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文档简介
湖北省巴东三中2026年高三年级模拟考试生物试题试卷注意事项:1.答题前,考生先将自己的姓名、准考证号填写清楚,将条形码准确粘贴在考生信息条形码粘贴区。2.选择题必须使用2B铅笔填涂;非选择题必须使用0.5毫米黑色字迹的签字笔书写,字体工整、笔迹清楚。3.请按照题号顺序在各题目的答题区域内作答,超出答题区域书写的答案无效;在草稿纸、试题卷上答题无效。4.保持卡面清洁,不要折叠,不要弄破、弄皱,不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。一、选择题:(共6小题,每小题6分,共36分。每小题只有一个选项符合题目要求)1.关于“观察根尖分生组织细胞的有丝分裂实验”及相关叙述错误的是()A.在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的细胞,分裂间期的细胞最多B.通过统计视野中不同时期的细胞数目,可比较细胞周期不同时期的时间长短C.有丝分裂产生的子细胞染色体数目不变,在形态、结构和生理功能上保持相似性D.培养洋葱根尖时添加适量DNA合成可逆抑制剂,可使细胞停滞在细胞周期的分裂期2.下列相关实验中涉及“分离”的叙述正确的是A.T2噬菌体侵染细菌实验中,离心的目的是使噬菌体的DNA与蛋白质分离B.植物细胞质壁分离实验中,滴加蔗糖溶液的目的是使细胞质与细胞壁分离C.植物根尖细胞有丝分裂实验中,可以观察到姐妹染色单体彼此分离的过程D.绿叶中色素的提取和分离实验中,色素分离是因其在层析液中溶解度不同3.甲海岛上的某种鸟一部分迁徙到乙、丙两个海岛(三个岛屿相互隔绝),下图为刚迁入时和多年后决定羽毛颜色的相关基因的调查结果(B一黑色、b灰色、B1一黄色)。下列相关推测正确的是()A.若干年后,三个岛屿上的这种鸟分别属于不同的物种B.随着时间的推移,乙岛屿上B1的基因频率一定会继续升高C.三个岛屿中乙、丙两个岛屿上的环境背景颜色更加接近D.环境促进羽毛颜色基因型频率发生定向改变,导致生物进化4.下图是测定某发芽种子的呼吸类型所用装置(假设呼吸底物只有葡萄糖,不考虑外界条件的影响且种子始终保持活性),下列有关说法错误的是甲装置乙装置结论A液滴左移液滴不动只进行有氧呼吸B液滴不动液滴右移只进行无氧呼吸且产物有酒精C液滴不动液滴不动只进行无氧呼吸且产物有乳酸D液滴左移液滴右移既进行有氧呼吸又进行无氧呼吸A.A B.B C.C D.D5.除草剂敏感型的大豆经辐射获得抗性突变体,且敏感基因与抗性基因是1对等位基因。下列叙述正确的是A.突变体若为1条染色体的片段缺失所致,则该抗性基因一定为隐性基因B.突变体若为1对同源染色体相同位置的片段缺失所致,则再经诱变可恢复为敏感型C.突变体若为基因突变所致,则再经诱变不可能恢复为敏感型D.抗性基因若为敏感型基因中的单个碱基对替换所致,则该抗性基因一定不能编码肽链6.下列关于变异和进化的说法,正确的是()。A.用秋水仙素处理单倍体植株后得到的一定是纯合子B.在三倍体无子西瓜的育种过程中,用四倍体西瓜做母本,用二倍体西瓜做父本得到的种子的胚细胞中含有三个染色体组C.两个种群间的隔离一旦形成,这两个不同种群的个体之间就不能进行交配,或者即使能交配,也不能产生可育后代D.突变能为生物进化提供原材料,但不包括染色体数目的变异,因为该过程并没有新的基因产生二、综合题:本大题共4小题7.(9分)前不久,某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序,科学家研制出基因工程乙肝-百白破(rHB-DTP)四联疫苗,经各项检测均通过rHB-DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答:(1)为获取百日咳杆菌类毒素的基因,可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA,在______的作用下合成双链cDNA片段,获得的cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____(填“相同”或“不同”)。