生物制药纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案

生物制药纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.单抗捕获常用的亲和层析填料是______。2.离子交换层析依赖目标蛋白的______差异结合。3.除菌过滤的滤膜孔径为______μm。4.TFF（切向流过滤）属于______（死端/切向）过滤。5.疏水层析中，目标蛋白在______（高/低）盐下结合填料。6.缓冲液酸性调节剂常用______。7.活性收率=______×100%。8.去除内毒素常用______亲和层析。9.层析柱再生常用______溶液清洗。10.病毒灭活常用______（如低pH）方法。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.单抗特异性捕获首选层析是：A.离子交换B.蛋白A亲和C.疏水D.凝胶过滤2.降低缓冲液pH优先选：A.HClB.柠檬酸C.NaOHD.醋酸3.除菌过滤属于：A.绝对过滤B.深层过滤C.预过滤D.粗过滤4.TFF截留分子量（MWCO）通常比目标蛋白：A.小10-20kDaB.大10-20kDaC.相等D.无关5.疏水层析洗脱用：A.降盐B.升盐C.变pHD.加变性剂6.带负电蛋白选______离子交换填料：A.阴B.阳C.凝胶D.蛋白A7.单抗低pH灭活典型条件：A.pH3.0-3.5，30minB.pH5.0-6.0，1hC.pH7.0-8.0，2hD.pH2.0-2.5，10min8.有效去内毒素的方法：A.0.22μm过滤B.疏水层析C.阴离子交换D.凝胶过滤9.层析柱清洗不包括：A.去残留蛋白B.灭活微生物C.再生填料D.提高流速10.粗品（100U/mL，100mL）纯化后（500U/mL，20mL），活性收率为：A.10%B.20%C.50%D.100%三、多项选择题（每题2分，共20分）1.单抗纯化常用层析：A.蛋白A亲和B.阳离子交换C.阴离子交换D.疏水2.缓冲液配制注意事项：A.准确称量B.超纯水配制C.过滤除菌D.调pH3.TFF操作要点：A.控跨膜压（TMP）B.稳切向流速C.定期清洗D.截留体积越大越好4.内毒素控制环节：A.原料控制B.设备灭菌C.缓冲液除菌D.填料选择5.层析柱再生步骤：A.强碱清洗B.强酸清洗C.有机溶剂冲洗D.平衡液平衡6.病毒清除验证方法：A.低pH灭活B.纳米过滤C.层析去除D.加热7.蛋白复性方法：A.透析B.稀释C.柱上复性D.变性剂梯度洗脱8.纯化CQA（关键质量属性）：A.蛋白纯度B.活性回收率C.内毒素D.病毒残留9.除菌过滤验证项目：A.细菌挑战B.完整性测试C.流速测试D.蛋白截留10.疏水层析影响因素：A.盐浓度B.pHC.温度D.填料疏水强度四、判断题（每题2分，共20分）1.离子交换基于分子量差异分离。（）2.疏水层析低盐下结合蛋白。（）3.TFF是死端过滤。（）4.0.22μm滤膜可去所有微生物。（）5.蛋白A结合单抗Fc段。（）6.缓冲液pH接近pI提高蛋白溶解度。（）7.疏水层析洗脱需降盐。（）8.内毒素是革兰氏阳性菌成分。（）9.层析柱用1MNaOH再生。（）10.病毒灭活仅能化学方法。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述蛋白A亲和层析捕获单抗的原理及步骤。2.简述TFF操作要点。3.简述纯化工艺内毒素控制关键环节。4.简述层析柱清洗再生方法及目的。六、讨论题（每题5分，共10分）1.单抗纯化中蛋白A柱回收率偏低的原因及解决措施。2.如何确定层析工艺的CPP（关键工艺参数）及CQA？---答案部分一、填空题答案1.蛋白A填料2.电荷3.0.224.切向5.高6.HCl（盐酸）7.（纯化后总活性/粗品总活性）8.内毒素9.NaOH（氢氧化钠）10.低pH孵育二、单项选择题答案1.B2.A3.A4.A5.A6.A7.A8.C9.D10.D三、多项选择题答案1.ABCD2.ABD3.ABC4.ABCD5.ACD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判断题答案1.×2.×3.×4.√5.√6.×7.√8.×9.√10.×五、简答题答案1.原理：蛋白A特异性结合单抗Fc段，杂蛋白不结合；步骤：①柱平衡（pH7.0-7.4缓冲液）；②上样（单抗结合）；③洗杂（去未结合杂蛋白）；④洗脱（低pH3.0-3.5解离）；⑤再生（NaOH清洗+平衡）。2.①控TMP<1bar，避免膜损伤；②稳切向流速（1-5L/min）防浓差极化；③定期排液清洗；④选合适MWCO（比目标蛋白小10-20kDa）；⑤缓冲液pH/盐浓度兼容蛋白。3.①原料无内毒素；②设备/耗材无热原；③缓冲液过滤/灭菌；④填料选低内毒素结合型；⑤最终产品内毒素过滤；⑥洁净环境控制。4.方法：①NaOH清洗（去蛋白、灭活微生物/内毒素）；②异丙醇（去疏水杂质）；③EDTA（去金属离子）；目的：恢复填料结合力、去杂质、灭活污染物、保证重复性。六、讨论题答案1.原因：①填料老化（结合位点减少）；②上样过量；③平衡液pH不当；④洗杂过度；⑤洗脱不充分；措施：①换填料；②优化上样量；③调平衡pH；④缩短洗杂时间；⑤延长洗脱时间/降低pH。2.CPP确定：①风险评估找影响C