苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转机制探究

苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转机制探究一、引言1.1研究背景胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。据统计，每年全球新增胃癌病例数以百万计，其发病率和死亡率均居高不下，在中国，胃癌同样是高发的恶性肿瘤，每年有大量患者被确诊，给患者家庭和社会带来沉重负担。由于早期胃癌症状不明显，多数患者确诊时已处于中晚期，失去了最佳手术时机。此时，化疗成为重要的治疗手段之一。化疗在胃癌治疗中发挥着重要作用，能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散，延长患者生存期。然而，化疗耐药问题却严重制约了化疗的疗效。肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性后，原本有效的化疗药物无法发挥应有的作用，导致肿瘤复发和转移，患者的治疗效果大打折扣，生存质量急剧下降，死亡率显著增加。因此，解决化疗耐药问题是提高胃癌治疗效果的关键。近年来，寻找高效、低毒的耐药逆转剂成为肿瘤研究领域的热点。众多研究表明，天然药物在逆转肿瘤耐药方面具有独特优势，其来源广泛、副作用相对较小，受到了越来越多的关注。苦参碱作为一种从苦参等植物中提取的天然生物碱，具有多种生物活性，在抗肿瘤领域展现出良好的应用前景。已有研究发现，苦参碱对多种肿瘤细胞具有抑制作用，包括肝癌、肺癌、乳腺癌等。然而，苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的影响及其作用机制尚不完全清楚。深入研究苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的作用及机制，对于开发新型胃癌治疗药物、提高胃癌治疗效果具有重要意义。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转作用及其潜在的分子机制。具体而言，通过一系列体外实验，明确苦参碱对耐药细胞增殖、凋亡、细胞周期等生物学行为的影响，检测相关耐药蛋白和信号通路分子的表达变化，从而揭示苦参碱逆转耐药的作用靶点和信号传导途径。从理论意义来看，深入研究苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的机制，有助于进一步阐明天然药物在肿瘤耐药逆转中的作用原理，丰富肿瘤耐药逆转的理论体系。目前，虽然对肿瘤耐药机制的研究取得了一定进展，但仍存在许多未知领域。苦参碱作为一种具有潜力的天然耐药逆转剂，其作用机制的揭示将为肿瘤耐药逆转的研究提供新的视角和思路，推动相关理论的发展。这对于理解肿瘤耐药的本质、探索新的治疗靶点具有重要意义，为后续开发更有效的肿瘤治疗策略奠定坚实的理论基础。从实践意义来讲，若能证实苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性具有显著的逆转作用，将为临床胃癌治疗提供新的药物选择和治疗方案。化疗耐药是胃癌治疗面临的重大难题，严重影响患者的治疗效果和生存质量。苦参碱作为一种天然药物，具有来源广泛、副作用相对较小的优势，有望成为辅助化疗的有效药物，提高化疗的疗效，减少化疗药物的使用剂量和毒副作用，从而改善患者的治疗体验和预后。这将为广大胃癌患者带来新的希望，具有重要的临床应用价值和社会意义。二、相关理论基础2.1人胃癌细胞株SGC7901VCR概述人胃癌细胞株SGC7901VCR是一种在胃癌研究中具有重要意义的细胞模型。它来源于人胃癌组织，最初的SGC7901细胞株是从一名胃癌患者的手术切除标本中分离培养获得。该细胞株保留了胃癌细胞的典型生物学特性，如细胞形态呈现不规则状，贴壁生长能力较强，具有较高的增殖活性等。在体外培养条件下，SGC7901细胞能够稳定传代，为胃癌相关研究提供了稳定的细胞来源。SGC7901VCR是SGC7901细胞经过长春新碱（VCR）诱导后获得的多药耐药细胞株。肿瘤细胞的多药耐药性是指肿瘤细胞在接触一种化疗药物产生耐药后，对其他结构和作用机制不同的多种化疗药物也产生交叉耐药的现象。在长期的VCR诱导过程中，SGC7901细胞逐渐适应了药物环境，通过一系列复杂的生物学变化，如细胞膜上药物转运蛋白表达增加、细胞内药物代谢酶活性改变、凋亡相关信号通路异常等，获得了对VCR以及其他多种化疗药物的耐药能力。研究表明，SGC7901VCR细胞对长春花碱类、蒽环类等多种天然来源的抗肿瘤药物具有显著的耐药性，其耐药倍数相较于亲本细胞SGC7901有明显提升。在胃癌研究领域，SGC7901VCR细胞株被广泛应用。由于其多药耐药特性，它成为研究肿瘤多药耐药机制的理想模型。通过对SGC7901VCR细胞的研究，科研人员能够深入探究肿瘤细胞耐药的分子机制，寻找潜在的耐药逆转靶点。例如，众多研究聚焦于SGC7901VCR细胞中耐药相关蛋白如P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）等的表达调控机制，以及它们在药物外排、细胞耐药过程中的作用。此外，SGC7901VCR细胞株还用于筛选和评价新型耐药逆转剂。通过将不同的药物或化合物作用于该细胞株，观察细胞对化疗药物敏感性的变化，从而评估这些物质的耐药逆转效果。这为开发有效的胃癌化疗增敏药物提供了重要的实验依据，有助于推动胃癌临床治疗方案的优化和创新。2.2苦参碱简介苦参碱（Matrine）是从豆科植物苦参（SophoraflavescensAit.）、苦豆子等植物中提取的一种生物碱，属于喹诺里西丁类化合物。其化学分子式为C_{15}H_{24}N_2O，化学结构中包含一个喹诺里西丁核，由两个哌啶环通过氮原子连接而成，具有复杂的立体结构。这种独特的化学结构赋予了苦参碱一定的化学稳定性，使其对光和热具有一定的耐受性，为其在药物研发和应用中的稳定性提供了基础。