2026年生物医学实验室常见实验技术问题库

2026年生物医学实验室常见实验技术问题库一、选择题（每题2分，共20题）1.在进行PCR实验时，若PCR产物电泳结果显示只有一条很亮的条带，而没有出现预期大小的条带，可能的原因是（）。A.引物设计不合理B.DNA模板量不足C.循环数设置过高D.Taq酶失活2.在WesternBlot实验中，若蛋白条带模糊不清，可能的原因是（）。A.蛋白质浓度过高B.转膜不充分C.抗体浓度过低D.电泳条件不合适3.在流式细胞术实验中，若细胞凋亡率测定结果偏高，可能的原因是（）。A.细胞培养时间过长B.细胞固定不充分C.细胞裂解过度D.凋亡抗体标记不均4.在ELISA实验中，若标准曲线线性关系不佳，可能的原因是（）。A.底物浓度过高B.抗体滴度不合适C.洗涤不充分D.样本干扰5.在细胞培养实验中，若细胞生长不良，可能的原因是（）。A.培养基pH值不合适B.细胞密度过高C.CO2浓度过低D.细胞污染6.在基因测序实验中，若测序结果出现大量杂峰，可能的原因是（）。A.DNA模板质量差B.测序试剂污染C.测序仪故障D.PCR扩增不充分7.在免疫组化实验中，若染色结果不均匀，可能的原因是（）。A.抗体浓度过高B.温度控制不当C.蛋白质固定不充分D.组织切片厚度不均8.在蛋白质组学实验中，若蛋白质鉴定结果错误率高，可能的原因是（）。A.蛋白质酶解不充分B.质谱仪分辨率低C.数据库匹配不精确D.样本前处理不当9.在细胞凋亡实验中，若AnnexinV-FITC/PI双染结果显示细胞凋亡率偏低，可能的原因是（）。A.细胞裂解过度B.AnnexinV抗体标记不均C.PI浓度过高D.细胞培养时间过短10.在实时荧光定量PCR实验中，若Ct值偏大，可能的原因是（）。A.DNA模板量不足B.引物二聚体形成C.实时荧光检测器故障D.RNA降解二、填空题（每空1分，共10空）1.在进行WesternBlot实验时，蛋白质电泳结束后，应首先进行__________，然后再进行转膜。2.在流式细胞术实验中，细胞凋亡检测常用的染料是__________和PI。3.在ELISA实验中，常用的酶标记物有__________和HRP。4.在基因测序实验中，Sanger测序法的原理是基于__________的延伸反应。5.在免疫组化实验中，常用的封闭剂是__________。6.在蛋白质组学实验中，蛋白质鉴定常用的数据库有__________和NCBI。7.在细胞培养实验中，常用的细胞培养基有__________和DMEM。8.在实时荧光定量PCR实验中，常用的荧光报告基因是__________和FAM。9.在细胞凋亡实验中，AnnexinV-FITC/PI双染结果的判读依据是__________。10.在蛋白质组学实验中，蛋白质定量常用的方法是__________和TMT标记。三、简答题（每题5分，共5题）1.简述PCR实验中引物设计的基本原则。2.简述WesternBlot实验的基本步骤。3.简述流式细胞术实验中细胞凋亡检测的原理。4.简述ELISA实验中常见的干扰因素及应对措施。5.简述基因测序实验中Sanger测序法的原理及优缺点。四、论述题（每题10分，共2题）1.论述细胞培养实验中常见的污染类型及预防措施。2.论述蛋白质组学实验中蛋白质鉴定的基本流程及注意事项。答案与解析一、选择题1.A解析：PCR产物电泳结果显示只有一条很亮的条带，而没有出现预期大小的条带，通常是因为引物设计不合理，导致非特异性扩增或扩增效率低下。2.B解析：蛋白条带模糊不清可能是转膜不充分导致的，转膜不充分会导致蛋白转移效率低，从而影响后续检测。