酶制剂定向进化工程师岗位招聘考试试卷及答案

酶制剂定向进化工程师岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.易错PCR中常用的诱变剂是______。2.DNAshuffling的核心步骤是______和重组。3.酶定向进化的两大核心策略是随机进化和______。4.易错PCR的突变率通常控制在______个碱基/基因左右。5.高通量筛选的关键是______和灵敏检测方法。6.理性设计依赖酶的______和催化机制。7.噬菌体展示常用的载体是______噬菌体。8.酶改造策略分为随机、理性和______设计。9.定向进化起始材料通常是______酶基因。10.饱和突变常用方法是______（如重叠延伸PCR）。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.易错PCR中Mn²+的作用是（）A.提高酶保真度B.降低酶保真度C.促进引物结合D.稳定模板2.DNAshuffling不需要的酶是（）A.DNaseIB.Taq酶C.连接酶D.限制性内切酶3.高通量筛选不常用的方法是（）A.荧光检测B.比色检测C.质谱分析D.菌落显色4.理性设计不包括的步骤是（）A.结构解析B.突变位点预测C.随机文库构建D.活性验证5.噬菌体展示的原理是（）A.噬菌体表达酶B.酶与外壳蛋白融合C.噬菌体感染宿主D.噬菌体扩增基因6.定向进化循环顺序正确的是（）A.突变→筛选→重组→验证B.突变→重组→筛选→验证C.重组→突变→筛选→验证D.突变→筛选→验证→重组7.饱和突变不包括的方法是（）A.重叠延伸PCRB.易错PCRC.定点饱和突变D.简并引物PCR8.易错PCR的模板通常是（）A.基因组DNAB.质粒DNAC.cDNAD.任意DNA9.定向进化目的不包括（）A.提高活性B.改变底物特异性C.降低稳定性D.提高热稳定性10.筛选压力的作用是（）A.增加突变数B.富集目标突变体C.提高突变率D.促进重组三、多项选择题（共10题，每题2分）1.定向进化策略包括（）A.易错PCRB.DNAshufflingC.理性设计D.噬菌体展示2.易错PCR影响因素包括（）A.Mn²+浓度B.dNTP比例C.Taq酶用量D.循环次数3.DNAshuffling步骤包括（）A.片段化B.无引物PCRC.有引物PCRD.筛选4.高通量筛选特点包括（）A.快速B.微量C.灵敏D.低通量5.理性设计前提是（）A.结构已知B.催化机制明确C.突变位点可预测D.无需结构6.噬菌体展示应用包括（）A.酶进化B.抗体筛选C.蛋白相互作用D.基因克隆7.酶改造技术包括（）A.易错PCRB.定点突变C.噬菌体展示D.基因编辑8.定向进化关键环节是（）A.文库构建B.高通量筛选C.活性验证D.理性设计9.饱和突变优势是（）A.覆盖所有氨基酸突变B.针对特定位点C.突变率高D.无需结构10.定向进化与理性设计区别是（）A.是否依赖结构B.是否随机突变C.筛选必要性D.靶点数量四、判断题（共10题，每题2分）1.易错PCR只能引入随机突变，不能定向改造。（）2.DNAshuffling是非随机重组策略。（）3.高通量筛选无需预筛选，直接筛所有突变体。（）4.理性设计依赖酶结构和催化机制。（）5.噬菌体展示可进化酶的亲和力和活性。（）6.定向进化每轮需筛选和验证。（）7.饱和突变可覆盖目标位点20种氨基酸突变。（）8.易错PCR突变率越高，效率越高。（）9.DNAshuffling可重组不同来源基因。（）10.定向进化只能改酶活性，不能改其他性质。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述易错PCR的原理及应用。2.定向进化与理性设计的主要区别是什么？3.高通量筛选在酶定向进化中的作用及关键要求？4.简述DNAshuffling的基本流程。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何从策略、文库构建、筛选三方面提高定向进化效率？2.结合工业酶应用（如洗涤剂酶、生物燃料酶），谈谈定向进化的价值。---答案部分一、填空题答案1.Mn²+（锰离子）2.片段化3.理性设计4.1-55.微型化（自动化操作）6.三维结构7.M13（丝状）8.半理性9.野生型10.重叠延伸PCR（简并引物PCR）二、单项选择题答案1.B2.D3.C4.C5.B6.B7.B8.B9.C10.B三、多项选择题答案1.ABD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABC6.ABC7.ABCD8.ABC9.AB10.ABC四、判断题答案1.×2.×3.×4.√5.√6.√7.√8.×9.√10.×五、简答题答案1.原理：通过调整PCR条件（加Mn²+、改变dNTP比例）降低Taq酶保真度，使基因引入随机点突变；应用：构建酶突变文库，筛选高活性、热稳定等优良性质的酶。2.①依赖结构：理性设计需酶三维结构，定向进化无需；②突变方式：理性设计定点突变，定向进化随机突变；③筛选：定向进化依赖高通量筛选，理性设计筛选量少；④靶点：理性设计针对关键位点，定向进化覆盖全基因。3.作用：快速筛选大量突变体，富集目标突变；关键要求：微型化（μL级反应）、灵敏（低浓度检测）、自动化（减少误差）、特异（排除干扰）、高通量（日筛万级以上）。4.①DNaseI片段化基因（10-50bp）；②无引物PCR随机重组片段；③有引物PCR扩增重组基因；④构建文库；⑤筛选目标突变体。六、讨论题答案1.策略：结合半理性设计（定点饱和突变关键位点），减少文库冗余；文库构建：优化易错PCR条件（突变率1-5个碱基/基因），用DNAshuffling重组基因；筛选：建立荧光/比色自动化高通量