2025年实验动物养殖员协作考核试卷及答案

2025年实验动物养殖员协作考核试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.根据2024年修订的《实验动物管理条例》，屏障环境下SPF级小鼠的最小饲养空间标准为（）A.250cm²/只（30-50g）B.300cm²/只（30-50g）C.350cm²/只（30-50g）D.400cm²/只（30-50g）2.实验动物饮用水微生物检测中，总大肠菌群的限值为（）A.不得检出B.≤3MPN/100mLC.≤10MPN/100mLD.≤50MPN/100mL3.关于实验动物垫料的选择，错误的是（）A.大鼠垫料应选用吸水性强、粉尘少的材料B.兔类垫料需避免使用松木屑（含挥发性酚类）C.小型啮齿类垫料厚度应≥3cmD.垫料更换频率与动物密度无关4.屏障系统中，空气洁净度应达到（）A.万级（ISO7）B.十万级（ISO8）C.百级（ISO5）D.千级（ISO6）5.实验动物饲料中，小鼠维持期粗蛋白质含量最低标准为（）A.18%B.20%C.22%D.24%6.下列哪种疾病不属于SPF级实验动物必须排除的病原体？（）A.小鼠肝炎病毒（MHV）B.仙台病毒（Sendai）C.小鼠肺炎病毒（PVM）D.乳酸菌（Lactobacillus）7.实验动物运输时，装载密度应控制在每平方米不超过（）A.20只（大鼠）B.50只（小鼠）C.10只（豚鼠）D.5只（兔）8.协作实验中，不同养殖单元需统一的核心要素不包括（）A.饲料配方B.人员班次C.光照周期（12h明/12h暗）D.垫料类型9.实验动物伦理审查中，“3R原则”的核心顺序是（）A.替代→减少→优化B.减少→替代→优化C.优化→减少→替代D.替代→优化→减少10.屏障系统压差控制中，清洁区与污染区的静压差应≥（）A.5PaB.10PaC.15PaD.20Pa11.实验动物哺乳母鼠的饲料投喂量应比维持期增加（）A.10%-20%B.20%-30%C.30%-40%D.40%-50%12.下列关于实验动物性别鉴定的描述，错误的是（）A.小鼠：肛门与生殖器间距，雄性＞雌性B.大鼠：成年雄性可见明显睾丸C.豚鼠：雌性生殖器呈“Y”形裂隙D.兔：雄性生殖器为圆形凸起，雌性为线性裂隙13.协作实验中，若发现不同单元动物体重差异超过15%，优先排查的因素是（）A.遗传背景一致性B.饲料投喂量C.环境温度波动D.垫料更换频率14.实验动物常见的“咬仔行为”主要诱因是（）A.母鼠过度肥胖B.环境噪音≥60dBC.幼鼠数量＜4只D.饲料钙磷比失衡（＞3:1）15.新型基因编辑动物（如敲除鼠）的养殖记录应额外包含（）A.交配日期B.基因型鉴定结果C.产仔数D.母鼠哺乳状态二、判断题（每题1分，共10分）1.SPF级实验动物允许携带非致病共生菌，但不得存在条件致病菌。（）2.实验动物环境中，氨浓度应控制在≤14mg/m³（静态）。（）3.大鼠为群居动物，单笼饲养易导致攻击行为；小鼠可单笼饲养。（）4.实验动物饲料需经钴-60辐照灭菌，剂量应≥25kGy。（）5.运输后实验动物需至少隔离观察3天，期间不得进行任何操作。（）6.协作实验中，不同单元的垫料更换频率可自行调整，只需记录即可。（）7.实验动物饮用水的pH值应控制在6.0-8.5之间。（）8.孕鼠临产前需将公鼠移出，避免干扰分娩。（）9.转基因动物的笼具标识需包含品系名称、基因型、代数信息，无需标注实验项目。（）10.屏障系统工作人员进入前需经一更（换拖鞋）、二更（穿洁净服）、缓冲间（风淋）三级净化。（）三、简答题（每题8分，共32分）1.简述温湿度波动对实验动物生理及实验结果的影响机制。2.列举实验动物饲料质量控制的关键环节（至少5项）。3.说明实验动物常见呼吸道疾病（如支原体感染）的防控措施。4.协作实验中，若发现某养殖单元动物异常死亡（日死亡率＞2%），请简述应急处置流程。四、实操题（每题10分，共20分）1.现有一批待进入屏障系统的SPF级小鼠繁育笼（每笼5只，含1公4母），请列出需检查的关键项目及标准。2.某协作实验需将50只SD大鼠从A实验室运输至B实验室（车程4小时），请设计运输后的检疫操作流程（含具体观察指标与检测项目）。