DB43∕T 3261-2025 砧用南瓜耐低温鉴定技术规程

ICS65.020.20

CCSB05

43

湖南省地方标准

DB43/T3261—2025

砧用南瓜耐低温鉴定技术规程

Codeofpracticeforlowtemperatureresistanceidentificationofrootstockpumpkins

2025-07-18发布2025-10-18实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T3261—2025

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4育苗...............................................................................1

选种取样与催芽播种.............................................................1

幼苗培养.......................................................................1

5低温处理...........................................................................1

处理...........................................................................2

对照...........................................................................2

6指标检测...........................................................................2

冷害指数.......................................................................2

生理指标.......................................................................2

7综合判定...........................................................................2

耐低温性判定...................................................................3

耐低温性评级...................................................................3

8档案管理...........................................................................3

附录A（资料性）检测指标的测定方法...................................................4

A.1相对电导率测定.................................................................4

A.2丙二醛含量测定.................................................................4

A.3脯氨酸含量测定.................................................................4

A.4可溶性蛋白含量测定.............................................................4

附录B（规范性）砧用南瓜耐低温记载表.................................................6

I

DB43/T3261—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件主要起草单位：湖南省蔬菜研究所、湖南省核农业与中药材研究所、广西大学、邵阳市北塔

区农业农村局、湖南呙氏老农民生态农业股份有限公司、怀化市农业综合服务中心、永州市农业综合服

务中心、安乡县农业技术推广中心、湘潭市雨湖区农业农村局。

本文件主要起草人：殷武平、袁祖华、彭莹、童辉、袁野、阳艳娟、粟启明、呙拉飞、李柯嫱、汪

端华、谭善飞、周精华、王波。

II

DB43/T3261—2025

砧用南瓜耐低温鉴定技术规程

1范围

本文件规定了砧用南瓜苗期耐低温鉴定的育苗、低温处理、指标检测、综合判定和档案管理。

本文件适用于砧用南瓜苗期的耐低温性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程第2部分扦样

GB/T16715.1瓜菜作物种子第1部分：瓜类

NY/T2118蔬菜育苗基质

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

耐低温性chilling-resistance

砧用南瓜生长发育对低温胁迫的耐受能力。

冷害colddamage

0℃以上低温对砧用南瓜的损害。

4育苗

选种取样与催芽播种

砧用南瓜种子质量应符合GB16715.1的要求。取样应符合GB/T3543.2的规定。挑选300粒饱满

砧用南瓜种子，在55℃温烫水中消毒15min，再在28℃~30℃温水中浸种6h，然后在恒温培养箱中

30℃催芽，待种子萌发露白后播于32孔穴盘中。

幼苗培养

将已播好样本种子的穴盘置于人工气候室中，昼/夜为28℃/15℃（12h/12h）、光照强度为300

μmol.m-2S-1、相对湿度为75%。待幼苗生长到“四叶一心”时，参照GB/T3543.2的方法选取长势整齐一

致的幼苗，分为2组，即低温胁迫处理组和常温对照组，每个处理96株，每个处理3次重复，每个重

复32株。将各处理移入相应的人工气候室，待处理。

5低温处理

1

DB43/T3261—2025

处理

相对湿度为75%，光照强度300μmol.m-2S-1，光照时间12h，昼/夜温度为10℃/5℃处理7d后，

调查砧用南瓜幼苗的冷害指数，测定砧用南瓜幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可

溶性蛋白含量（测定方法见附录A），而后转入光照强度300μmol.m-2S-1、昼/夜温度为28℃/15℃（12

h/12h）的人工气候室培养3d，统计各处理植株的存活率，档案记载见附录B.1。

对照

相对湿度为75%，光照强度300μmol.m-2S-1，光照时间12h，昼/夜温度为28℃/15℃，7d后，测

定砧用南瓜幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量（测定方法见附录A），

10d后统计植株存活率，档案记载见附录B.1。

6指标检测

冷害指数

冷害程度根据叶片受损情况进行分级（见表1），档案记载表见附录B.1。

表1砧用南瓜冷害分级

冷害级别冷害症状描述

0级秧苗生长正常，无任何受冻症状

1级1-2片叶受冻，受冻面积<30%

2级3-5片叶受冻，1-3片叶受冻面积>50%

3级叶片全部受冻，3片以上受冻面积>50%

4级全株受冻死亡或接近死亡

冷害指数按公式（1）计算：

（×）

=·········································································(1)

×

∑ns

式中：𝐶𝐶𝐶𝐶𝑁𝑁𝑆𝑆

——冷害指数；

s——冷害级别；

𝐶𝐶𝐶𝐶

n——冷害级别的植株数；

N——总植株数；

——冷害最高级别数。

𝑆𝑆生理指标

相对电导率采用电导法测定，档案记载见附录B.2；丙二醛含量用2-硫代巴比妥酸法测定，档案记

载表见附录B.3；脯氨酸含量用酸性茚三酮比色法测定，档案记载表见附录B.4；可溶性蛋白含量用考

马斯亮蓝法测定，档案记载表见附录B.5；

7综合判定

2

DB43/T3261—2025

耐低温性判定

采用隶属函数值方法，求出每个品种各检测指标的具体隶属函数值。脯氨酸、可溶性蛋白采用公式

（2）；丙二醛、冷害指数采用公式（3）；然后把每个品种各指标具体耐低温隶属值进行累加，采

用公式（4）；值越大，耐低温性越强。

𝑃𝑃�𝑖𝑖

𝑃𝑃�𝑖𝑖=+··························································(2)

=𝑃𝑃𝑖𝑖𝑖𝑖(1𝑃𝑃�𝑃𝑃)𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗−𝑃𝑃𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗�𝑃𝑃𝑗𝑗+𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗····················································(3)

