生物制药层析柱装填技师（中级）考试试卷及答案

生物制药层析柱装填技师（中级）考试试卷及答案一、填空题（10题，每题1分）1.生物制药层析常用填料按原理分离子交换型、______、亲和型、疏水作用型等。2.层析柱装填多采用______法（避免填料干涸）。3.评价柱效的核心指标是______（符号表示）。4.填料装填前需______处理（去除气泡、杂质）。5.离子交换平衡液pH应______目标蛋白pI（保证电荷）。6.凝胶过滤填料需匹配目标蛋白______范围。7.装填后用______冲洗稳定床层。8.柱效低常见原因是床层存在______。9.亲和填料需偶联______（特异性捕获蛋白）。10.层析柱长期保存需加______（防微生物污染）。一、填空题答案1.凝胶过滤型（分子筛型）2.湿法3.理论塔板数（N）4.溶胀/脱气5.远离（高于/低于）6.分子量分离7.平衡缓冲液8.气泡/裂缝9.特异性配基10.抑菌剂（20%乙醇/NaN₃）二、单项选择题（10题，每题2分）1.分离分子量差异大的蛋白选哪种填料？A.离子交换B.凝胶过滤C.亲和D.疏水2.装填错误操作是？A.缓慢倒填料B.静置稳定C.快速加压D.防干涸3.理论塔板数N计算不含的参数是？A.保留时间B.峰宽C.柱长D.填料粒径4.离子交换填料装填前用______平衡？A.去离子水B.高盐液C.低盐液D.有机溶剂5.凝胶过滤柱效低最可能原因是？A.溶胀不足B.pH不当C.配基脱落D.疏水过强6.柱压升高不包括的原因是？A.填料堵塞B.气泡积累C.流速过快D.配基饱和7.亲和层析装填注意点是？A.高压装填B.防配基变性C.直接上样D.反复冻融8.装填合格的标志是？A.峰拖尾B.N值高C.柱压波动D.床层倾斜9.维护错误做法是？A.定期反冲B.防微生物C.纯水处理保存D.记录次数10.疏水层析装填用______缓冲液？A.低盐B.高盐C.中性D.酸性二、单项选择题答案1.B2.C3.D4.C5.A6.D7.B8.B9.C10.B三、多项选择题（10题，每题2分，多选/少选不得分）1.影响柱效的因素有？A.填料粒径B.装填均匀性C.流速D.样品浓度2.装填前准备工作含？A.柱体清洗B.填料溶胀C.脱气D.配平衡液3.离子交换填料类型？A.阳离子交换B.阴离子交换C.混合床D.凝胶型4.凝胶过滤应用？A.分子量测定B.脱盐C.蛋白纯化D.浓度测定5.常见问题及解决方法？A.柱压高→反冲B.峰拖尾→重装填C.柱效低→换填料D.气泡→排气6.亲和层析关键步骤？A.配基偶联B.平衡C.洗脱D.再生7.装填需避免的操作？A.填料干涸B.快速倾倒C.高压装填D.引入气泡8.疏水层析特点？A.高盐结合B.低盐洗脱C.疏水作用D.需特异性配基9.柱保存注意事项？A.加抑菌剂B.防冷冻C.密封D.定期冲洗10.柱性能评价指标？A.N值B.分离度C.柱压D.保留时间三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.AB4.ABC5.ABD6.ABCD7.ABCD8.ABC9.ABCD10.ABCD四、判断题（10题，每题2分，√/×）1.装填流速越快，柱效越高。（×）2.凝胶过滤分离范围越大，分辨率越高。（×）3.离子交换高盐平衡液结合力越强。（×）4.亲和填料可高温灭菌。（×）5.装填后需冲洗至柱压稳定。（√）6.柱效低仅因填料老化。（×）7.疏水层析洗脱需降盐浓度。（√）8.柱用后可直接去离子水保存。（×）9.装填需垂直固定柱体。（√）10.N值越高，柱效越好。（√）四、判断题答案1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.√8.×9.√10.√五、简答题（4题，每题5分）1.简述离子交换填料装填步骤答案：①填料溶胀：加缓冲液搅拌/超声脱气，静置4-8小时；②柱体准备：清洗后垂直固定，装筛板；③湿法装填：缓慢倒入溶胀填料，加缓冲液打开下端出口，控制流速<1ml/min；④稳定床层：用平衡液冲洗至柱压稳定；⑤柱效检测：进标准蛋白，计算N值（需>2000/米）。2.如何判断装填合格？答案：①视觉：床层平整无气泡/裂缝；②柱压：平衡液冲洗时稳定无波动；③柱效：标准样品N值达标；④峰形：对称无拖尾/前沿；⑤重复性：重复进样保留时间偏差<2%。3.凝胶过滤装填注意事项？答案：①选匹配分子量范围的填料；②充分溶胀（避免过度搅拌）；③装填流速<1ml/min（防破碎）；④装填后静置30分钟；⑤操作防干燥/污染；⑥避免高压（≤0.3MPa）。4.层析柱维护要点？答案：①用后冲洗：平衡液冲至无残留样品；②反冲：柱压高时反向冲洗（流速为正常1/2）；③保存：加20%乙醇/0.02%NaN₃密封；④防冷冻：避免填料冻裂；⑤记录：跟踪使用次数/柱效，老化则更换。五、简答题答案（同上）六、讨论题（2题，每题5分）1.层析柱装填后柱效低的原因及解决方法答案：常见原因：①填料溶胀不足（床层不均）；②装填过快（局部压实）；③气泡残留（脱气不彻底）；④填料破碎（流速过快）；⑤筛板堵塞（杂质残留）。解决方法：①重新溶胀（延长时间+超声）；②慢速湿法重装填；③反冲排气；④更换破碎填料；⑤清洗筛板（用0.2μm滤膜过滤缓冲液）。通过上述操作可提升柱效至合格范围。2.离子交换、凝胶过滤、亲和层析装填的异同答案：相同点：①均湿法装填（防干涸）；②装填前溶胀/脱气；③需垂直固定；④装填后平衡至柱压稳定