生物制药纯化工艺工程师岗位招聘考试试卷及答案

生物制药纯化工艺工程师岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.生物制药纯化中最常用的层析技术包括亲和层析、______、离子交换层析和疏水相互作用层析。2.GMP的核心是______。3.超滤技术在纯化中主要用于______和脱盐浓缩。4.单抗亲和层析常用配体有ProteinA、______等。5.关键工艺参数（CPP）是影响______的参数。6.病毒灭活常用方法有低pH孵放、______和溶剂/去污剂法。7.层析柱装填关键指标是柱效和______。8.蛋白纯度检测常用SDS、______和HPLC。9.超滤膜截留分子量（MWCO）基于目标蛋白与杂质的______差异。10.样品上柱前需______去除不溶性颗粒。答案：1.凝胶过滤层析（分子筛层析）2.防止污染、交叉污染、混淆和差错3.蛋白分离（分子量截留分离）4.抗原（特定抗体）5.关键质量属性（CQA）6.巴氏消毒法7.对称性（拖尾因子）8.毛细管电泳（CE）9.分子量10.过滤（离心）二、单项选择题（共10题，每题2分）1.可用于去除内毒素的层析技术是？A.亲和层析B.离子交换层析C.凝胶过滤D.疏水层析2.GMP验证“三要素”不包括？A.工艺B.设备C.人员D.物料3.ProteinA亲和层析洗脱单抗的条件是？A.高盐B.低pHC.高pHD.有机溶剂4.超滤TMP过高会导致？A.膜污染加重B.回收率提高C.通量增加D.杂质去除率提高5.属于病毒去除工艺的是？A.低pH孵放B.纳滤C.巴氏消毒D.以上都是6.回收率计算公式是？A.（最终目标蛋白量/初始量）×100%B.（杂质最终量/初始量）×100%C.目标蛋白/杂质×100%D.以上都不对7.凝胶过滤中，分子量小的物质洗脱体积？A.大B.小C.相同D.不确定8.属于CQA的是？A.蛋白纯度B.层析柱装填时间C.超滤通量D.上样速度9.常用脱盐方法是？A.透析B.凝胶过滤C.离子交换D.以上都是10.设备最难清洁的部位是？A.表面B.管道死角C.阀门D.过滤器答案：1.B2.C3.B4.A5.B6.A7.A8.A9.D10.B三、多项选择题（共10题，每题2分）1.亲和层析组成包括？A.载体B.配体C.样品D.洗脱液2.纯化常见杂质有？A.HCPB.HCDC.内毒素D.蛋白聚体3.GMP要求纯化文件包括？A.工艺规程B.验证方案C.操作SOPD.质量标准4.超滤膜污染类型有？A.吸附污染B.浓差极化C.生物污染D.机械污染5.单抗纯化主要步骤包括？A.捕获层析B.精细层析C.病毒灭活/去除D.超滤浓缩6.层析柱装填评价指标有？A.理论塔板数B.拖尾因子C.柱压D.回收率7.病毒验证需考虑？A.灭活效率B.蛋白活性C.工艺稳定性D.设备兼容性8.蛋白复性方法有？A.稀释复性B.透析复性C.柱上复性D.以上都是9.HCP检测常用方法？A.ELISAB.WesternBlotC.HPLCD.毛细管电泳10.属于CPP的是？A.层析流速B.低pH孵放时间C.超滤TMPD.上样量答案：1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.AB10.ABCD四、判断题（共10题，每题2分）1.凝胶过滤可用于蛋白分子量测定。2.亲和层析配体与目标蛋白结合不可逆。3.GMP要求纯化工艺全生命周期验证。4.超滤通量随TMP线性增加。5.病毒灭活与去除是同一概念。6.层析柱效越高越好。7.凝胶过滤可有效去除内毒素。8.验证需确认CPP可接受范围。9.疏水层析可去除蛋白聚体。10.清洁验证残留限度基于安全剂量。答案：1.对2.错3.对4.错5.错6.对7.错8.对9.对10.对五、简答题（共4题，每题5分）1.简述ProteinA亲和层析在单抗纯化中的作用及关键步骤。答案：ProteinA亲和层析是单抗捕获核心，利用ProteinA与Fc段特异性结合富集目标蛋白。关键步骤：①柱平衡：用PBS等缓冲液平衡至基线稳定；②上样：澄清后的细胞培养液以上样流速上柱；③洗涤：用平衡缓冲液（或含低浓度盐/表面活性剂）洗去未结合杂质；④洗脱：低pH缓冲液（如0.1M柠檬酸，pH3.0-3.5）洗脱；⑤中和：洗脱液立即调至中性防变性；⑥柱再生：NaOH或高盐缓冲液再生柱，恢复结合能力。2.什么是CQA？列举单抗纯化3个CQA。答案：CQA是影响药品安全有效性的属性，超出范围则质量不合格。单抗纯化CQA包括：①纯度：单体纯度≥95%，聚体/碎片含量；②杂质残留：HCP≤100ppm、HCD≤10pg/剂量、内毒素≤0.5EU/剂量；③生物活性：单抗与抗原结合活性符合标准；④回收率：目标蛋白回收率满足经济性要求。3.简述超滤在纯化中的应用及注意事项。答案：超滤基于分子量截留，应用：①浓缩目标蛋白；②脱盐/缓冲液置换；③澄清不溶性颗粒。注意事项：①膜选择：选目标蛋白分子量1/3-1/2的MWCO膜；②TMP控制：10-30psi，避免过高导致污染/变性；③通量维护：定期反冲洗/化学清洗；④回收率：避免过度浓缩导致聚集；⑤无菌要求：无菌制品需用无菌膜，操作在无菌环境。4.简述纯化工艺验证的内容及目的。答案：验证是证明工艺稳定生产合格产品的过程，内容：①工艺设计：确定CPP、CQA及范围；②PPQ：连续3批验证工艺稳定性；③清洁验证：确认设备残留符合限度；④病毒验证：证明灭活/去除有效性。目的：①确保工艺可控、产品质量一致；②符合GMP要求支持上市；③降低生产风险；④明确参数范围指导生产。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何有效控制HCP残留？答案：控制HCP需多环节优化：①捕获层析：用高特异性配体（ProteinA），优化洗涤缓冲液（含盐/表面活性剂）去除弱结合HCP；②精细层析：离子交换/疏水层析利用电荷/疏水性差异分离；③参数优化：调整上样量、流速、洗涤次数提高去除效率；④质量控制：ELISA实时监测残留；⑤源头控制：优化细胞培养减少初始HCP含量；⑥病毒步骤：低pH孵放辅助去除部分HCP。2.蛋白回收率低如何排查？答案：从上下游逐一排查：①上游：细胞上清是否澄清（过滤/离心不彻底）、表达量是否稳定；②捕获层析：配体结合能力下降（再生