(2)由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小,且序列已知,获得目的基因可采用________,然后通过PCR技术大量扩增,此技术的前提是已知________________________________。(3)把目的基因导入受体细胞时,科学家采用了改造后的腺病毒作为载体,写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。(写出2点)(4)研究发现,如果将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸,免疫效果更好,请写出此种技术的基本流程_____________________________________。(5)实验证明,一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好,其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多,当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。8.(10分)以一个有正常叶舌的小麦纯系种子为材料,进行辐射处理。处理后将种子单独隔离种植,发现其中有两株(甲、乙)的后代分离出无叶舌突变株,且正常株与突变株的分离比例均接近3∶1,这些叶舌突变型都能真实遗传。请回答:(1)辐射处理正常叶舌的小麦纯系种子,其后代分离出无叶舌突变株,该育种方式是____________。该过程需要用到大量的种子,其原因是基因突变具有__________和低频性。甲和乙的后代均出现3∶1的分离比,表明辐射处理最可能导致甲、乙中各有_______(填“一”“二”或“多”)个基因发生突变。(2)无叶舌突变基因在表达时,与基因启动部位结合的酶是______________。如图是正常叶舌基因中的部分碱基序列,其编码的蛋白质中部分氨基酸序列为“……甲硫氨酸—丝氨酸—谷氨酸—丙氨酸—天冬氨酸—酪氨酸……”(甲硫氨酸的密码子是AUG,丝氨酸的密码子是UCU、UCC、UCA、UCG,酪氨酸的密码子是UAC、UAU,终止密码子是UAA、UAG、UGA)。研究发现,某突变株的形成是由于该片段方框2处的C∥G替换成了A∥T,结果导致基因表达时________。(3)将甲株的后代种植在一起,让其随机传粉,只收获正常株上所结的种子,若每株的授粉率和结籽率相同,则其中无叶舌突变类型的比例为___________。(4)现要研究甲、乙两株叶舌突变是发生在一对基因上,还是分别发生在独立遗传的两对基因上,可选甲、乙后代的无叶舌突变株进行单株杂交,统计F1的表现型及比例进行判断:①若___________________________________,则甲乙两株叶舌突变是发生在一对基因上;②若___________________________________,则甲乙两株叶舌突变是发生在两对基因上。9.(10分)纤维素酶在酿酒、新能源等领域被广泛应用,其关键是寻找和开发高产纤维素酶菌种及酶的固定化技术。请回答下列问题:(1)可用固定化酶技术解决纤维素酶在工业应用中容易失活、不能再次被利用等问题,一般来说,纤维素酶的固定化更适合采用_______和物理吸附法。(2)为筛选纤维素酶分泌型菌种,一般从____(A.石油污染的土壤B.森林腐烂的树木C.酿酒厂的排污口D.生活污水)处获取样品,理由是_______。(3)将初步筛选出的三种菌种进行发酵实验。分别将三种菌种等量接种到含相同滤纸的液体培养基中,在30℃,150r/min的条件下培养5d,重复三次实验,用呈色反应表示液体培养基中的葡萄糖量,得到如下实验结果。菌种Ⅰ菌种Ⅱ菌种Ⅲ颜色深浅程度++++++实验分析:①该实验的原理是C1酶、CX酶能把纤维素分解成______,葡萄糖苷酶将其分解成葡萄糖;向培养基中加入斐林试剂,水浴加热后呈现______色。②实验结果说明三组液体培养基中的葡萄糖量不同,请你推测产生这一差异的原因可能有哪些?