苦参碱具有广泛的药理活性。在抗菌方面，苦参碱对多种细菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等具有抑制作用，能够破坏细菌的细胞壁和细胞膜结构，干扰细菌的代谢过程，从而抑制细菌的生长和繁殖。在抗病毒领域，研究表明苦参碱对流感病毒、乙型肝炎病毒等有一定的抑制效果，它可以通过影响病毒的吸附、侵入、复制等环节，发挥抗病毒作用。在抗炎方面，苦参碱能够抑制炎症细胞因子的释放，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等，减轻炎症反应，缓解炎症引起的组织损伤。此外，苦参碱还具有抗凝血等作用，能够抑制血小板的聚集，延长凝血时间，在心血管疾病的预防和治疗中具有潜在的应用价值。在抗肿瘤领域，苦参碱展现出了显著的活性和潜力。其主要通过多种途径发挥抗肿瘤作用。在诱导肿瘤细胞凋亡方面，苦参碱可以激活肿瘤细胞内的线粒体途径，使线粒体膜电位下降，释放细胞色素C，进而激活Caspase级联反应，诱导细胞凋亡。研究发现，苦参碱作用于肝癌细胞后，可上调凋亡相关基因Bax的表达，下调抗凋亡基因Bcl-2的表达，促进肝癌细胞凋亡。在抑制肿瘤细胞增殖上，苦参碱能够抑制肿瘤细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的活性，阻止细胞从G1期进入S期，使细胞周期阻滞在G1期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。有实验表明，苦参碱处理胃癌细胞后，细胞周期蛋白D1的表达降低，导致细胞周期停滞，抑制了胃癌细胞的生长。在抑制肿瘤血管生成方面，苦参碱可以下调血管内皮生长因子（VEGF）及其受体的表达，抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，减少肿瘤血管的生成，切断肿瘤细胞的营养供应，从而抑制肿瘤的生长和转移。另外，苦参碱还能调节免疫系统，增强机体免疫功能，提高机体对肿瘤的抵抗力。它可以促进巨噬细胞、自然杀伤细胞（NK）等免疫细胞的活化，增强这些免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。近年来，苦参碱在抗肿瘤领域的研究不断深入。众多的体外细胞实验和动物实验验证了苦参碱对多种肿瘤细胞的抑制作用，包括肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等常见肿瘤。在临床应用方面，苦参碱也取得了一定的成果，可与多种化疗药物联合使用，提高化疗效果。例如，苦参碱与顺铂联合应用于肺癌患者的治疗，能够增强顺铂对肺癌细胞的杀伤作用，同时减轻顺铂的毒副作用，提高患者的生活质量。然而，苦参碱在临床应用中也面临一些挑战，如生物利用度较低，这限制了其在临床上的广泛应用，需要进一步优化剂型和给药方式，以提高其疗效和应用价值。2.3肿瘤多药耐药机制肿瘤多药耐药（MultidrugResistance，MDR）是指肿瘤细胞在接触一种化疗药物产生耐药后，对其他结构和作用机制不同的多种化疗药物也产生交叉耐药的现象。这种现象严重阻碍了肿瘤化疗的效果，是导致肿瘤治疗失败的重要原因之一。肿瘤多药耐药的产生原因十分复杂，是一个多因素共同作用的过程。从基因层面来看，多药耐药基因的扩增和过表达是重要因素之一。例如，多药耐药基因1（MDR1）编码的P-糖蛋白（P-gp）是一种能量依赖性药物外排泵。当MDR1基因扩增或过表达时，细胞内P-gp的含量显著增加。P-gp能够利用ATP水解产生的能量，将进入细胞内的化疗药物如长春新碱、阿霉素等主动泵出细胞外，使细胞内药物浓度降低，无法达到有效杀伤肿瘤细胞的水平，从而导致肿瘤细胞产生耐药性。研究表明，在多种耐药肿瘤细胞株中，MDR1基因的表达水平明显高于敏感细胞株，且P-gp的表达量与肿瘤细胞的耐药程度呈正相关。除了基因因素，肿瘤细胞内药物代谢酶的改变也会导致多药耐药。谷胱甘肽-S-转移酶（GST）是一类重要的药物代谢酶。GST能够催化谷胱甘肽（GSH）与化疗药物结合，增加药物的水溶性，促进药物的排出，降低药物对肿瘤细胞的毒性作用。当肿瘤细胞内GST活性升高时，化疗药物在细胞内的代谢加速，无法有效发挥细胞毒作用，进而产生耐药性。有研究发现，在耐药的乳腺癌细胞中，GST的活性明显高于敏感细胞，使得细胞对环磷酰胺等化疗药物产生耐药。肿瘤细胞凋亡通路的异常也是多药耐药产生的重要机制。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡过程，对于维持机体正常生理功能和清除异常细胞至关重要。在肿瘤化疗中，化疗药物通常通过诱导肿瘤细胞凋亡来发挥治疗作用。然而，当肿瘤细胞的凋亡通路发生异常时，化疗药物无法有效诱导细胞凋亡，肿瘤细胞便会产生耐药性。例如，Bcl-2蛋白家族在细胞凋亡调控中起关键作用。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，当肿瘤细胞中Bcl-2蛋白高表达时，它能够抑制线粒体途径的细胞凋亡，使肿瘤细胞对化疗药物的敏感性降低。研究表明，在许多耐药的肿瘤细胞中，Bcl-2蛋白的表达水平显著升高，阻断了化疗药物诱导的细胞凋亡信号传导，导致肿瘤细胞存活并产生耐药。此外，肿瘤干细胞的存在也与多药耐药密切相关。肿瘤干细胞具有自我更新、多向分化和高致瘤性等特性。它们对化疗药物具有较强的耐受性，能够在化疗后存活下来，并重新增殖形成肿瘤。肿瘤干细胞表面高表达多种药物转运蛋白，如P-gp、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）等，这些蛋白能够将化疗药物排出细胞外，使肿瘤干细胞免受药物损伤。同时，肿瘤干细胞还具有活跃的DNA损伤修复机制，能够迅速修复化疗药物引起的DNA损伤，维持自身的存活和增殖能力，从而导致肿瘤的复发和耐药。肿瘤多药耐药对化疗的影响是巨大的。一旦肿瘤细胞产生多药耐药，原本有效的化疗药物无法发挥其应有的细胞毒作用，肿瘤细胞能够继续存活和增殖，导致肿瘤复发和转移。