在两个正交平面上验证针尖位置，提高取材准确性。多平面验证穿刺定位技术要点压力梯度选择采用10-20ml注射器维持持续负压，淋巴组织推荐10ml低压吸引，实性病灶可使用20ml较高负压提升细胞获取量。脉冲式抽吸技术实施间歇性负压（抽吸2秒后释放1秒），减少血液稀释效应，提高标本中组织条的比例。负压持续时间单个穿刺点维持负压时间不超过15秒，避免过度抽吸导致标本溶血或结构破坏。负压吸引参数设置将首针标本快速均匀涂布于载玻片，立即固定于95%乙醇中，防止细胞干燥变性影响形态学评估。即时涂片制备液基细胞学处理组织块分离技术分子检测预处理将抽吸物注入专用保存液，通过滤膜技术去除血液成分，浓缩有诊断价值的细胞群。肉眼可见组织条用细针挑出，置于福尔马林固定液中，确保后续组织学切片质量。保留部分新鲜标本于RNA稳定剂或低温转运介质，满足EGFR/ALK等基因检测的特殊保存要求。标本现场处理步骤样本质量控制3.合格标本评估标准标本需包含足量完整的上皮细胞团（至少6组细胞簇），且细胞核结构清晰可见，无严重挤压变形或干燥伪影，确保病理诊断的准确性。细胞学完整性要求组织核心条带长度应≥2mm，并保留间质成分（如淋巴细胞或血管结构），以满足分子检测和组织学分型的双重需求。组织条带长度标准血液或黏液占比不得超过标本总量的30%，避免因稀释导致目标细胞浓度不足而影响诊断灵敏度。血液/黏液稀释比例标本量不足多因穿刺针未抵达病灶中心或负压吸引时间不足导致，可通过术中快速细胞学评估（ROSE）实时调整穿刺位点。常与针头型号选择不当（如25G细针用于纤维化病灶）或操作手法粗暴相关，建议根据病灶硬度动态调整穿刺针规格（22G/21G）。抗凝处理不及时是主因，需规范使用肝素化注射器冲洗针道，并在标本离体后立即置于生理盐水或专用保存液中。组织破碎凝血块干扰常见取样缺陷分析快速现场评估（ROSE）应用即时反馈机制：ROSE技术可于术中确认标本adequacy，对不合格标本立即触发补充穿刺，减少二次手术率（研究显示可使诊断率提升18-22%）。染色方法选择：推荐Diff-Quik染色联合酒精固定，5分钟内完成细胞形态学初判，重点观察恶性细胞的核质比异常和染色质分布特征。要点一要点二标本处理优先级分级分子检测标本处理：优先分离新鲜组织至RNAlater保存液，避免反复冻融；剩余标本需在30分钟内转入10%中性福尔马林，固定时间严格控制在6-48小时。微生物学检测要求：若怀疑感染性病变，需单独采集非抗凝标本并立即送检微生物培养，避免与细胞学标本共用穿刺针道造成污染。补救操作技术规范病理处理规范4.快速固定技术样本采集后需立即置于95%乙醇或专用细胞保存液中，防止细胞自溶和空气干燥导致的假阴性结果，固定时间控制在15-30秒内。分层离心富集法采用600-800g离心5分钟分离细胞成分，弃上清后使用ThinPrep或SurePath液基细胞学技术制片，可提高恶性肿瘤细胞检出率20%-30%。双重染色原则常规进行HE染色和快速Diff-Quik染色同步制片，前者用于评估组织结构，后者辅助鉴别淋巴造血系统肿瘤的细胞形态特征。细胞学制片操作流程1234对直径<1mm的组织条采用低熔点琼脂糖预包埋，避免常规石蜡处理导致的组织碎裂，确保连续切片完整性。采用70%-80%-95%-100%乙醇阶梯式脱水，每级停留时间缩短至30分钟，配合正丁醇透明剂可减少小组织收缩变形。石蜡温度控制在56-58℃并添加蜂蜡调节硬度，浸蜡时间不超过2小时，防止过度硬化影响后续免疫组化抗原修复。肉眼可见组织条需在立体显微镜下确认纵轴方向，确保切片时能完整显示淋巴结生发中心结构。微组织处理技术定向包埋标准低温浸蜡方案梯度脱水程序组织块处理特殊要求所有分子检测备用样本需分装为3份独立保存，分别用于初检、复检和仲裁检测，每份样本需附带细胞计数和肿瘤纯度评估报告。质控冻存流程用于NGS检测的样本需保证肿瘤细胞占比>20%，RNA样本需在离体后立即放入RNAlater保存液，DNA样本应在-80℃冷冻避免反复冻融。核酸保护阈值EGFR/ALK/ROS1检测需留存至少5条完整组织条（总长度≥5mm），PD-L1检测需保证6张4μm厚切片的总面积≥25mm²。最小组织量要求分子检测样本留存标准并发症防治5.01020304轻度出血（I级）表现为少量渗血或局部血肿，可通过局部压迫或冰盐水冲洗控制，无需特殊干预，但需密切观察出血是否加重。中度出血（II级）出血量较多但未影响视野，需使用肾上腺素稀释液局部喷洒或电凝止血，同时暂停操作直至出血停止。重度出血（III级）大量出血导致视野模糊或血流动力学不稳定，需立即终止操作，行球囊压迫或介入栓塞，必要时请胸外科会诊。危及生命出血（IV级）罕见但需紧急处理，包括气管插管维持通气、输血扩容，并启动多学科团队（如介入放射科、胸外科）联合抢救。术中出血分级处理纵隔气肿预防方案避免同一部位