𝑃𝑃𝑖𝑖𝑖𝑖−𝑃𝑃�𝑃𝑃𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗−𝑃𝑃𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗�𝑃𝑃𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗

=(=1,2,3)····································································(4)

�𝑃𝑃𝑖𝑖𝑖𝑖

式中：𝑃𝑃�𝑖𝑖3𝑗𝑗

——各指标在低温胁迫下的平均测定值与平均对照值的比值；

——i品种指标的隶属函数值；

𝑃𝑃

——各品种指标最小值；

𝑃𝑃𝑖𝑖𝑖𝑖𝑗𝑗

——各品种指标最大值。

𝑃𝑃𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗

𝑃𝑃𝑗𝑗耐低温性评级𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗

根据Pij判断耐低温性强弱，分为4级：0.70≦Pij≦1.00为强耐低温，0.60≦Pij≦0.69为耐低温，

0.30≦Pij≦0.59为中等耐低温，0≦Pij≦0.29为不耐低温，见表2，档案记载见附录A7。

表2砧用南瓜耐低温性评价标准

耐低温等级

0.70𝑃𝑃～�𝑖𝑖𝑖𝑖1.00强耐低温

0.60～0.69耐低温

0.30～0.59中耐低温

≤0.29不耐低温

8档案管理

砧用南瓜存活率统计表及丙二醛、脯氨酸、可溶性蛋白等含量记载表建立档案，档案保存期2年。

3

DB43/T3261—2025

A

A

附录A

（资料性）

检测指标的测定方法

A.1相对电导率测定

采用电导法，分别选取处理组、对照组植株距生长点第3片完全展开叶，叶片用蒸馏水冲洗2次，

吸水纸吸干后，用直径6mm～8mm的打孔器避开主脉取0.1g叶圆片浸润在10mL去离子水中，置于

摇床25°C震荡30min，测定第一次电导，记为EL1；随后置于沸水浴中处理15min，于25°C冷却后

测定第二次电导，记为EL2，按公式（A.1）计算相对电导率（relativeelectrolyteleakage,REL）。

REL(%)=×100·······························································(A.1)

𝐸𝐸𝐸𝐸1

档案记载见附录B.2。𝐸𝐸𝐸𝐸2

A.2丙二醛含量测定

采用硫代巴比妥法测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。选取距生长点第2-3片完全展开叶，

待测样品经液氮研磨后，加入三氯乙酸3mL，静置10min后4000rpm离心10min。取上清液2mL，

加入2mL硫代巴比妥溶液，沸水浴30min。测定450nm、532nm、600nm波长下的吸光度，根据下

公式（A.2）计算出丙二醛MDA浓度。

c(mol)=6.45(A532A600)0.56A450···········································(A.2)

式中A450、A532、A600分别代表450nm、532nm、600nm波长下的吸光值；

µ−−

进一步按公式（A.3）算出其在植株组织中的含量。

MDA=C×N/W··································································(A.3)

其中C为MDA浓度，N为提取液体积，W为植物组织鲜重。档案记载见附录B.3。

A.3脯氨酸含量测定

脯氨酸标准溶液的配置：准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100

μg/ml。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成100μg/ml的脯氨酸标准液。

脯氨酸含量用酸性茚三酮比色法测定，选距生长点第2-3片完全展开叶，称取新鲜叶片0.5g，加入

5ml13%的磺基水杨酸，沸水中加盖提取10min，冷却后过滤，定容至50ml，吸取滤液2ml，加入2

ml冰醋酸和3ml酸性水合茚三酮显色液，沸水浴40min。冷却至室温，加入5ml甲苯，充分振荡，静

置分层后取上层溶液520nm下比色。

同时以不同浓度的标准液做对比绘制标准曲线，从标准曲线中查出测定液中脯氨酸含量，档案记载

见附录B.3。脯氨酸含量按公式（A.4）计算。

F=（C.V）/（a.W）·····························································(A.4)

其中C为标准曲线查得提取液中脯氨酸含量，V为提取液体积，a为测定时所用样品的体积，W为

样品重。

A.4可溶性蛋白含量测定

可溶性蛋白含量采用考马斯亮蓝法测定，选距生长点第2-3片完全展开叶，取鲜叶0.5g，加入2ml

蒸馏水研磨，磨成匀浆后用8ml蒸馏水冲洗研钵，洗涤液收集在同一离心管中，在4000r/min下离心

10min，取上清2ml转入10ml容量瓶中并用蒸馏水定容。另取试管，吸取定容后的样品溶液0.5ml，

4

DB43/T3261—2025

再加入5ml的考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，充分混合，放置2min后，以空白液为对照，用1cm比色

皿在595nm下测定吸光度OD值。将蛋白提取液更换成牛血清蛋白浓度梯度溶液，按照相同的方法测

定吸光度OD值，绘制标准曲线，再用标准曲线算出砧用南瓜叶片中可溶性蛋白的含量，档案记载见附

录B4。可溶性蛋白含量按公式（A.5）计算。

Pro=C×V/（a.W）······························································(A.5)

其中C为查标准曲线所得每管蛋白质含量，V为提取液体积，a为测定所提取液体积，W为植物鲜

重。

5

DB43/T3261—2025

B

B

附录B

（规范性）

砧用南瓜耐低温记载表

B.1砧用南瓜存活率统计表见表B.1。

表B.1砧用南瓜存活率统计表

序号品种名称存活数总株数存活率

1

2

B.2相对电导率档案记载表见表B.2。

表B.2相对电导率档案记载表

序号品种名称样品来源初电导值终电导值相对电导率记载人

1

2

B.3丙二醛含量档案记载表见表B.3。

表B.3丙二醛含量档案记载表

序号品种名称样品来源丙二醛（mg/g）记载