_____________(要求答出两点)。③开发这种纤维素酶的意义之一在于能为酿酒提供充足的原料,从而减少粮食的消耗,酿酒时一般将温度控制在_____℃。10.(10分)为增加油葵种子中的含油量,科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞,获得转基因油葵新品种。(1)为获取目的基因,可从花生细胞中提取_________,经逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR技术扩增目的基因。(2)构建重组DNA分子(如图所示)最好选用_________限制酶,目的是可避免_________。(3)普通大肠杆菌细胞中没有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因,将构建的重组DNA分子导入农杆菌中,将获得的农杆菌接种在含_________的固体平板上培养得到含重组质粒的单菌落,再利用培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液。(4)剪取油葵的叶片放入浸染液中一段时间后,经过筛选获得转基因油菜细胞。最后经过__________________培育成转基因油葵植株。此种技术的原理是_________。(5)研究发现,如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸,其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造,所需步骤有_________。a.蛋白质的结构设计b.蛋白质的结构和功能分析c.蛋白质结构的定向改造d.酶A基因的定向改造e.将改造后的酶A基因导入受体细胞f.将定向改造的酶A导入受体细胞(6)经过种植转基因油葵发现,虽然转基因油葵种子中含油量上升,但是抗灰霉菌的能力丢失,其原因是_________。11.(15分)据报道,某地农业示范园里,许多西瓜未成熟就竞相炸裂,引发人们的关注,初步调查发现西瓜的炸裂可能与使用膨大剂有关。膨大剂名为氯吡苯脲(CPPU),是国家批准的植物生长调节剂。回答下列有关问题:(1)植物激素是指由植物体内产生,能从产生部位运送到作用部位,对植物的____________有显著影响的微量有机物。在农业生产中一般都选用植物生长调节剂,与植物激素相比植物生长调节剂具有____________(至少2点)等优点。(2)科学家以3H-CPPU处理植物,结果发现在豌豆叶绿体的类囊体膜上出现较强的放射性,提取分离具有放射性的物质,经鉴定发现是细胞分裂素结合蛋白(受体),这一事实说明,CPPU是____________(选填“生长素”、“细胞分裂素”、“赤霉素”)类植物生长调节剂。(3)植物生长调节剂在农业生产中使用可以提高作物产量和品质,但也给人们带来疑虑,即这些人工合成的化学物质是否会危害人体健康?请以生长情况相同的幼龄小鼠肝细胞悬液为材料,以动物细胞培养液、CPPU可溶性液剂等作为试剂,设计实验探究CPPU能否抑制动物细胞的增殖,请简述实验思路__________。
参考答案一、选择题:(共6小题,每小题6分,共36分。每小题只有一个选项符合题目要求)1、D【解析】
1、有丝分裂不同时期的特点:(1)间期:进行DNA的复制和有关蛋白质的合成;(2)前期:核膜、核仁逐渐解体消失,出现纺锤体和染色体;(3)中期:染色体形态固定、数目清晰;(4)后期:着丝点分裂,姐妹染色单体分开成为染色体,并均匀地移向两极;(5)末期:核膜、核仁重建、纺锤体和染色体消失。2、有丝分裂的意义:亲代细胞的染色体经过复制后,精确地平均分配到两个子细胞中,保持了细胞的亲子代之间遗传性状的稳定性。【详解】A、分裂间期所占时间最长,故不同分裂时期的细胞中分裂间期的细胞最多,A正确;B、视野中不同时期的细胞数目与细胞周期不同时期的时间长短成正比例,B正确;C、有丝分裂产生的子细胞染色体数目不变,在形态、结构和功能上保持相似性,C正确;D、DNA复制发生在分裂间期,培养洋葱根尖时添加适量DNA合成可逆抑制剂,可使细胞停滞在细胞周期的分裂间期,D错误。故选D。2、D【解析】