五、案例分析题（每题9分，共18分）案例1：某屏障系统内，协作实验的C57BL/6小鼠出现群体性竖毛、蜷缩、采食量下降，部分个体鼻腔有血性分泌物。养殖员甲认为是环境温度过低（实测20℃），养殖员乙认为是饲料霉变（近期更换过供应商），养殖员丙怀疑是支原体感染。问题：（1）可能的致病因素有哪些？（2）请设计排查步骤。（3）提出后续改进措施。案例2：某多中心协作实验中，A、B两个养殖单元提供的C57BL/6小鼠在相同实验处理下，B单元小鼠的炎症反应明显弱于A单元。经查，两单元小鼠遗传背景一致，实验处理同步。问题：（1）分析可能的非遗传因素（至少3项）。（2）提出解决协作差异的具体措施。--答案一、单项选择题1.A（依据GB14925-2021，30-50g小鼠最小空间250cm²/只）2.A（实验动物饮用水需符合无菌标准，总大肠菌群不得检出）3.D（垫料更换频率与动物密度正相关，密度越高更换越频繁）4.A（屏障系统空气洁净度为万级，对应ISO7）5.B（小鼠维持期粗蛋白质最低20%，繁殖期22%）6.D（乳酸菌为共生菌，SPF级允许存在）7.B（小鼠运输密度≤50只/m²，大鼠≤20只/m²，豚鼠≤15只/m²，兔≤5只/m²）8.B（人员班次不影响养殖核心参数，饲料、光照、垫料需统一）9.A（3R原则顺序：替代→减少→优化）10.B（屏障系统清洁区与污染区压差≥10Pa）11.C（哺乳母鼠需增加30%-40%饲料量以满足泌乳需求）12.D（兔雌性生殖器为“V”形裂隙，雄性为圆形凸起）13.A（体重差异超15%首先排查遗传背景是否一致）14.B（噪音≥60dB易引发母鼠应激导致咬仔）15.B（基因编辑动物需记录基因型鉴定结果以确保表型一致性）二、判断题1.×（SPF级不得存在条件致病菌及病原微生物）2.√（GB14925-2021规定静态氨浓度≤14mg/m³）3.×（大鼠单笼饲养更易攻击，小鼠群居可能因等级压制导致应激）4.√（实验动物饲料辐照灭菌剂量≥25kGy）5.×（隔离观察期需每日记录采食量、活动等，必要时进行健康检查）6.×（协作实验需统一垫料更换频率，避免环境差异影响结果）7.√（实验动物饮用水pH值标准为6.0-8.5）8.√（公鼠可能干扰分娩或攻击幼鼠，需提前移出）9.×（转基因动物标识需包含实验项目信息以便追溯）10.√（屏障系统人员需经三级净化：一更→二更→风淋缓冲）三、简答题1.影响机制：①温度过高（＞26℃）：动物代谢加快，耗氧量增加，易引发热应激，导致繁殖力下降、实验指标（如酶活性）异常；温度过低（＜20℃）：动物通过寒颤产热，能量消耗增加，体重增长减缓，免疫功能抑制。②湿度＞70%：垫料易霉变，真菌繁殖，引发呼吸道感染；湿度＜40%：动物皮肤黏膜干燥，屏障功能减弱，粉尘飞扬，诱发鼻炎、结膜炎；同时温湿度波动会干扰动物生物钟，影响激素分泌（如皮质醇），导致实验结果重复性降低。2.关键环节：①原料采购：选择符合《实验动物配合饲料通用质量标准》的供应商，索取原料检测报告（重金属、农药残留、微生物）；②加工控制：粉碎粒度（小鼠饲料≤1.5mm）、混合均匀度（变异系数≤5%）、制粒温度（≤80℃避免营养破坏）；③灭菌处理：辐照剂量（≥25kGy）或高压灭菌（121℃、30min）；④储存管理：阴凉干燥（温度≤25℃，湿度≤60%），分类存放（维持料与繁殖料分开），保质期≤6个月；⑤使用前检测：每批抽检水分（≤10%）、粗蛋白（达标）、微生物（菌落总数≤1×10⁴cfu/g）。3.防控措施：①环境管理：控制温湿度（小鼠20-26℃、湿度40-70%），加强通风（换气次数≥15次/h），降低氨浓度（≤14mg/m³）；②定期监测：每季度进行血清学检测（支原体抗体）、鼻腔拭子PCR检测；③隔离与淘汰：发现阳性个体立即单笼隔离，全群检测后淘汰阳性鼠，污染笼具经高压灭菌（134℃、18min）；④免疫预防：无商品化疫苗，重点通过SPF级引种、禁止混养（不同品系）降低感染风险；⑤人员操作：接触动物前洗手（0.5%洗必泰），避免交叉使用器械（如镊子需每笼一消毒）。4.