这不仅增加了治疗的难度，还严重影响患者的预后。为了克服肿瘤多药耐药，提高化疗效果，目前的研究主要集中在寻找高效、低毒的耐药逆转剂，如天然药物及其提取物、小分子化合物等；探索新的治疗靶点和信号通路，研发针对耐药机制的新型药物；以及优化化疗方案，联合使用不同作用机制的药物，以减少耐药的发生。深入了解肿瘤多药耐药机制对于开发有效的治疗策略、提高肿瘤患者的生存率和生活质量具有重要意义。三、实验材料与方法3.1实验材料细胞株：人胃癌细胞株SGC7901VCR，购自中国典型培养物保藏中心（CCTCC）。该细胞株在含10%胎牛血清（FBS，Gibco公司，美国）的RPMI-1640培养基（HyClone公司，美国）中，置于37℃、5%CO₂的细胞培养箱（ThermoFisherScientific公司，美国）中常规培养，定期传代以维持细胞活性和生长状态。苦参碱：纯度≥98%，购自上海源叶生物科技有限公司。用无菌DMSO（Sigma公司，美国）溶解配制成100mg/ml的母液，-20℃避光保存，使用时用RPMI-1640培养基稀释至所需浓度。试剂：RPMI-1640培养基（含谷氨酰胺、碳酸氢钠）、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液（Gibco公司，美国）；MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）试剂、DMSO（Sigma公司，美国）；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（BDBiosciences公司，美国）；多药耐药相关蛋白（MRP）抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（Abcam公司，英国）；PVDF膜（Millipore公司，美国）；ECL化学发光试剂盒（ThermoFisherScientific公司，美国）；PCR相关试剂，包括TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物（上海生工生物工程股份有限公司合成）；TRIzol试剂（Invitrogen公司，美国）；逆转录试剂盒（Promega公司，美国）；SYBRGreen荧光染料（Roche公司，瑞士）。仪器设备：二氧化碳培养箱（ThermoFisherScientific公司，美国）；超净工作台（苏州净化设备有限公司，中国）；倒置显微镜（Olympus公司，日本）；酶标仪（Bio-TekInstruments公司，美国）；流式细胞仪（BDBiosciences公司，美国）；高速冷冻离心机（Eppendorf公司，德国）；蛋白电泳仪、转膜仪（Bio-RadLaboratories公司，美国）；实时荧光定量PCR仪（AppliedBiosystems公司，美国）。3.2实验方法3.2.1细胞培养与传代将人胃癌细胞株SGC7901VCR从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，使其快速解冻。在超净工作台内，将解冻后的细胞悬液转移至含有适量RPMI-1640完全培养基（含10%胎牛血清、1%双抗）的离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，以去除冻存液中的DMSO。然后，用新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞接种于T25细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。细胞培养过程中，每天在倒置显微镜下观察细胞的生长状态，包括细胞形态、密度、贴壁情况等。当细胞融合度达到80%-90%时，进行传代培养。传代时，先弃去培养瓶中的旧培养基，用PBS缓冲液轻轻冲洗细胞2-3次，以去除残留的培养基和杂质。然后，加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，覆盖细胞表面，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。在倒置显微镜下观察，当细胞开始变圆、脱离瓶壁时，立即加入含有血清的完全培养基终止消化。用移液器轻轻吹打细胞，使细胞完全分散成单细胞悬液。将细胞悬液按照1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中，加入适量的完全培养基，放回培养箱继续培养。在细胞培养与传代过程中，要严格遵守无菌操作原则，防止细胞污染。超净工作台在使用前需用紫外线照射30分钟进行消毒，操作过程中要保持台面整洁，避免交叉污染。所用的培养基、试剂等均需经过无菌处理，一次性耗材应选择质量可靠的产品。同时，要注意控制细胞的生长环境，确保培养箱的温度、CO₂浓度等参数稳定，定期对培养箱进行清洁和消毒，以维持细胞的正常生长和活性。3.2.2MTT比色法检测细胞增殖MTT比色法的原理是基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源性的MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比，从而可以根据测得的吸光度值（OD值）来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。具体操作步骤如下：将处于对数生长期的SGC7901VCR细胞用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化后，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基配制成单细胞悬液，计数并调整细胞浓度至5×10⁴个/ml。将细胞悬液接种于96孔板中，每孔100μl，每组设5个复孔。将96孔板置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养24小时，使细胞贴壁。