1、质壁分离中的”质“是指原生质层,”壁“是指细胞壁。
2、绿叶中色素的提取和分离实验,提取色素时需要加入无水乙醇(溶解色素)、石英砂(使研磨更充分)和碳酸钙(防止色素被破坏);分离色素时采用纸层析法,原理是色素在层析液中的溶解度不同,随着层析液扩散的速度不同,最后的结果是观察到四条色素带,从上到下依次是胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。
3、观察细胞有丝分裂实验的步骤:解离(解离液由盐酸和酒精组成,目的是使细胞分散开来)、漂洗(洗去解离液,便于染色)、染色(用龙胆紫、醋酸洋红等碱性染料)、制片(该过程中压片是为了将根尖细胞压成薄层,使之不相互重叠影响观察)和观察(先低倍镜观察,后高倍镜观察)。4、T2噬菌体侵染细菌的实验步骤:分别用35S或32P标记噬菌体→噬菌体与大肠杆菌混合培养→噬菌体侵染未被标记的细菌→在搅拌器中搅拌,然后离心,检测上清液和沉淀物中的放射性物质。【详解】T2噬菌体侵染细菌实验中,离心的目的是使噬菌体的蛋白质外壳与被感染的细菌分离,A错误;植物细胞质壁分离实验中,滴加蔗糖溶液的目的是使原生质层与细胞壁分离,其中原生质层是由细胞膜、液泡膜和两层膜之间的细胞质构成的,B错误;观察植物细胞有丝分裂实验中,经过解离步骤后细胞已经死亡,因此不能观察到姐妹染色单体彼此分离的动态过程,C错误;绿叶中色素的提取和分离实验中,色素分离是因其在层析液中溶解度不同,溶解度越大的,随着层析液扩散的速度快,D正确。故选D。本题考查叶绿体中色素的提取和分离实验、观察植物细胞的质壁分离及复原实验、观察细胞有丝分裂实验、噬菌体侵染细菌实验,对于此类试题,需要考生注意的细节较多,如实验的原理、实验采用的方法、实验现象等,需要考生在平时的学习过程中注意积累。3、C【解析】
隔离是新物种形成的必要条件,新物种形成的标志是产生生殖隔离,不同种群之间存在地理隔离不一定存在生殖隔离。【详解】A、分析题图可知,甲岛的鸟迁到乙、丙两岛后,存在地理隔离,但是不一定存在生殖隔离,因此不一定属于不同的物种,A错误;B、随着时间的推移,乙岛屿上B1的基因频率不一定会继续升高,关键看B1控制的个体是否能更好地适应当地的环境,B错误;C、乙、丙b的基因频率相接近,推测三个岛屿中乙、丙两个岛屿上的环境背景颜色更加接近,C正确;D、环境促进羽毛颜色基因频率发生定向改变,导致生物进化,D错误。故选C。4、A【解析】
本题是对有氧呼吸与无氧呼吸的过程和产物的考查,发芽种子有氧呼吸过程吸收氧气释放二氧化碳,且氧气的吸收量与二氧化碳的释放量相等,无氧呼吸过程不吸收氧气。甲装置细胞呼吸产生的二氧化碳被氢氧化钠吸收,因此液滴移动的距离代表氧气的吸收量,乙装置没有氢氧化钠,液滴移动的距离是细胞呼吸吸收的二氧化碳和产生氧气的差值。【详解】A、甲装置液滴左移,说明细胞呼吸消耗氧气,乙装置液滴不动,说明细胞呼吸吸收的氧气与产生的二氧化碳相等或还进行乳酸的无氧呼吸,此时细胞进行有氧呼吸或有氧呼吸和无氧呼吸都有,A错误;
B、甲装置液滴不动,说明细胞呼吸不消耗氧气,进行了无氧呼吸,乙装置液滴右移,说明二氧化碳释放量多样氧气吸收量,此时细胞只进行无氧呼吸,且无氧呼吸方式是产生酒精和二氧化碳的,B正确;
C、甲装置液滴不动,说明细胞呼吸不消耗氧气,乙装置液滴不动,说明细胞呼吸吸收没有消耗氧气也没有产生二氧化碳,说明此时细胞只进行无氧呼吸且产物为乳酸,C正确;
D、甲装置液滴左移,说明细胞呼吸消耗氧气,乙装置液滴右移说明二氧化碳的释放量大于氧气的吸收量,此时既进行有氧呼吸又进行无氧呼吸,D正确。
故选A。
5、A【解析】
A、若突变体为1条染色体缺失导致,则可能是带有敏感型基因的片段缺失,原有的隐性基因(抗性基因)得以表达的结果,A正确;B、突变体为1对同源染色体的片段都缺失导致的,经诱变再恢复原状的可能性极小,B错误;C、突变体若为基因突变所致,基因突变具有不定向性,再经诱变具有恢复的可能,但概率较低,C错误;D、敏感型基因中的单个碱基对发生替换导致该基因发生突变,也可能使控制的肽链提前终止或者延长,不一定是不能编码蛋白质,D错误。6、B【解析】