应急处置流程：①立即通知主管及质量控制部门，记录死亡时间、笼号、动物日龄、症状（如腹泻、呼吸困难）；②现场控制：暂停该单元动物外送，限制人员流动，采集死亡动物样本（心血、肺、肝）冷藏保存；③排查原因：检查环境参数（温湿度、压差、氨浓度）、饲料批次（是否霉变、异物）、饮水（pH、微生物）、操作记录（如前日是否更换垫料）；④实验室检测：剖检观察病变（如肺充血→呼吸道感染，肠出血→细菌感染），送病原检测（PCR检测常见病毒、细菌）；⑤处理措施：若为传染性疾病，全群淘汰并彻底消毒（过氧乙酸熏蒸）；若为环境因素，调整参数并验证（如升温至22℃后监测3天）；⑥记录归档：填写《异常死亡报告》，包含原因分析、处理结果、改进方案（如加强饲料验收）。四、实操题1.检查项目及标准：①动物状态：每只小鼠无外伤、无脱毛、活动正常（无蜷缩、颤抖），被毛光滑，眼睛无分泌物；②繁育信息：笼牌标注品系（C57BL/6）、基因型（如无特殊标注为野生型）、公母比例（1:4）、交配日期（需在7天内，确保受孕）；③饲料与水：饲料剩余量≥10g（避免断料），水瓶水位≥1/3，瓶塞无渗漏（倒置10秒无水流出）；④垫料：厚度≥3cm，无明显潮湿（手捏不成团）、无粪便堆积（≤5粒/笼），无霉变（无酸臭味）；⑤环境标识：笼具外贴“待入屏障”标签，无其他无关标识；⑥运输记录：核对数量（5只/笼）、来源单位（需为SPF级合格供应商）、运输时间（≤6小时，避免应激）。2.运输后检疫流程：①隔离安置：将大鼠置于独立隔离区（与现有动物间距≥2m），使用专用笼具（经高压灭菌），标识“运输检疫中”；②观察指标（连续7天）：每日记录采食量（正常为15-20g/只/天）、饮水量（30-50mL/只/天）、活动状态（活跃/蜷缩）、粪便形态（成型无黏液）、被毛状态（光滑/蓬松）、呼吸频率（正常80-110次/分）；③检测项目：第3天采集粪便样本检测寄生虫（如鞭毛虫），第5天采集血清检测常见病毒（如大鼠冠状病毒），第7天进行体重称量（体重波动≤±5%为正常）；④异常处理：若发现腹泻（粪便稀软），立即隔离病鼠，采集粪便做细菌培养（沙门氏菌、志贺氏菌）；若出现呼吸急促（＞150次/分），采样做支原体PCR检测；⑤记录归档：填写《运输检疫记录表》，包含每日观察结果、检测报告、异常处理措施，7天后无异常方可转入屏障系统。五、案例分析题案例1：（1）可能因素：①环境温度过低（20℃接近小鼠适宜温度下限20℃，但SPF小鼠适宜温度为20-26℃，20℃可能引发冷应激）；②饲料霉变（更换供应商后可能存在黄曲霉毒素污染，导致采食量下降、肝损伤）；③支原体感染（典型症状为鼻腔分泌物、呼吸异常）；④垫料问题（如粉尘过多刺激呼吸道）。（2）排查步骤：①环境检测：使用温湿度计复核笼内实际温度（笼内可能因动物产热高于环境温度），检测氨浓度（若＞14mg/m³提示通风不足）；②饲料排查：检查剩余饲料是否有霉变（肉眼观察有无绿毛、异味），送实验室检测黄曲霉毒素B1（限值≤20μg/kg）；③病原检测：剖检死亡小鼠，取肺组织做支原体PCR检测，取肝组织做病理切片（观察是否有中毒性损伤）；④垫料检查：测量垫料粉尘量（筛网过筛后粉尘≤5%），检测挥发性有机物（如松木屑的酚类物质）。（3）改进措施：①环境调整：将系统温度设定为22-24℃，增加通风量（换气次数从15次/h调至18次/h）；②饲料管理：更换供应商前需进行小批量试喂（7天观察无异常再批量使用），每批饲料增加黄曲霉毒素检测；③疾病防控：对全群小鼠进行支原体抗体检测，阳性鼠淘汰，笼具用0.2%过氧乙酸喷雾消毒；④培训教育：组织养殖员学习《实验动物环境控制标准》，强调更换饲料/垫料需进行风险评估。案例2：（1）可能因素：①环境差异：A、B单元光照周期不一致（如A为12h明/12h暗，B为14h明/10h暗，影响褪黑素分泌，进而影响炎症反应）；②饲料营养：B单元饲料中ω-3脂肪酸含量低于A单元（ω-3可抑制炎症因子）；③饲养操作：B单元垫料更换频率过高（每日1次）导致小鼠应激（皮质醇升高，抑制免疫）；④饮用水差异：B单元水pH值偏碱（8.5），影响胃肠道菌群，进而影响炎症介质代谢；⑤人员操作：B单元抓取小鼠时手法更粗暴（导致隐性应激，影响实验结果）。（2）解决措施：①统一环境参