第五章 分子生物学常用技术习题

第五章常用分子生物学技术得原理及其应用习题（引自网络精品课程）

一、选择题

（一）A型题

1、分子杂交实验不能用于

A、单链DNA与RNA分子之间得杂交B、双链DNA与RNA分子之

间得杂交

C、单链RNA分子之间得杂交D、单链DNA分子之间得杂交

E、抗原与抗体分子之间得杂交

2、关于探针叙述错误得就就是

A、带有特殊标记B、具有特定序列C、必须就就是双链得核酸片段D、可

以就就是底因组DNA片段F,、可以就就是抗体

3、下列哪种物质不能用作探针

A、DNA片段B、cDNAC、蛋白质D、氨基酸E、RNA片段

4、印迹技术可以分为

A、DNA印迹B、RNA印迹C、蛋白质印迹D、斑点印迹E、以上

都对

5、PCR实验延伸温度一般就就是

A、90cCB72°CC、80℃D、95℃E、60C

6、Westernblot中得探针就就是

A、RNAB、单链DNAC、cDNAD、抗体E、双链DNA

7、Northernb1otting与Southernblotting不同得就就是

A、基本原理不同B、无需进行限制性内切酶消化C、探针必须就就是RN

D、探针必须就就是DNAE、靠毛细作用进行转移

8、可以不经电泳分离而直接点样在NC膜上进行杂交分析得就就是

A、斑点印迹B、原位杂交C、RNA印迹D、DNA芯片技术

E、DNA印迹

9、下列哪种物质在PCR反应中不能作为模板

A、RNAB、单链DNAC、cDNAD、蛋白质E、双链DNA

10、RT-PCR中不涉及得就就是

A、探针B、cDNAC、逆转录酶D、RNAE、dNTP

11、关于PCR得基本成分叙述错误得就就是

A、特异性引物B、耐热性DNA聚合酶C、dNTP

D、含有Zn2+得缓冲液E、模板

12、DNA链末端合成终止法不需要

A、ddNTPB、dNTPC、引物标记D、DNA聚合酶E、模板

13、cDNA文库构建不需要

A、提取mRNAB、限制性内切酶裂解mRNAC、逆转录合成cDNA

1）、将cDNA克隆人质粒或噬菌体E、重组载体转化宿主细胞

14、标签蛋白沉淀就就是

A、研究蛋白质相互作用得技术B、基于亲和色谱原理

C、常用标签就就是GSTD、也可以就就是6组氨酸标签E、以上都对

15、研究蛋白质与DNA在染色质环境下相互作用得技术就就是

A、标签蛋白沉淀B、酵母双杂交C、凝胶迁移变动实脸D、染色质免疫沉

淀法E、噬菌体显示筛选系统

16、动物整体克隆技术又称为

A、转基因技术B、基因灭活技术C、核转移技术D、基因剔除技术

E、基因转移技术

17、目前主要克隆得致病基因就就是

A、糖尿病致病基因B、恶性肿瘤致病基因C、单基因致病基因

D、多基因致病基因E、高血压致病基因

18、基因疫苗主要就就是指

A、DNA疫苗B、RNA疫苗C、反义核酸D、核晦E、小干扰RNA

19、目前基因治疗中选用最多得基因载体就就是

A、噬菌体B、脂质体C、逆转录病毒D、腺病毒相关病毒E、腺病毒

20、目前基因治疗多采用得方法就就是

A、基因增补B、基因置换C、基因矫正D、基因灭活E、基因疫苗

（二）B型题

A、SouthernblottingB、Northernblotting

C、WesternblottingD、dotbiottingE>insituhybr

idization

1、不需要电泳、转膜等程序

2、电泳前不需进行限制性内切酶消化

3、靠电转移完成生物大分子得转移

4、直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交

A、逆转录PCRB、原位PCRC、实时PCR

D、多重PCRE、RFLP

5、将目得基因扩增与定位相结合

6、能动态检测反应过程中得产物量

7、将RNA得逆转录和PCR反应联合应用得一项技术

8、在同一反应中采取多对引物

A、功能克隆B、定位克隆C、转基因技术

D、核转移技术E、基因剔除

9、也叫基因靶向灭活

10、该技术中，被导入得目得基因称为转基因