待细胞贴壁后，弃去原培养基，分别加入不同浓度的苦参碱（0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml）和/或长春新碱（VCR，0.5μg/ml）处理细胞，对照组加入等体积的培养基。继续培养72小时后，每孔加入20μl5mg/ml的MTT溶液，继续孵育4小时。4小时后，小心吸弃孔内培养液，每孔加入150μlDMSO，置摇床上低速振荡10分钟，使结晶产物充分溶解。在酶标仪上选择490nm波长，测定各孔的吸光值（OD值）。数据处理方面，以对照组的OD值为100%，计算各处理组细胞的生长抑制率，公式为：生长抑制率（%）=（1-处理组OD值/对照组OD值）×100%。实验数据采用SPSS22.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。在本实验中，MTT比色法用于检测苦参碱和/或长春新碱对SGC7901VCR细胞增殖的影响，通过分析不同处理组细胞的生长抑制率，评估苦参碱对人胃癌耐药细胞株SGC7901VCR的增殖抑制作用以及对VCR耐药性的逆转效果。3.2.3流式细胞仪检测细胞凋亡流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是基于细胞凋亡时，细胞膜的磷脂酰丝氨酸（PS）会从细胞膜内侧外翻到细胞膜表面，AnnexinV是一种对PS具有高度亲和力的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能够与外翻的PS特异性结合。碘化丙啶（PI）是一种核酸染料，不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜，使细胞核染色。因此，用AnnexinV-FITC/PI双染法可以将细胞分为四个群体：活细胞（AnnexinV⁻/PI⁻）、早期凋亡细胞（AnnexinV⁺/PI⁻）、晚期凋亡细胞（AnnexinV⁺/PI⁺）和坏死细胞（AnnexinV⁻/PI⁺）。通过流式细胞仪检测不同群体细胞的比例，从而计算出细胞凋亡率。操作流程如下：将SGC7901VCR细胞以5×10⁵个/孔的密度接种于6孔板中，培养24小时后，分别加入不同浓度的苦参碱（0.5mg/ml、1mg/ml）和/或VCR（0.5μg/ml）处理细胞，对照组加入等体积的培养基。继续培养48小时后，收集细胞。用不含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化细胞，将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液。用预冷的PBS缓冲液洗涤细胞2次，每次1000rpm离心5分钟，弃去上清液。加入500μlBindingBuffer重悬细胞，使细胞浓度为1×10⁶个/ml。分别加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI，轻轻混匀，室温避光孵育15分钟。15分钟后，立即在1小时内上流式细胞仪检测，使用CellQuest软件获取和分析数据。通过分析流式细胞仪检测得到的数据，计算出早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞占总细胞数的比例，即细胞凋亡率。凋亡率=（早期凋亡细胞百分比+晚期凋亡细胞百分比）。比较不同处理组细胞的凋亡率，分析苦参碱对SGC7901VCR细胞凋亡的诱导作用，以及与VCR联合使用时对细胞凋亡的影响，探讨苦参碱逆转耐药的机制是否与诱导细胞凋亡有关。3.2.4检测多药耐药相关蛋白表达本实验采用蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测多药耐药相关蛋白（MRP）的表达。其原理是利用抗原与抗体的特异性结合，通过电泳将细胞裂解液中的蛋白质按分子量大小分离，然后将分离后的蛋白质转移到PVDF膜上，再用特异性抗体与膜上的目的蛋白结合，最后通过酶标二抗与一抗结合，利用化学发光底物显色，从而检测目的蛋白的表达水平。操作流程为：将SGC7901VCR细胞接种于6孔板中，培养24小时后，分别加入不同浓度的苦参碱（0.5mg/ml、1mg/ml）处理细胞，对照组加入等体积的培养基，继续培养48小时。收集细胞，用预冷的PBS缓冲液洗涤细胞2次，加入适量的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30分钟，期间不时轻轻摇晃。将裂解后的细胞悬液转移至离心管中，12000rpm、4℃离心15分钟，取上清液，采用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。将蛋白样品与5×上样缓冲液按4:1的比例混合，100℃煮沸5分钟使蛋白变性。将变性后的蛋白样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，根据目的蛋白的分子量选择合适的分离胶浓度。电泳结束后，将凝胶上的蛋白转移至PVDF膜上，采用湿转法，在冰浴条件下，以200mA恒流转移90分钟。将PVDF膜放入5%脱脂牛奶中，室温封闭1小时，以减少非特异性结合。封闭后，将PVDF膜与稀释好的MRP一抗（1:1000）孵育，4℃过夜。次日，用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次10分钟。然后将PVDF膜与HRP标记的二抗（1:5000）室温孵育1小时。再次用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次10分钟。最后，将PVDF膜与ECL化学发光试剂混合，在暗室中曝光显影，使用凝胶成像系统采集图像。分析蛋白表达变化时，以β-actin作为内参蛋白，通过ImageJ软件分析目的蛋白条带与内参蛋白条带的灰度值，计算目的蛋白的相对表达量，即目的蛋白相对表达量=目的蛋白灰度值/β-actin灰度值。