基因测序文库制备技师考试试卷及答案

基因测序文库制备技师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.基因组DNA末端修复常用的酶是______。2.加A尾步骤常用的酶是______。3.接头连接依赖的酶是______。4.DNA片段化的常见方法包括超声、酶切和______。5.文库PCR引物需与______互补。6.反转录酶用于合成______文库的第一链cDNA。7.磁珠纯化基于核酸与磁珠的______作用。8.低循环数PCR的目的是减少______。9.文库浓度定量常用Qubit和______。10.末端修复后需对DNA片段进行______以防止自身环化。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.末端修复是否需要添加dNTP？A.是B.否C.仅双链需要D.仅单链需要2.接头连接的最适温度是______。A.16℃B.37℃C.65℃D.95℃3.基因组文库优先选择的片段大小范围是______。A.50-100bpB.200-500bpC.1000-2000bpD.>5000bp4.cDNA第一链合成依赖______。A.DNA聚合酶B.反转录酶C.RNA聚合酶D.末端转移酶5.回收小片段（<200bp）需______PEG浓度。A.增加B.减少C.不变D.无关6.片段大小分布检测的金标准仪器是______。A.NanodropB.QubitC.Agilent2100D.电泳仪7.过度PCR会导致文库______。A.片段变宽B.偏好性增加C.浓度降低D.纯度升高8.接头的作用不包括______。A.与flowcell杂交B.样本index区分C.防止自连D.增加片段长度9.去除DNA3’突出端常用______。A.T4DNA聚合酶B.Klenow片段C.ExonucleaseID.RNaseH10.含蛋白杂质的文库用Nanodrop定量会______。A.偏高B.偏低C.准确D.无影响三、多项选择题（共10题，每题2分）1.基因组文库核心步骤包括______。A.末端修复B.加A尾C.接头连接D.PCR富集2.DNA片段化方法有______。A.超声破碎B.酶切C.雾化D.化学断裂3.cDNA文库与基因组文库的差异是______。A.需反转录B.无内含子C.模板为RNAD.需去除rRNA4.文库质检指标包括______。A.片段分布B.浓度C.A260/A280D.完整性5.影响连接效率的因素有______。A.接头浓度B.连接酶活性C.反应温度D.末端质量6.磁珠纯化优点是______。A.回收率高B.去杂质彻底C.无蛋白酶残留D.选片段大小7.末端修复目的是______。A.平末端B.5’磷酸化C.去3’突出端D.修复损伤8.PCR富集注意事项是______。A.高保真酶B.8-12循环C.避免引物二聚体D.调退火温度9.接头需包含______。A.测序引物区B.样本indexC.flowcell互补区D.限制酶区10.文库浓度低的原因是______。A.片段化差B.连接效率低C.PCR循环不足D.磁珠回收率低四、判断题（共10题，每题2分）1.末端修复后5’磷酸化是连接的必要条件。（）2.加A尾仅在3’端添加一个A。（）3.T4DNA连接酶可连平末端和粘性末端。（）4.cDNA文库需先反转录再片段化。（）5.磁珠仅能回收特定大小片段。（）6.PCR富集必须用高保真酶。（）7.Nanodrop定量比Qubit准确。（）8.片段越小测序数据量越高。（）9.接头index用于样本区分。（）10.低循环数PCR减少扩增偏好性。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述Illumina文库制备的核心步骤及目的。2.影响文库产量的关键因素有哪些？3.如何判断文库质检合格？4.cDNA文库与基因组文库的主要差异？六、讨论题（共2题，每题5分）1.文库片段分布过宽的原因及解决方法？2.低质量文库（浓度低、纯度差）对测序的影响及改进策略？---答案部分一、填空题答案1.T4DNA聚合酶（或末端修复酶mix）2.TaqDNA聚合酶（或Klenowexo-）3.T4DNA连接酶4.雾化5.测序接头6.cDNA（转录组）7.疏水（PEG介导）8.扩增偏好性9.qPCR（实时荧光定量PCR）10.5’磷酸化二、单项选择题答案1.A2.A3.B4.B5.B6.C7.B8.D9.A10.A三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABD4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABCD四、判断题答案1.对2.对3.对4.对5.错6.对7.错8.错9.对10.对五、简答题答案1.核心步骤：①片段化（打断为200-500bp）；②末端修复（平末端+5’磷酸化）；③加A尾（3’端加A，防自连）；④接头连接（连含index的测序接头）；⑤PCR富集（提高浓度）；⑥质检（确认合格）。2.关键因素：①片段化效率；②末端修复质量；③接头连接效率；④PCR循环数；⑤磁珠回收率；⑥模板质量（DNA/RNA纯度）。3.合格标准：①片段主峰200-500bp，无明显杂带；②浓度≥1ng/μL；③A260/A280=1.8-2.0；④无降解（电泳无严重拖尾）；⑤Qubit与qPCR定量一致。4.差异：①模板：cDNA为RNA，基因组为DNA；②序列：cDNA无内含子，基因组含全部序列；③步骤：cDNA需反转录、去rRNA，基因组无需；④应用：cDNA用于表达分析，基因组用于全基因组测序。六、讨论题答案1.原因：①片段化条件不当（超声功率/时间不合适）；②磁珠纯化PEG浓度不对；③接头二聚体/多聚体副产物。解决：①调整片段化参数（降低超声功率）；②优化磁珠纯化（双步回收目标片段）；③减少接头浓度，磁珠去除