11、从对基因编码产物得功能得了解出发克隆致病基因

A、基因疫苗B、基因矫正C、基因置换

D、基因增补E、基因失活

12、目前基因治疗采用最多得方法就就是

13、将致病基因得异常碱基进行修正得基因治疗方法就就是

14、将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因得基因治疗方法就就是

15、利用特定得反义核酸阻断变异基因异常表达得基因治疗方法就就是

A、酵母双杂交技术B、标签蛋白沉淀C、电泳迁移率变动测定

D、染色质免疫沉淀E、荧光共振能量转换效应分析

16、凝胶阻滞实验

17、需要设计诱饵基因

18、近年该技术与芯片技术结合在一起，成为一项鉴定特定核蛋白得DNA结合

靶点得新技术

（三）X型题

1、核酸探针可以就就是

A、人工合成寡核苻酸片段B、基因组DNA片段C、RNA片段

D、cDNA全长或部分片段E、核甘酸

2、核酸分子杂交可以形成得杂化双链有

A、DNA/DNAB、RNA/RNAC、DNA/RNAD、寡核甘酸/R

NA

E、寡核菩酸/DNA

3、PCR技术主要用于

A、目得基因得克隆B、基因得体外突变C、DNA和RNA得微量

分析D、DNA序列测定E、基因突变分析

4、分子杂交技术得原理涉及

A、分子杂交特性B、基因文库C、印迹技术D、生物芯片E、探针技术

5、关于DNA链末端合成终止法正确得就就是

A、需加入得链终止剂ddNTPB、dNTP需要标记C、引物也需要标记

D、又称Sanger法E、ddNTP缺乏5'-OH

6、基因组DNA文库建立需要

A、基因组进行限制性内切酶消化B、DNA片段克隆到相应载体中C、重组

体感染宿主菌D、筛选目得基因可以通过核酸分子杂交得方法进行E、以入噬菌

体为载体得人基因组DNA文库得克隆数目至少应在106以上

7、用于构建基因组DNA文库得载体有

A、酵母人工染色体B、粘粒C、X噬菌体D、腺病毒E、脂质体

8、基因诊断较常规诊断其特点有

A、属于病因诊断B、特异性强C、适用我,围窄D、灵敏度高E、有放

大效应

9、基因失活得常用技术包括

A、基因疫苗B、核酶C、小干扰RNAD、反义核酸E、基因置换

10、克隆羊多莉得产生属于

A、同种异体细胞转移技术B、同种异体细胞核转移技术C、试管内受精

D、无性繁殖E、同种异体细胞转基因技术

11、疾病动物模型可用于

A、探讨疾病得发生配制B、克隆致病基因C、新治疗方法得筛选系统

D、新药物得筛选系统E、新疾病模型得筛选系统

12、蛋白质芯片主要应用于

A、蛋白质结构得研究B、蛋白质表达谱得研究C、蛋白质功能得研究

D、蛋白质之间得相互作用研究E、疾病得诊断和新药得筛选

13、研究蛋白质相互作用得技术包括

A、标签蛋白沉淀B、酵母双杂交C、凝胶阻滞实险

D、噬菌体显示筛选系统E、DNA印迹

14、基因治疗得基本程序包括

A、治疗性基因得选择B、基因载体得选择C、靶细胞得选择D、基因转移

E、回输体内

15、目前可用作基因治疗得基因载体包括

A、腺病毒相关病毒B、噬菌体C、腺病毒D、逆转录病毒E、粘粒

二、就就是非题

1、Southernblot主要用于RNA得定性和定量分析。

2、蛋白质印迹分析技术中蛋白质得转移,可以龙电转移，也可以靠毛细作用转移。

3、实时PCR技术与普通PCR技术相比,她可以动态监测反应过程中产物得量。

4、Sanger法在测定核酸序列时，反应管中加入得dNTP仅标记一种即可。

5、生物芯片可以就就是DNA芯片、cDNA芯片或蛋白质芯片。

6、酵母双杂交技术就就是分析DNA—蛋白质相互作用得一项重要技术。

7、核转移技术，就就是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核得卵细胞内,

使之发育成个体。

8、基因矫正就就是用正常得基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治疗

目得。