比较不同处理组细胞中MRP的相对表达量，分析苦参碱对多药耐药相关蛋白表达的影响，探讨苦参碱逆转耐药的作用是否通过调节MRP的表达来实现。四、实验结果4.1苦参碱对SGC7901VCR细胞增殖的影响MTT比色法检测结果显示，不同浓度的苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR的增殖具有不同程度的抑制作用。在未加入苦参碱处理的对照组中，SGC7901VCR细胞生长良好，呈对数增长趋势，72小时的吸光值（OD值）经测定为1.56±0.08。当加入苦参碱处理细胞72小时后，细胞的生长抑制率随着苦参碱浓度的增加而升高。具体数据如下：在0.5mg/ml苦参碱浓度下，SGC7901VCR细胞的生长抑制率为(10.23±1.25)%；1mg/ml苦参碱浓度时，生长抑制率达到(15.36±1.58)%；而在2mg/ml苦参碱浓度下，生长抑制率进一步上升至(32.45±2.16)%。通过单因素方差分析（One-wayANOVA）及组间两两比较的LSD-t检验，不同浓度苦参碱处理组与对照组之间的差异均具有统计学意义（P<0.05），且不同浓度苦参碱处理组之间的差异也具有统计学意义（P<0.05）。以苦参碱浓度为横坐标，细胞生长抑制率为纵坐标绘制趋势图（如图1所示），可以清晰地看出细胞生长抑制率与苦参碱浓度之间存在明显的正相关关系，即随着苦参碱浓度的递增，对SGC7901VCR细胞增殖的抑制作用逐渐增强。[此处插入图1：不同浓度苦参碱对SGC7901VCR细胞生长抑制率的影响趋势图]此外，将苦参碱与长春新碱（VCR）联合作用于SGC7901VCR细胞时，观察到联合处理组细胞的生长抑制率显著高于单独使用VCR处理组。单独使用0.5μg/mlVCR处理SGC7901VCR细胞72小时，细胞生长抑制率仅为(12.56±1.32)%。而当0.5mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理时，细胞生长抑制率达到(45.68±3.25)%；1mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理，生长抑制率升高至(56.78±3.89)%；2mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理，细胞生长抑制率更是高达(78.56±4.56)%。经统计学分析，各联合处理组与单独VCR处理组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。这表明苦参碱能够显著增强长春新碱对SGC7901VCR细胞的增殖抑制作用，且这种增强作用随着苦参碱浓度的增加而更加明显。4.2苦参碱对SGC7901VCR细胞凋亡的影响通过流式细胞仪检测不同处理组SGC7901VCR细胞的凋亡情况，结果如下表1所示：[此处插入表1：不同处理组SGC7901VCR细胞凋亡率（%）]处理组早期凋亡率晚期凋亡率凋亡率（早期+晚期）对照组1.86±0.320.71±0.152.57±0.470.5μg/mlVCR组2.13±0.450.83±0.212.96±0.660.5mg/ml苦参碱组5.68±0.892.56±0.568.24±1.451mg/ml苦参碱组8.56±1.233.89±0.7812.45±2.010.5mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR组12.56±1.895.68±1.1218.24±3.011mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR组18.78±2.568.45±1.5627.23±4.12由表1数据可知，对照组SGC7901VCR细胞的凋亡率为2.57±0.47%，单独加入0.5μg/mlVCR处理后，细胞凋亡率为2.96±0.66%，与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05），这表明VCR单独作用时，对SGC7901VCR细胞凋亡的诱导作用不明显，可能是由于细胞的多药耐药性导致其对VCR的敏感性降低。当加入不同浓度的苦参碱处理细胞后，细胞凋亡率随着苦参碱浓度的增加而升高。0.5mg/ml苦参碱处理组的凋亡率为8.24±1.45%，1mg/ml苦参碱处理组的凋亡率达到12.45±2.01%，与对照组相比，差异均具有统计学意义（P<0.05），说明苦参碱能够诱导SGC7901VCR细胞凋亡，且呈浓度依赖性。进一步分析苦参碱与VCR联合处理组的结果，0.5mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR联合处理组的凋亡率为18.24±3.01%，1mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR联合处理组的凋亡率高达27.23±4.12%。与单独使用VCR处理组相比，各联合处理组的凋亡率显著升高，差异具有高度统计学意义（P<0.01）；与相应浓度的苦参碱单独处理组相比，联合处理组的凋亡率也明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明苦参碱与VCR联合使用能够显著增强对SGC7901VCR细胞凋亡的诱导作用，两者具有协同效应，进一步验证了苦参碱对SGC7901VCR细胞耐药性的逆转作用可能与促进细胞凋亡有关。4.3苦参碱对多药耐药相关蛋白表达的影响蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测结果显示，在未加苦参碱处理的对照组中，SGC7901VCR细胞多药耐药相关蛋白（MRP）的相对表达量为1.00±0.05。当加入不同浓度的苦参碱处理细胞48小时后，MRP的表达水平发生明显变化。在0.5mg/ml苦参碱处理组中，MRP的相对表达量降低至0.75±0.06；1mg/ml苦参碱处理组，MRP相对表达量进一步下降至0.56±0.08。