单倍体是指体细胞中含有本物种配子染色体数目的个体,那么如果此物种是二倍体,当用秋水仙素加倍后,生成的植株是纯合子。但如果此物种是四倍体、六倍体、八倍体等偶数倍多倍体时,如某四倍体马铃薯植株基因型为AAaa时,则形成的单倍体植株的基因型为AA、Aa、aa三种类型,当用秋水仙素使其加倍后,植株的基因型分别为AAAA、AAaa、aaaa三种,其中AAaa不是纯合子,自交后代会出现性状分离。【详解】A、秋水仙素的作用结果是导致染色体数目加倍,但不一定是纯合子,如Aa是杂合子,加倍后还是杂合子,A错误;B、四倍体植株减数分裂产生的配子含有两个染色体组,二倍体植物减数分裂产生的配子含有一个染色体组,因此受精卵中含有三个染色体组,称为三倍体,B正确;C、隔离包括地理隔离和生殖隔离,两种群个体不能交配或交配后不能产生可与后代是指形成的生殖隔离,C错误;D、突变和基因重组为生物进化提供原材料,其中突变包括基因突变和染色体变异,基因突变的结果是产生新基因,D错误。故选B。考点:生物的变异和进化二、综合题:本大题共4小题7、逆转录酶不同化学方法人工合成(人工化学合成)一段目的基因的核苷酸序列以便合成引物能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列记忆短时间内迅速产生大量的抗体和记忆细胞,免疫预防作用更强【解析】
1、基因工程技术的基本步骤:(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。2、记忆细胞使得二次免疫反应快而强。【详解】(1)由mRNA合成cDNA的过程属于逆转录过程,需要逆转录酶。获得的cDNA片段只包含基因的编码区,没有非编码区,因此与百日咳杆菌中该基因碱基序列不同。(2)可通过化学方法人工合成(人工化学合成)序列较小且已知的基因片段。通过PCR技术大量扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便合成引物。(3)改造后的腺病毒具有能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害等特点,故可用做载体。(4)将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸属于蛋白质工程的范畴,故其基本流程是从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。(5)一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好,其主要原因是体内产生的记忆细胞数量增多,当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是短时间内迅速产生大量的抗体和记忆细胞,免疫预防作用更强。本题考查了基因工程中目的基因的获取、表达载体的构建、蛋白质工程以及免疫预防等相关知识,综合性较强,要求考生需掌握各知识之间的联系,做到灵活应用,熟能生巧。8、诱变育种不定向性一RNA聚合酶提早出现终止密码子(翻译提前终止等其他类似叙述亦可)1/6F1全为无叶舌突变株F1全为正常叶舌植株【解析】
根据题意分析可知:自交的性状分离比例均为3:1,说明符合一对等位基因的分离定律,表明辐射诱变处理均导致甲、乙中各有一个基因发生突变。用两种类型的无叶舌突变株杂交,若甲乙两株叶舌突变是发生在同一对基因上,则杂交后代应为纯合体,后代全为无叶舌突变株;若甲乙两株叶舌突变是发生在两对基因上则杂交后代应为杂合体,后代全为正常植株。【详解】(1)辐射处理正常叶舌的小麦纯系种子,其后代分离出无叶舌突变株,该育种方式是诱变育种。该过程需要用到大量的种子,其原因是基因突变具有多方向性和稀有性。自交的性状分离比例均为3:1,说明符合一对等位基因的分离定律,表明辐射诱变处理均导致甲、乙中各有一个基因发生突变。(2)无叶舌突变基因在表达时,与基因启动部位结合的酶是RNA聚合酶。