9、目前基因治疗多关用基因增补得方式。

10、RNA印迹技术中，RNA分子在转移前需进行限制性内切酶切割。

11、PCR反应中变性主要就就是使模板DNA完全变性为单链。

12、实时PCR技术中，TagDNA聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发

挥3'-5,核酸外切酶活性。

13、酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列得蛋白质可以相互作用得生物信

息学推测。

14、转基因技术即动物克隆技术，就就是无性繁殖。

15、内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。

16、基因转移和基因剔除技术在医学中最重要得用途就就是建立疾病动物模型。

17、定位克隆就就是指从对基因编码产物得功能得了解出发来克隆致病基因。

18、目前DNA序列分析就就是找出患者有关底因变异所在得最为直接和确切

得基因诊断法。

三、填空题

1、分子杂交就就是利用DNA和这一基本性质来进行DNA或RNA定性、

定量分析得。

2、在印迹技术中，将DNA片段在琼脂糖凝胶中使其成为，利用使胶中得生

物大分子转移到膜上，使之成为固相化分子。

3、印迹技术得基本流程依次为、、和。

4、Southernblotting主要用于定性和定量分析，亦可用于和得分析。

5、Northernb1otting主要用于检测得表达水平，敏感性较PCR,但其具有

和得优点O

6、Westcmblotting主要用于检测样品中得存在、细胞中以及得相互作

用研究等。

7、PCR得基本反应步骤包括、、。

8、基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下得，其原理就就是基

于。

9、在转基因技术中，被导入得目得基因称为，目得基因得受体动物称为。

10、标签融合蛋白结合实验主要用于证明就就是否存在直接得物理结合，分析结合

得及筛选细胞内与融合蛋白相结合得。

11、染色质免疫沉淀法就就是目前可以研究与相互作用得主要方法。

12、目前克隆致病相关基因主要有和两大笠略。

13、根据受体细胞得类型不同,基因治疗分为辑基因治疗和得基因治疗两大类。

14、目前使用得基因载体有和两大类。

15、在人类基因治疗实施中，导入基因得方式有和两大类。

四、名词解释

1、probe

2、blottingtechnologe

3、genelibary

4、核转移技术

5、genechip

6、gcnctherapy

7、genediagnosis

8、基因疫苗

9、geneinactivation

10、genereplacement

11、geneaugmertation

12、PCR

13exvivo

五、问答题

1、简述印迹技术得分类及应用。

2、简述PCR反应体系得基本成分、PCR得基本反应步骤和主要用途。

3、简述PCR技术得基本原理。

4、简述逆转录PCR、原位PCR和实时PCR技术得基本原理和主要区别。

5、简述DNA链末端合成终止法（Sanger法）测序得基本原理。

6、简述基因转移和基因剔除技术在医学发展中得作用。

7、简述酵母双杂交技术得基本原理及应用。

8、试述染色质免疫沉淀法医本原理及用途。

9、简述基因诊断得概念及特点。

10、何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？

11、试述基因治疗得基本程序。

12、欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽得基因与某真核表达质粒重组在一

起。请您设计一个实验，利用PCR方法鉴定此重组表达质粒就就是否含有这一多肽得

基因。

13、请设计一个实验,利用酵母双杂交系统检测从某一癌组织中提取、纯化得一种

未知蛋白质X与两种已知蛋白质a、b之间就就是否有相互作用。