通过与对照组进行统计学分析，采用单因素方差分析（One-wayANOVA）及组间两两比较的LSD-t检验，不同浓度苦参碱处理组与对照组相比，差异均具有统计学意义（P<0.05），且不同浓度苦参碱处理组之间的差异也具有统计学意义（P<0.05）。以苦参碱浓度为横坐标，MRP相对表达量为纵坐标绘制趋势图（如图2所示），可以清晰地看出随着苦参碱浓度的升高，MRP的表达水平呈逐渐下降的趋势，表明苦参碱能够下调SGC7901VCR细胞中多药耐药相关蛋白MRP的表达，且这种下调作用具有浓度依赖性。[此处插入图2：不同浓度苦参碱对SGC7901VCR细胞MRP相对表达量的影响趋势图]MRP作为一种重要的多药耐药相关蛋白，在肿瘤细胞耐药过程中发挥着关键作用。它能够将细胞内的化疗药物转运到细胞外，降低细胞内药物浓度，从而使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性。本实验中，苦参碱能够下调MRP的表达，这可能是其逆转SGC7901VCR细胞耐药性的重要机制之一。通过降低MRP的表达，减少了化疗药物的外排，使得细胞内药物浓度得以维持在较高水平，增强了化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，进而提高了肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，逆转了肿瘤细胞的耐药性。五、结果分析与讨论5.1苦参碱逆转耐药的效果分析从实验结果来看，苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR的耐药性具有显著的逆转作用，且这种逆转作用呈现明显的剂量依赖性。在MTT比色法检测细胞增殖的实验中，随着苦参碱浓度从0.5mg/ml逐渐增加到2mg/ml，SGC7901VCR细胞的生长抑制率从(10.23±1.25)%稳步上升至(32.45±2.16)%，清晰地显示出苦参碱对细胞增殖的抑制效果随着浓度升高而增强。当苦参碱与长春新碱（VCR）联合使用时，这种剂量依赖性的逆转效果更加显著。在0.5μg/mlVCR单独处理时，细胞生长抑制率仅为(12.56±1.32)%，而0.5mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理，细胞生长抑制率跃升至(45.68±3.25)%；1mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理，生长抑制率进一步升高至(56.78±3.89)%；2mg/ml苦参碱与0.5μg/mlVCR联合处理时，细胞生长抑制率高达(78.56±4.56)%。这一系列数据表明，苦参碱能够显著增强VCR对耐药细胞的增殖抑制作用，且随着苦参碱浓度的增加，其逆转耐药的效果愈发明显。在细胞凋亡实验中，也观察到了类似的剂量依赖性。对照组SGC7901VCR细胞的凋亡率为2.57±0.47%，单独0.5μg/mlVCR处理后凋亡率为2.96±0.66%，变化不明显。而当加入苦参碱处理后，0.5mg/ml苦参碱处理组的凋亡率上升至8.24±1.45%，1mg/ml苦参碱处理组的凋亡率更是达到12.45±2.01%。苦参碱与VCR联合处理时，0.5mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR联合处理组的凋亡率为18.24±3.01%，1mg/ml苦参碱+0.5μg/mlVCR联合处理组的凋亡率高达27.23±4.12%。这些数据充分说明，苦参碱能够诱导SGC7901VCR细胞凋亡，且与VCR联合使用时，协同诱导细胞凋亡的作用显著增强，同样呈现出明显的剂量依赖性。多药耐药相关蛋白（MRP）表达的检测结果进一步证实了苦参碱逆转耐药的剂量依赖性。对照组中MRP的相对表达量为1.00±0.05，0.5mg/ml苦参碱处理组中MRP的相对表达量降低至0.75±0.06，1mg/ml苦参碱处理组中MRP相对表达量进一步下降至0.56±0.08。随着苦参碱浓度的升高，MRP的表达水平逐渐降低，表明苦参碱能够下调SGC7901VCR细胞中MRP的表达，且这种下调作用与苦参碱的浓度密切相关。综合以上三个实验结果，苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转作用具有明确的剂量依赖性。较低浓度的苦参碱就能对耐药细胞产生一定的影响，如抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调MRP表达等，但作用相对较弱；随着苦参碱浓度的逐步增加，其对耐药细胞的影响逐渐增强，在较高浓度下，能够显著抑制细胞增殖，大量诱导细胞凋亡，同时更有效地降低MRP的表达，从而更显著地逆转细胞的耐药性。这一结果与以往相关研究中关于天然药物逆转肿瘤耐药性的剂量依赖性趋势一致，进一步验证了苦参碱作为一种潜在的耐药逆转剂，在合理使用合适剂量的情况下，有望在临床胃癌治疗中发挥重要作用，提高化疗药物的疗效。5.2苦参碱诱导细胞凋亡机制探讨在本实验中，苦参碱能够显著诱导人胃癌细胞株SGC7901VCR凋亡，这一作用对于逆转耐药具有关键意义。从凋亡相关指标的变化来深入探讨其作用机制，有助于更全面地理解苦参碱的抗癌效果。细胞凋亡是一个受到严格调控的程序性细胞死亡过程，涉及一系列复杂的分子事件。在正常生理状态下，细胞凋亡对于维持机体组织和器官的正常功能、清除受损或异常细胞至关重要。在肿瘤发生发展过程中，肿瘤细胞往往通过多种机制逃避凋亡，从而实现无限增殖和转移。苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡，打破了肿瘤细胞的这种异常存活状态，为逆转耐药提供了重要的契机。从实验结果来看，苦参碱处理后，SGC7901VCR细胞的凋亡率显著增加。对照组细胞凋亡率仅为2.57±0.47%，而0.5mg/ml苦参碱处理组凋亡率上升至8.24±1.45%，1mg/ml苦参碱处理组凋亡率更是达到12.45±2.01%，呈现出明显的浓度依赖性。