2026年分子诊断三基三严题库及答案

2026年分子诊断三基三严题库及答案一、单项选择题1.荧光定量PCR中，Ct值的定义是：A.扩增产物达到最大荧光值的循环数B.扩增产物荧光信号达到设定阈值的循环数C.扩增曲线指数期的起始循环数D.扩增反应终止时的循环数答案：B2.磁珠法提取核酸时，关键步骤不包括：A.样本裂解使核酸释放B.磁珠在高盐低pH条件下结合核酸C.75%乙醇洗涤去除蛋白杂质D.高温（95℃）条件下洗脱核酸答案：D（正确洗脱条件为低盐高pH或纯水）3.一代测序（Sanger测序）的核心原理是：A.边合成边测序，通过检测焦磷酸释放发光B.利用双脱氧核苷酸（ddNTP）终止链延伸，通过电泳分离片段长度C.基于纳米孔技术，检测核酸通过孔道时的电流变化D.采用桥式扩增和可逆终止子荧光标记答案：B二、多项选择题1.分子诊断实验室质量控制中，室内质控应包括：A.空白对照（无模板）B.弱阳性对照（接近检测下限）C.强阳性对照（高浓度模板）D.不同批次试剂的交叉验证答案：ABC2.核酸提取过程中，导致DNA降解的常见原因有：A.样本采集后未及时处理（超过2小时）B.裂解液中蛋白酶K活性不足C.离心速度过高（>12000rpm）D.操作过程中反复冻融答案：ABD（离心速度过高主要影响得率，非降解主因）三、简答题1.简述实时荧光定量PCR（qPCR）中“熔解曲线分析”的目的及操作要点。答：目的：验证扩增产物的特异性，判断是否存在非特异性扩增（如引物二聚体、非目标片段）或污染。操作要点：（1）扩增结束后，设置温度从65℃缓慢升至95℃（升温速率≤0.5℃/s）；（2）实时监测荧光信号变化；（3）单一尖锐峰提示特异性扩增，多个峰或宽峰提示非特异性产物。2.列举NGS（二代测序）文库构建的关键步骤及质量控制指标。答：关键步骤：（1）核酸片段化（超声或酶切至目标长度）；（2）末端修复（平末端或A尾添加）；（3）接头连接（连接测序接头）；（4）PCR扩增（富集目标片段）；（5）纯化（去除引物二聚体等杂质）。质量控制指标：（1）片段长度分布（通过生物分析仪检测，主峰应在目标范围内）；（2）浓度（Qubit定量，确保文库浓度≥2nM）；（3）接头污染率（<5%）；（4）扩增效率（qPCR检测文库有效分子数）。四、案例分析题某实验室检测HPV16型DNA时，出现以下结果：阴性对照（NTC）扩增曲线呈S型（Ct=32），阳性对照（PTC）Ct=18（预期Ct=20±2），临床样本中5份Ct值在2530之间，另2份无扩增。分析可能原因及解决措施。答：可能原因及措施：（1）NTC阳性：提示扩增产物污染（如气溶胶污染）或试剂污染。解决措施：清理实验室（紫外线照射、75%乙醇擦拭），更换新批次试剂，操作时严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。（2）PTCCt值低于预期：可能为阳性对照浓度过高（超过标定值）或扩增效率异常（如酶活性过强）。解决措施：重新核对阳性对照浓度（用qPCR定量校准），检测扩增效率（通过标准曲线斜率，理想范围3.1~3.6）。（3）部分样本无扩增：可能原因为样本核酸提取失败（如裂解不充分、磁珠