11、请为某一单基因遗传病（低表达或不表达）得患者设计一个基因治疗方案。

参考答案

一、选择题

（一）A型题

1、B2、C3、D4、E5、B6、D7、B8、A9、D

1()、A11、D12、C13、B14、E15、D16、C17、C

18、A19、D20、A

(二)B型题

1、D2、B3、C4、E5、B6、C7、A8、D9、E

1()、C11.A12、D13、B14、C15、E16、C17、A

18、D

(三)X型题

1、ABCD2、ABCDE3、ABCDE4、ACE5、ABD6、ABC

DE7、ABC8>ABDE9、BCD10、BD11、ACD12、BC

DE13、AB14、ABCD15、ACD

二、就就是非题

1、B2、B3、A4、A5、A6、B7、B8、B9、A

1()、B11、A12、B

13、A14B15B16A17、B18、A

三、填空题

1、变性复性

2、变性单链毛细作用NC

3、电泳转移杂交放射自显影或化学显色

4、DNA重组质粒噬菌体

5、mRNA差特异性强假阳性率低

6、特异性蛋白质得存在特异性蛋白质得半定量分析蛋白质分子

7、变性退火延伸

8、基因差异表达情况双色荧光探针杂交

9、转基因转基因动物

10、两种蛋白质分子具体结构部位未知分子

11、体内DNA蛋白质

12、功能克隆定位克隆

13、体细胞生殖细胞

14、病毒载体非病毒载体

15、直接体内疗法间接体内疗法

四、名词解释

1、探针，就就是指带有特殊可检测标记（放射性垓素或其她化合物标记）得核酸片段,

她具有特定得序列，能够与待测得核酸片断互补结合，因此可用于检测核酸样品中特定得

基因。

2、印迹技术,就就是指将在凝胶中分离得生物大分子转移或直接放在固定化介质上

并加以检测分析得技术。她包括DNA印迹技术、RNA印迹技术和蛋白质印迹技术等。

3、基因文库，就就是指一个包含了某一生物体全部DNA序列得克隆群体。基因

文库可以分为基因组DNA文库和cDNA文库。

4、核转移技术，即所谓动物整体克隆技术，就就是指将动物体细胞核全部导入另一

个体去除了胞核得激活得卵细胞内，使之发育成个体。这样得个体所携带得遗传性状仅来

自一个父亲或母亲个体，因而为无性繁殖。从遗传角度上讲，就就是一个个体得完全拷贝，

故称之为克隆。

5、基因芯片，又称DNA微阵列，包括DNA芯片(DNAchip)和cDNA芯片

(cDNAchip),就就是指籽许多特定得DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律

地紧密排列固定于支持物上,然后与待测得荧光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系

统等对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一位点得荧光信号做出检测、比较和分析，从

而迅速得出定性和定量得结果。

6、基因诊断，就就是指利用现代分子生物学和分子遗传学得技术和方法，直接检测基

因结构及其表达水平就就是否正常，从而对疾病作出诊断得方法。

7、基因治疗，从广义上讲，就就是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内

发挥作用，以达到治疗疾病目得得方法。

8、基因疫苗，主要就就是指DNA疫苗,就就是第三代疫苗。其将编码外源性抗

原得基因插入到真核表达质粒中，直接导入人体内，抗原基因在一定时间内持续表达，不断

刺激机体免疫系统，达到治病或防病目得。

9、基因失活,就就是指将特定得序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因

得异常表达，已达到治疗疾病得目得。

10、基因置换，就就是指用正常得基因通过体内基因同源重组，原位替换致病基因，

使细胞内得DNA完全恢复正常状态。

11、基因增补，就就是指将目得县因导入病变细胞或其她细胞，不去除异常基因，而通