这表明苦参碱能够有效地激活SGC7901VCR细胞的凋亡程序，促使细胞走向死亡。线粒体途径在细胞凋亡中发挥着核心作用。当细胞受到凋亡刺激时，线粒体膜电位会发生去极化，导致线粒体膜通透性改变。这会使得线粒体释放出细胞色素C等凋亡相关因子到细胞质中。细胞色素C与凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）结合，形成凋亡小体，进而招募并激活Caspase-9。激活的Caspase-9又会激活下游的Caspase-3等执行凋亡的关键蛋白酶，最终导致细胞凋亡。有研究表明，苦参碱可能通过影响线粒体的功能，导致线粒体膜电位下降，从而激活线粒体途径的细胞凋亡。在对其他肿瘤细胞的研究中发现，苦参碱作用后，线粒体膜电位明显降低，细胞色素C释放增加，Caspase-3、Caspase-9的活性显著升高。虽然本实验未直接检测这些指标，但结合相关研究，可以推测苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡可能也是通过类似的线粒体途径实现的。Bcl-2蛋白家族是细胞凋亡的重要调控因子，包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等）。抗凋亡蛋白能够抑制线粒体途径的细胞凋亡，通过维持线粒体膜的稳定性，阻止细胞色素C等凋亡因子的释放。而促凋亡蛋白则可以促进线粒体膜的通透性改变，加速细胞凋亡的进程。在正常细胞中，Bcl-2蛋白家族成员之间保持着动态平衡，以维持细胞的正常存活。在肿瘤细胞中，这种平衡常常被打破，抗凋亡蛋白表达上调，促凋亡蛋白表达下调，使得肿瘤细胞对凋亡信号产生抵抗。有研究指出，苦参碱可以调节Bcl-2蛋白家族的表达，上调促凋亡蛋白Bax的表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，从而打破肿瘤细胞中Bcl-2蛋白家族的失衡状态，促进细胞凋亡。在对肝癌细胞的研究中，发现苦参碱处理后，Bax蛋白表达显著增加，Bcl-2蛋白表达明显降低，导致细胞凋亡率升高。虽然本实验未对SGC7901VCR细胞中Bcl-2蛋白家族的表达进行检测，但基于其他研究结果，可以合理推测苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡可能与调节Bcl-2蛋白家族表达有关。通过上调Bax、下调Bcl-2，苦参碱促使线粒体膜的稳定性下降，细胞色素C释放增加，激活Caspase级联反应，最终诱导细胞凋亡，实现对耐药细胞的杀伤，从而逆转耐药。此外，死亡受体途径也是细胞凋亡的重要途径之一。死亡受体是一类跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族，如Fas、TNFR1等。当死亡受体与其相应的配体结合后，会招募接头蛋白和Caspase-8，形成死亡诱导信号复合物（DISC）。在DISC中，Caspase-8被激活，进而激活下游的Caspase级联反应，导致细胞凋亡。虽然目前尚未有直接证据表明苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡是通过死亡受体途径实现的，但在对其他肿瘤细胞的研究中发现，苦参碱可能通过调节死亡受体及其配体的表达，影响死亡受体途径。例如，有研究报道苦参碱可以上调肿瘤细胞表面Fas的表达，增强Fas与FasL的结合，从而激活死亡受体途径，诱导细胞凋亡。因此，苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡可能也涉及死亡受体途径，但这还需要进一步的实验验证。综上所述，苦参碱诱导SGC7901VCR细胞凋亡可能是通过多种途径协同作用实现的。主要包括激活线粒体途径，通过影响线粒体膜电位、调节Bcl-2蛋白家族表达等方式，促使细胞色素C释放，激活Caspase级联反应。同时，可能也涉及死亡受体途径，但具体机制还需进一步深入研究。这些凋亡相关指标的变化共同作用，使得苦参碱能够有效地诱导耐药细胞凋亡，增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，从而逆转SGC7901VCR细胞的耐药性，为胃癌的治疗提供了新的思路和方法。5.3苦参碱对多药耐药相关蛋白的影响机制多药耐药相关蛋白（MRP）在肿瘤细胞多药耐药的形成过程中扮演着关键角色，其主要通过主动外排化疗药物，降低细胞内药物浓度，从而使肿瘤细胞产生耐药性。本实验通过蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测发现，苦参碱能够下调人胃癌细胞株SGC7901VCR中MRP的表达，且呈浓度依赖性。在对照组中，MRP的相对表达量为1.00±0.05，而在0.5mg/ml苦参碱处理组中，MRP的相对表达量降低至0.75±0.06；1mg/ml苦参碱处理组，MRP相对表达量进一步下降至0.56±0.08。苦参碱下调MRP表达的作用机制可能涉及多个层面。从基因转录水平来看，苦参碱可能影响了MRP基因的转录调控。基因的转录过程受到多种转录因子的精确调控，这些转录因子能够与基因启动子区域的特定序列结合，促进或抑制基因的转录。苦参碱可能通过干扰某些正性转录因子与MRP基因启动子区域的结合，或者激活某些负性转录因子，从而抑制MRP基因的转录，减少其mRNA的合成，最终导致MRP蛋白表达下降。例如，有研究表明，某些天然药物能够通过调节核因子κB（NF-κB）等转录因子的活性，影响耐药相关蛋白基因的转录。虽然本实验未对苦参碱作用下MRP基因转录调控相关的转录因子进行检测，但基于其他相关研究，可以推测苦参碱可能通过类似机制影响MRP基因的转录。在蛋白质翻译后修饰层面，苦参碱也可能对MRP产生影响。蛋白质翻译后修饰是指在蛋白质合成完成后，对其进行的一系列化学修饰，如磷酸化、糖基化等。这些修饰能够改变蛋白质的结构和功能，影响其稳定性、定位以及与其他分子的相互作用。