病理科石蜡切片诊断诊疗指南与技术操作规范

病理科石蜡切片诊断诊疗指南与技术操作规范一、引言病理科石蜡切片诊断是临床疾病诊断的“金标准”，对于明确疾病的性质、指导治疗方案的制定以及判断预后等方面具有至关重要的意义。本诊疗指南与技术操作规范旨在为病理科工作人员提供全面、系统、科学的石蜡切片诊断及相关技术操作指导，以确保诊断结果的准确性和可靠性。二、标本采集与处理（一）标本采集1.手术标本手术标本的采集应遵循无菌操作原则，确保标本的完整性。手术医生在切除病变组织时，应尽量完整地获取标本，避免挤压、损伤标本。对于较大的标本，可根据病变的部位、大小等情况进行适当的分割，但要做好标记，以便后续的病理检查。例如，在切除肝脏肿瘤时，若肿瘤较大，可将肿瘤及其周围的部分正常组织一并切除，并在标本上用缝线或墨水标记出肿瘤的边界、切缘等重要信息。2.穿刺标本穿刺标本主要用于获取深部组织或难以通过手术切除的病变组织。穿刺操作应在超声、CT等影像学引导下进行，以提高穿刺的准确性和安全性。穿刺针的选择应根据病变的性质、大小和部位等因素综合考虑。一般来说，对于实质性病变，可选用18G22G的穿刺针；对于囊性病变，可选用较细的穿刺针。穿刺时应注意避免穿破血管、神经等重要结构，穿刺结束后，应及时将标本放入固定液中。3.内镜标本内镜检查是获取消化道、呼吸道等部位病变组织的常用方法。在内镜检查过程中，应准确钳取病变组织，避免钳取坏死组织或正常组织。钳取的标本应立即放入固定液中，防止标本干燥、自溶。如果一次钳取的标本数量较多，应将不同部位的标本分别固定，并做好标记，以便准确判断病变的范围和性质。（二）标本固定1.固定液的选择最常用的固定液是10%中性福尔马林，它具有固定效果好、价格低廉、易于保存等优点。其配制方法为：取40%甲醛溶液100ml，加入蒸馏水900ml，再加入适量的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节pH值至7.07.4。对于一些特殊的标本，如需要进行免疫组织化学检查的标本，可选用其他固定液，如Bouin液、Carnoy液等，但这些固定液的使用应根据具体的检查项目和要求进行选择。2.固定时间标本的固定时间应根据标本的大小、厚度等因素而定。一般来说，小标本（如穿刺标本、内镜活检标本）的固定时间为46小时，大标本（如手术切除标本）的固定时间为2448小时。如果固定时间过短，标本固定不充分，会影响后续的脱水、透明和浸蜡等处理；如果固定时间过长，标本会变得过硬，切片时容易出现破碎、皲裂等问题。3.固定方法将标本放入盛有固定液的容器中，固定液的量应至少为标本体积的510倍。对于较大的标本，可在标本上切几个小口，以利于固定液的渗透。固定过程中，应确保标本完全浸没在固定液中，避免标本与容器壁或其他物体接触造成挤压。三、标本脱水（一）脱水剂的选择常用的脱水剂有乙醇、丙酮等，其中乙醇是最常用的脱水剂。乙醇具有脱水能力强、对组织损伤小等优点。根据脱水的不同阶段，可选用不同浓度的乙醇，一般从低浓度到高浓度依次进行脱水。（二）脱水步骤1.将固定好的标本从固定液中取出，用蒸馏水冲洗干净，然后依次放入不同浓度的乙醇中进行脱水。2.脱水程序一般为：70%乙醇24小时，80%乙醇24小时，90%乙醇24小时，95%乙醇24小时，无水乙醇Ⅰ24小时，无水乙醇Ⅱ24小时。对于一些质地较硬或体积较大的标本，脱水时间可适当延长；对于一些质地较软或体积较小的标本，脱水时间可适当缩短。四、透明（一）透明剂的选择常用的透明剂有二甲苯、氯仿、甲苯等，其中二甲苯是最常用的透明剂。它具有透明速度快、能与乙醇和石蜡互溶等优点。（二）透明步骤将脱水后的标本从无水乙醇中取出，放入二甲苯Ⅰ中24小时，再放入二甲苯Ⅱ中24小时，直至标本完全透明。透明过程中，应注意观察标本的透明度，避免透明过度或不足。如果透明过度，标本会变得过于脆弱，切片时容易破碎；如果透明不足，标本中的乙醇不能完全被透明剂取代，会影响后续的浸蜡效果。五、浸蜡（一）石蜡的选择应选择熔点适宜、纯度高、硬度适中的石蜡。一般来说，对于常温切片，可选用熔点为5658℃的石蜡；对于冰冻切片，可选用熔点较低的石蜡。