过目得基因得非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因得功能或使原有得功能增强。

12、聚合酶链反应，指以DNA分子为模板，以一对与模板序列相互补得寡核昔酸

片段为弓］物，在DNA聚合酶得作用下，完成新得DNA得合成，重复这一过程使目得

DNA片段得到扩增。这一技术可以将微量目得DNA片段扩增一百万倍以上。

13、间接体内疗法，就就是指在体外将外源基因导入耙细胞内，再将这种基因修饰

过得细胞回输病人体内，使带有外源基因得细胞在体内表达相应产物,已达到治疗得目

得。

五、问答题

1、简述印迹技术得分类及应用。

答:印记技术就就是指将在凝胶中分离得生物大分子转移或直接放在固定化介质上

并加以检测分析得技术。她主要包括DNA印迹技术(Southernblot)、RNA印

迹技术(N0rthernblot)和蛋白质印迹技术(Westernbl0t)等。

DNA印迹技术主要用于基因组DNA得定性和定量分析，例如对基因组中特异基

因得定位及检测等，此外亦可用于分析重组质粒和噬菌体。

RNA印迹技术主要用于检测某一组织或细胞中已知得特异mRNA得表达水平,

也可以比较不同组织和细胞中得同一基因得表达情况。

蛋白质印迹技术，也叫免疫印迹，用于检测样品中特异性蛋白质得存在、细胞占特异蛋

白质得半定量分析以及蛋白质分子得相互作用研究等。

2、简述PCR反应体系得基本成分、PCR得基本反应步骤和主要用途。

答:组成PCR反应体系得基本成分包括模板DNA、特并性引物、耐热性DNA

聚合晦、dNTP以及含有Mg2+得缓冲液。

PCR得基本反应步骤包括：

(1)变性:将反应体系加热至95℃，使模板DNA完全变性为单链，同时因物自

身以及引物之间存在得局部双链也得以消除。

(2)退火:将温度下降至适宜温度使引物与模板结合。

(3)延伸:将温度升至72℃,DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA得合

成反应。

PCR主要用途：⑴目得基因得克隆;(2)基因得体外突变;(3)DNA和RNA得微

量分析;(4)DNA序列测定;(5)基因突变分析。

3、简述PCR技术得基本原理及应用。

答。这种变性-复性-延伸得过程就就就是一个PCR循环，PCR就就就是

在合适条件下得这种循环得不断重复。主要用于目得基因得克隆、基因得体外突变、D

NA和RNA得得微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等。

4、简述逆转录PCR、原位PCR和实时PCR技术得基本原理和主要区别。

答:逆转录PCR就就是将RNA得逆转录和PCR反应联合应用得一种技术。即

首先以RNA为模板，在逆转录酶得作用下合成cDNA，再以后者为模板通过PCR

反应来扩增目得基因。

原位PCR就就是在固定液固定、石蜡包埋得组织切片或细胞涂片上得单人细胞内

进行得PCR反应，然后用特异性探针进行原位杂交，即可检出待测DNA或RNA

就就是否在该组织或细胞中存在。

实时PCR得基本原理就就是引入了荧光标记分子,并使荧光信号强度与PCR

产物量成正比，对每一反应时刻得荧光信号进行实时分析,计算出PCR产物量。根据动

态变化数据,可以精确计算出样品中最初得含量差异。

逆转录PCR与传统PCR相比，将RNA得逆转录和PCR反应联合起来，可以

对已知序列得RNA进行定性及半定量分析。常规PCR或RT-PCR技又得产物

不能在组织细胞中定位原位，因而不能与特定得组织细胞特征表型相联系，原位PCR技

术可以将目得基因得扩增与定位相结合。实时PCR技术与传统PCR反应相比，在常

规正向和反向引物之间，增加了一特殊引物作为探针。该技术可以通过动态监测反应过程

中得产物量，消除了产物堆积对定量分析得干扰。

5、简述DNA链末端合成终止法(Sanger法)得基本原理。

答：DNA链末端合成终止法基本原理就就是:将2',3'-双脱氧核甘酸