由分析可知,1处碱基对C//G替换成了A//T,密码子由UCC变成UCU,编码的氨基酸序列不发生改变,2处碱基对C//G替换成了A/T,则转录后密码子由UAC变成UAA,UAA是终止密码子,翻译会提前结束。(3)甲植株后代的基因型是AA:Aa:aa=1:2:1,正常植株产生的卵细胞的基因型及比例是A:a=2:1,所授花粉的基因型及比例是A:a=1:1,因此甲株的后代种植在一起,让其随机传粉,只收获正常株上所结的种子,若每株的授粉率和结籽率相同,则其中无叶舌突变类型的比例为aa=1/3×1/2=1/6。(4)①如果甲乙两株叶舌突变是发生在一对基因上,则甲、乙后代中无舌叶的基因型是aa、aa,杂交后代都是aa,表现为无舌叶。②如果甲乙两株叶舌突变是发生在两对基因上,则甲、乙后代中无舌叶的基因型是aaBB、AAbb,杂交后代的基因型是AaBb,都表现为有舌叶。本题的知识点是基因突变的概念、特点及诱变育种,基因的转录和翻译过程,基因分离定律和自由组合定律的实质,旨在考查学生理解所学知识的要点,把握知识的内在联系,形成知识网络,并应用相关知识结合题干信息进行推理解答问题,学会应用演绎推理的方法完善实验步骤、预期结果、获取结论,用遗传图解解释相关问题。9、化学结合(法)B该处环境富含纤维素(纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中)纤维二糖砖红三种菌种产生的纤维素酶量不同;三种菌种产生的纤维素酶活性不同;三种菌种消耗培养基中的葡萄糖的量不同18~25【解析】
1、固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学的方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。常用包埋法对细胞进行固定,常用化学结合法和物理吸附法对酶进行固定。2、固定化酶优点是使酶既能与反应物接触,又能与产物分离,还可以被反复利用;固定化细胞优点是成本更低,操作更容易,可以催化一系列的化学反应。【详解】(1)纤维素酶的固定化更适合采用化学结合法和物理吸附法。(2)为筛选纤维素酶分泌型菌种,一般从森林腐烂的树木处获取样品;理由是该处环境富含纤维素(纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中)。(3)①该实验的原理是C1酶、CX酶能把纤维素分解成纤维二糖;葡萄糖苷酶将其分解成葡萄糖;向培养基中加入斐林试剂,水浴加热后呈现砖红色。②实验结果说明三组液体培养基中的葡萄糖量不同,可能是三种菌种产生的纤维素酶量不同;三种菌种产生的纤维素酶活性不同;三种菌种消耗培养基中的葡萄糖的量不同。③酿酒时一般将温度控制在18~25℃,此温度下最适合酵母菌进行无氧呼吸。本题考查酶的固定及纤维素酶的分离和应用等相关知识,意在考查考生能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力。10、mRNABamHⅠ和PstⅠ质粒自身的黏性末端连接或目的基因与质粒反向连接氨苄青霉素植物组织培养技术植物细胞的全能性b、a、d、e抗灰霉菌基因没有表达(或丢失等)【解析】
基因工程技术的基本步骤:(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术;个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】(1)逆转录过程需要从供体细胞内提取出的mRNA为模板,以脱氧核苷酸为原料合成cDNA。(2)构建重组DNA分子时选用的限制酶要不破坏目的基因,所以不能用EcoRI,同时尽量防止质粒自身的黏性末端连接或目的基因与质粒反向连接,所以最好选用两种限制酶,即BamHⅠ和PstⅠ。(3)根据限制酶的切割位点,由于使用BamHⅠ和PstⅠ会破坏抗四环素标记基因,但抗氨苄青霉素的标记基因是完整的所以只能用含氨苄青霉素的培养基筛选含重组质粒的单菌落。(4)得到转基因细胞后,要培养转基因植株,需要用植物的组织培养技术才能实现,其依据的原理是植物细胞的
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