合成生物药物纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案

合成生物药物纯化工程师岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.蛋白纯化中最常用的疏水相互作用层析填料是______。2.离子交换层析中，缓冲液pH应与目标蛋白pI相差至少______个单位。3.生物药物纯化后除菌过滤常用的滤膜孔径是______μm。4.纯化回收率计算公式为：回收率=______×100%。5.层析柱再生常用的强碱试剂是______。6.常用的蛋白浓度比色测定方法有BCA法和______法。7.核酸纯化中去除蛋白质的常用试剂是______。8.冻干生物药物常用的保护剂有蔗糖和______。9.GMP要求纯化过程记录需包含______、日期、操作人员等信息。10.亲和层析中，针对His标签蛋白的常用配体是______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.蛋白纯化工艺中，通常最先采用的层析步骤是（）A.离子交换层析B.疏水相互作用层析C.亲和层析D.凝胶过滤层析2.适合pH7.0左右使用的缓冲液是（）A.Tris-HClB.醋酸-醋酸钠C.柠檬酸-柠檬酸钠D.硼酸-硼砂3.层析柱峰形拖尾最可能的原因是（）A.柱压过高B.样品未过滤C.填料压缩D.缓冲液浓度过低4.滤膜完整性测试常用方法是（）A.气泡点法B.重量法C.分光光度法D.电泳法5.下列哪项不是蛋白回收率偏低的原因？（）A.目标蛋白吸附填料B.样品降解C.洗脱条件不合适D.缓冲液pH接近pI6.去除层析柱疏水杂质的试剂是（）A.1MNaOHB.20%乙醇C.1MNaClD.0.1MHCl7.可检测蛋白纯度的方法是（）A.SDSB.紫外分光光度法C.凯氏定氮法D.比浊法8.核酸纯化中去除RNA的酶是（）A.DNaseIB.RNaseAC.蛋白酶KD.逆转录酶9.冻干工艺的前提条件是（）A.样品灭菌B.预冻至-40℃以下C.样品浓缩D.除热原10.纯化偏差的正确处理方式是（）A.隐瞒记录B.实时记录并评估C.直接调整工艺D.事后补记三、多项选择题（每题2分，共20分）1.常用蛋白纯化层析方法包括（）A.离子交换层析B.疏水相互作用层析C.亲和层析D.凝胶过滤层析E.反向层析2.缓冲液配制注意事项（）A.准确称量B.过滤除菌C.调节pHD.新鲜配制E.加防腐剂3.层析柱维护要点（）A.控制柱压B.样品过滤C.定期再生D.合适缓冲液保存E.高温灭菌4.除菌过滤验证内容（）A.完整性测试B.细菌挑战C.流速测试D.吸附性测试E.热原验证5.蛋白纯度分析方法（）A.SDSB.WesternBlotC.HPLCD.毛细管电泳E.质谱6.核酸纯化常用试剂（）A.酚-氯仿B.乙醇C.蛋白酶KD.RNaseAE.硅胶柱7.冻干关键参数（）A.预冻温度B.升华温度C.解析温度D.真空度E.冻干时间8.纯化污染物控制措施（）A.无菌操作B.颗粒过滤C.热原去除D.避免交叉污染E.环境监测9.GMP纯化记录要求（）A.实时记录B.可追溯C.签名确认D.完整准确E.事后补记需说明10.回收率影响因素（）A.上样量B.洗脱条件C.样品降解D.填料吸附E.检测误差四、判断题（每题2分，共20分）1.所有层析都需梯度洗脱。（）2.缓冲液pH越接近pI，离子交换效果越好。（）3.除菌滤膜可重复使用。（）4.回收率越高，产品质量越好。（）5.层析柱清洗只需NaOH。（）6.BCA法可测μg/mL级蛋白浓度。（）7.核酸纯化需去除内毒素。（）8.冻干前需预冻样品。（）9.纯化记录可事后补记。（）10.GMP允许未评估偏差。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述离子交换层析原理及关键操作要点。2.简述除菌过滤的作用及验证要求。3.简述层析柱再生方法及注意事项。4.简述纯化过程内毒素控制措施。六、讨论题（每题5分，共10分）1.如何优化蛋白纯化工艺平衡回收率与纯度？2.层析柱性能下降（峰拖尾、分辨率低）的应对措施？答案部分一、填空题答案1.苯基琼脂糖凝胶（PhenylSepharose）2.13.0.224.（回收液目标物总量/上样液目标物总量）5.NaOH（1MNaOH）6.Bradford（Lowry）7.酚-氯仿（蛋白酶K）8.甘露醇（海藻糖）9.批次号（产品名称）10.Ni-NTA二、单项选择题答案1.C2.A3.B4.A5.D6.B7.A8.B9.B10.B三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCDE5.ABCDE6.ABCDE7.ABCDE8.ABCDE9.ABCD10.ABCDE四、判断题答案1.×2.×3.×4.×5.×6.√7.√8.√9.×10.×五、简答题答案1.原理：利用目标蛋白与填料离子基团的静电差异分离。要点：①缓冲液pH与pI差≥1（保证带电荷）；②低盐上样、高盐洗脱；③样品过滤防堵；④控制流速防柱压过高；⑤梯度洗脱优化分离。2.作用：去除微生物，保证无菌。验证要求：①气泡点法测完整性；②细菌挑战试验；③流速稳定性测试；④吸附性测试（不吸附目标物）；⑤热原去除验证（如需）。3.常用方法：①NaOH清洗蛋白/核酸；②乙醇/异丙醇去疏水杂质；③高盐缓冲液去离子吸附杂质。注意：①控制柱压；②再生后平衡至工作缓冲液；③亲和柱避免强酸碱；④定期测柱性能。4.措施：①原料无内毒素污染；②阴离子交换层析去除；③0.1μm滤膜/超滤；④试剂无菌无热原；⑤洁净区操作；⑥鲎试验定期检测。六、讨论题答案1.优化策略：①层析顺序（先亲和富集，再离子交换/疏水纯化）；②缓冲液调整（pH、盐浓度减少非特异性吸附）；③梯度洗脱斜率优化（平衡纯度与回收率）；④加保护剂防降解；⑤在线检测实时调整。需结合蛋白特性迭代，避免过度追求纯度导致回收率