3.C解析：细胞凋亡率测定结果偏高可能是细胞裂解过度导致的，过度裂解会导致细胞结构破坏，从而影响凋亡检测。4.C解析：ELISA实验中标准曲线线性关系不佳可能是洗涤不充分导致的，洗涤不充分会导致背景干扰，从而影响结果准确性。5.A解析：细胞培养实验中细胞生长不良可能是培养基pH值不合适导致的，pH值会影响细胞代谢，从而影响细胞生长。6.A解析：测序结果出现大量杂峰可能是DNA模板质量差导致的，DNA模板质量差会导致测序错误率增高。7.B解析：免疫组化染色结果不均匀可能是温度控制不当导致的，温度会影响抗体结合效率，从而影响染色结果。8.C解析：蛋白质鉴定结果错误率高可能是数据库匹配不精确导致的，数据库匹配不精确会导致鉴定结果错误。9.D解析：AnnexinV-FITC/PI双染结果显示细胞凋亡率偏低可能是细胞培养时间过短导致的，细胞培养时间过短会导致凋亡细胞数量不足。10.A解析：实时荧光定量PCR实验中Ct值偏大可能是DNA模板量不足导致的，DNA模板量不足会导致扩增效率低，从而影响Ct值。二、填空题1.蛋白质脱盐2.AnnexinV3.辣根过氧化物酶（HRP）4.脱氧核糖核酸聚合酶（DNA聚合酶）5.牛血清白蛋白（BSA）6.蛋白质组数据库（ProteinProspector）7.RPMI16408.SYBRGreenI9.AnnexinV阳性细胞比例10.同位素标记定量（iTRAQ）三、简答题1.简述PCR实验中引物设计的基本原则PCR实验中引物设计的基本原则包括：①引物长度一般为18-22个碱基；②G+C含量一般在40%-60%；③引物Tm值一般在55-65℃；④引物之间不应存在互补序列；⑤引物应在模板链的3'端具有高GC含量，以提高扩增效率；⑥引物不应与其他基因或非目标序列结合。2.简述WesternBlot实验的基本步骤WesternBlot实验的基本步骤包括：①蛋白质样品制备；②SDS电泳分离蛋白质；③转膜至PVDF或NC膜；④封闭；⑤一抗孵育；⑥二抗孵育；⑦化学发光或荧光检测；⑧成像分析。3.简述流式细胞术实验中细胞凋亡检测的原理流式细胞术实验中细胞凋亡检测的原理是基于细胞膜通透性变化和细胞凋亡相关蛋白的表达。AnnexinV是一种阳离子脂质结合蛋白，能与细胞膜磷脂酰丝氨酸结合，而PI是一种核酸染料，能进入细胞核和细胞质。通过AnnexinV-FITC/PI双染，可以区分活细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞。4.简述ELISA实验中常见的干扰因素及应对措施ELISA实验中常见的干扰因素包括：①样本干扰（如高浓度脂质、血红蛋白等）；②抗体交叉反应；③底物浓度过高；④洗涤不充分。应对措施包括：①样本预处理（如离心、过滤等）；②优化抗体浓度；③调整底物浓度；④确保洗涤充分。5.简述基因测序实验中Sanger测序法的原理及优缺点Sanger测序法的原理是基于DNA聚合酶的延伸反应，通过掺入的dideoxynucleotides（ddNTPs）终止延伸，从而得到一系列不同长度的片段，通过电泳分离后，根据荧光信号检测终止位点，从而确定DNA序列。优点是准确度高、操作简单；缺点是通量低、成本高。四、论述题1.论述细胞培养实验中常见的污染类型及预防措施细胞培养实验中常见的污染类型包括：①细菌污染；②真菌污染；③支原体污染。预防措施包括：①严格无菌操作；②定期更换培养基；③使用无菌滤器过滤空气；④定期检测细胞培养皿；⑤使用支原体检测试剂盒。2.论述蛋白质组学实验中蛋白质鉴