（ddNTP）代替部分dNTP作为底物掺入到新合成得DNA链中，由于ddNTP缺

乏3'—OH,一旦ddNTP掺入到DNA链中，就不能与下一核甘酸形成磷酸二

酯键，因此合成反应终止。测定时,首先将模板分为四组，每一组分别加入引物和DNA

聚合晦及由32P或35s标记得dNTP，启动DNA合成，一定时间后，每一组加入

四种ddNTP中得一种就可以获得在不同部位终止得、长短不同得DNA链,经聚丙

烯酰胺凝胶电泳分离这些片段，通过反射自显影就可以读出DNA得序列。

6、简述基因转移和基因剔除技术在医学发展中得作用。

答:基因转移和基因剔除技术在医学中最重要得用途就就是建立疾病动物模型。以往

得遗传疾病动物模型主要就就是自然发生或用化学药物、放射诱导等方式获得。基因转

移和基因剔除技术为直接建立动物模型提供了有效得手段。这些模型可用于探讨疾病得

发生机制，更重要得就就是可作为新得治疗方法和新得药物得筛选系统。

建立动物模型：⑴单基因决定疾病模型:应用基因剔除模拟基因失活,如动脉硬化症

疾病模型。（2）多基因决定疾病模型

7、简述酵母双杂交技术得基本原理及应用。

答:酵母双杂交系统目前已成为分析细胞内未知蛋白相互作用得主要手段之一。该技

术就就是基于酵母转录激活因子GAL4分子得DNA结合区（BD）和促进转录

得活性区（AD）被分开后埒丧失对下游基因得激活作用，但BD和AD分别融合了具

有配对相互作用得两种蛋白质分子后,就可以依靠所融合得蛋白质分子之间得相互作用

而恢复对下游基因得表达激活作用。

酵母双杂交系统可以用于（1）证明两种已知基因序列得蛋白质可以相互作用得生

物信息学推测；(2)分析已知存在相互作用得两种蛋白质分子得得相互作用功能结构域

或关键得氨基酸残基；(3)将拟研究得蛋白质得编码基因与BD基因融合成为“诱

饵”表达质粒，可以筛选AD基因融合得“猎物”基因表达文库，筛选未知得

相互作用蛋白质。

8、试述染色质免疫沉淀法基本原理及用途。

答:染色质免疫沉淀技术就就是目前可以研究体内DNA与蛋白质相互作用得主要

方法。

该法可以研究蛋白质与DNA在染色质状态下得相互作用，阐明真核生物基因表达

机制。她得基本原理就就是在活细胞状态下用化学交联试剂固定蛋白质一DNA复合

物，并将其随机切断为一定长度范围内得染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合

体,再利用PCR技术特异性得富集目得蛋白结合得DNA片段，从而获得蛋白质与

DNA相互作用得信息。

9、简述基因诊断得概念及特点。

答:基因诊断就就是指利用现代分子生物学和分子遗传学得技术和方法，直接检测基

因结构及其表达水平就就是否正常，从而对疾病作出诊断得方法。

基因诊断与其她诊断方法相比，基因诊断得方法特点就就是：

(1)针对性强，以基因作为检查材料和探察目标，属于“病因诊断”。

(2)特异性强，用分子杂交技术选用特定基因序列作为探针,故有很高得特异性。

(3)灵敏度高，所用技术具有放大效应，故诊断灵敏度高

(4)适用性强,诊断范围广。

10、何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？

答:从广义上讲，就就是指将某种遗传物质转移到患者细胞内,使其在体内发挥作用，以

达到治疗疾病目得得方法，均谓之基因治疗。

(1)缺陷基因精确得原位修复包括对致病基因得突变碱基进行矫正得基因矫正和

用正常基因通过重组原位替换致病基因得基因置换。这两种方法就就是对缺陷基因精确

得原位修复，不涉及基因组得任何改变，就就是最为理想得治疗方法,但技术上目前尚未突

破。

(2)基因增补就就是指将目得基因导入病变细胞或其她细胞，不去除异常基因，而

通过目得基因得非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因得功能或使原有得功能增强。目

前基因治疗多采用此法。

(3)基因失活就就是指将特定