（二）浸蜡步骤将透明后的标本从二甲苯中取出，放入已熔化的石蜡Ⅰ中24小时，再放入石蜡Ⅱ中24小时，最后放入石蜡Ⅲ中24小时。浸蜡过程中，应确保石蜡的温度恒定，避免石蜡凝固。六、包埋（一）包埋模具的选择常用的包埋模具为金属包埋模具或塑料包埋模具，应根据标本的大小和形状选择合适的包埋模具。（二）包埋操作1.将熔化的石蜡倒入包埋模具中，然后迅速将标本放入模具中，注意标本的摆放方向和位置，使其切面朝上，便于后续的切片。2.用镊子轻轻调整标本的位置，使其处于模具的中央，然后将包埋模具放在冷台上，待石蜡凝固后，将包埋块从模具中取出。七、切片（一）切片机的选择与调试应选择性能稳定、切片质量好的切片机，如轮转式切片机。在切片前，应根据标本的硬度和切片的厚度要求，对切片机进行调试。一般来说，石蜡切片的厚度为46μm。（二）切片操作1.将包埋块安装在切片机的标本夹上，调整切片机的切片厚度和速度。2.开始切片时，应先切去包埋块表面的多余石蜡，露出标本组织，然后进行连续切片。切片过程中，应保持切片机的稳定，避免切片出现褶皱、断裂等问题。3.用毛笔轻轻将切下的切片从切片刀上取下，放入温水中展平，然后用载玻片将切片捞起，使其平整地贴附在载玻片上。八、染色（一）苏木精伊红（HE）染色1.脱蜡与水化将贴有切片的载玻片放入二甲苯Ⅰ中510分钟，再放入二甲苯Ⅱ中510分钟，以去除切片中的石蜡。然后依次放入无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各23分钟，进行水化处理。2.苏木精染色将水化后的切片放入苏木精染液中染色510分钟，然后用自来水冲洗切片，使切片返蓝。3.伊红染色将返蓝后的切片放入1%伊红染液中染色23分钟，然后用自来水冲洗切片，去除多余的染液。4.脱水、透明与封片将染色后的切片依次放入95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ中各23分钟，进行脱水处理。然后放入二甲苯Ⅰ中510分钟，再放入二甲苯Ⅱ中510分钟，进行透明处理。最后用中性树胶封片，盖上盖玻片。（二）特殊染色根据诊断的需要，可进行一些特殊染色，如免疫组织化学染色、原位杂交染色等。特殊染色的操作应严格按照相应的试剂盒说明书进行。例如，免疫组织化学染色主要用于检测肿瘤细胞中的特定抗原或抗体，其操作步骤包括：脱蜡与水化、抗原修复、封闭内源性过氧化物酶、一抗孵育、二抗孵育、显色、复染、脱水、透明与封片等。九、诊断报告（一）报告内容病理诊断报告应包括患者的基本信息（姓名、性别、年龄、住院号等）、标本来源（手术标本、穿刺标本等）、标本检查情况（标本的大小、形状、颜色等）、病理诊断结果等。病理诊断结果应明确、准确，对于良性病变和恶性病变应进行清晰的区分，并尽可能给出具体的病理类型和分级。（二）报告审核与签发病理诊断报告应由具有中级以上职称的病理医师进行审核，审核无误后，由审核医师签发报告。报告签发后，应及时将报告发送给临床科室。十、质量控制（一）标本质量控制确保标本的采集、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等过程符合规范要求，避免标本出现自溶、坏死、挤压等问题。定期对标本的质量进行检查和评估，发现问题及时整改。（二）切片质量控制定期检查切片机的性能，确保切片的厚度均匀、无褶皱、无断裂等。对切片的质量进行评估，如切片的平整度、染色的均匀度等，不符合质量要求的切片应重新制作。（三）诊断质量控制建立病理诊断会诊制度，对于疑难病例或诊断不明确的病例，应组织多名病理医师进行会诊，以提高诊断的准确性。定期对病理诊断报告进行质量检查，分析诊断误差的原因，采取相应的改进措施。十一、安全防护（一）化学试剂的安全使用在使用甲醛、二甲苯、乙醇等化学试剂时，应严格遵守操作规程，佩戴手套、口罩等防护用品，避免皮肤接触和吸入有害气体。化学试剂应妥善保存，避免泄漏和挥发。（二）生物安全防护对于含有病原体的标本，应按照生物安全的相关规定进行处理，防止病原体的传播。在操作过程中，应避免标本的溅出和污染，操作结束后，应对工作区域进行彻底的消毒。十二、人员培训（一）专业知识培训定期组织病理科工作人