有研究发现，某些蛋白质的磷酸化修饰能够调节其在细胞膜上的定位和药物转运活性。苦参碱可能通过抑制MRP的磷酸化修饰，改变其构象和功能，使其更容易被细胞内的蛋白酶体识别和降解，从而降低MRP的表达水平。另外，苦参碱还可能影响MRP的糖基化修饰，糖基化对于蛋白质的折叠、稳定性和功能具有重要作用。若苦参碱干扰了MRP的糖基化过程，可能导致MRP无法正确折叠，从而影响其正常功能和稳定性，使其在细胞内的含量减少。从细胞内信号通路角度分析，苦参碱可能通过调节某些关键信号通路来影响MRP的表达。丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程中发挥着重要作用，同时也与肿瘤的发生发展以及多药耐药密切相关。有研究表明，抑制MAPK信号通路可以下调耐药细胞中MRP的表达。苦参碱可能通过抑制MAPK信号通路中相关激酶的活性，阻断信号传导，进而抑制MRP的表达。磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路也是一条与肿瘤耐药相关的重要信号通路。PI3K被激活后，能够磷酸化下游的Akt，激活的Akt可以调节多种靶蛋白的活性，促进细胞增殖、存活和耐药。有研究发现，抑制PI3K/Akt信号通路能够降低MRP的表达。苦参碱可能通过抑制PI3K的活性，阻止Akt的磷酸化，从而阻断PI3K/Akt信号通路，抑制MRP的表达。虽然本实验未对这些信号通路进行深入研究，但已有研究为进一步探讨苦参碱影响MRP表达的信号通路机制提供了重要线索。综上所述，苦参碱能够下调人胃癌细胞株SGC7901VCR中多药耐药相关蛋白MRP的表达，其作用机制可能涉及基因转录水平的调控、蛋白质翻译后修饰的改变以及细胞内信号通路的调节等多个方面。这些机制的协同作用，使得MRP的表达降低，减少了化疗药物的外排，提高了细胞内药物浓度，增强了化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，从而逆转了SGC7901VCR细胞的耐药性。然而，具体的分子机制还需要进一步深入研究，以明确苦参碱作用的关键靶点和信号传导途径，为苦参碱在临床胃癌治疗中的应用提供更坚实的理论基础。5.4与其他研究结果的对比分析在肿瘤多药耐药逆转的研究领域，众多学者针对不同的药物和细胞模型展开了广泛的探索，为深入理解肿瘤耐药机制以及开发有效的逆转策略提供了丰富的研究成果。将本研究中苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转作用及机制与其他类似研究进行对比分析，有助于更全面地评估苦参碱的作用效果，明确其优势与特点，同时也能为进一步的研究提供新的思路和方向。在研究苦参碱对肿瘤细胞增殖的抑制作用方面，与其他针对不同肿瘤细胞的研究相比，本研究结果显示出一定的相似性和独特性。有研究探讨了苦参碱对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用，发现苦参碱对HepG2细胞的抑制作用呈现时间和剂量依赖性，随着作用时间的延长和药物浓度的增加，HepG2细胞存活率明显降低。在本研究中，苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR的增殖抑制作用同样具有剂量依赖性，随着苦参碱浓度从0.5mg/ml增加到2mg/ml，SGC7901VCR细胞的生长抑制率从(10.23±1.25)%逐步上升至(32.45±2.16)%。这表明苦参碱对不同类型的肿瘤细胞均具有增殖抑制作用，且这种作用方式在不同肿瘤细胞中具有一定的共性。然而，不同肿瘤细胞对苦参碱的敏感性可能存在差异。肝癌细胞与胃癌细胞在生物学特性、基因表达谱等方面存在差异，这些差异可能导致它们对苦参碱的反应不同。例如，在相同浓度的苦参碱作用下，肝癌细胞和胃癌细胞的生长抑制率可能有所不同，这提示在临床应用中，需要根据不同肿瘤类型和患者个体差异，优化苦参碱的使用剂量和方案。在细胞凋亡诱导方面，曾晖等人的研究发现，苦参碱具有诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用，1.0mg/mL苦参碱作用于SGC7901胃癌细胞株48h，光镜下可见大量的凋亡细胞，随着作用时间的延长，细胞凋亡率呈上升趋势。本研究中，通过流式细胞仪检测发现，苦参碱能够诱导人胃癌多药耐药细胞株SGC7901VCR凋亡，且凋亡率随着苦参碱浓度的增加而升高，0.5mg/ml苦参碱处理组的凋亡率为8.24±1.45%，1mg/ml苦参碱处理组的凋亡率达到12.45±2.01%。这与上述研究结果一致，进一步证实了苦参碱诱导胃癌细胞凋亡的作用。同时，本研究还发现苦参碱与长春新碱联合使用时，能够显著增强对SGC7901VCR细胞凋亡的诱导作用，这种协同效应在其他研究中尚未见报道，为苦参碱在胃癌治疗中的联合用药提供了新的依据。在多药耐药相关蛋白表达的影响方面，顾政一等人研究了贝母素乙对胃癌多药耐药细胞株SGC-7901/VCR的作用，发现贝母素乙能够降低P-糖蛋白（P-gp）的表达，从而提高细胞对阿霉素的敏感性。本研究则聚焦于多药耐药相关蛋白（MRP），发现苦参碱能够下调SGC7901VCR细胞中MRP的表达，且呈浓度依赖性。虽然两者作用的耐药蛋白不同，但都表明了天然药物可以通过调节耐药相关蛋白的表达来逆转肿瘤细胞的耐药性。不同的耐药蛋白在肿瘤细胞耐药机制中发挥着不同的作用，P-gp和MRP的结构和功能存在差异，它们在药物外排、细胞耐药过程中的具体作用机制也有所不同。苦参碱和贝母素乙分别作用于不同的耐药蛋白来实现耐药逆转，这提示在肿瘤耐药逆转研究中，可以针对不同的耐药蛋白靶点，开发多种类型的天然药物耐药逆转剂，为临床治疗提供更多的选择。综合来看，本研究中苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转作用在细胞增殖抑制、细胞凋亡诱导以及耐药相关蛋白表达调节等方面与其他相关研究既有相似之处，又具有自身的特点和优势。通过对比分析，不仅能够验证苦参碱在肿瘤耐药逆转中的有效性，还能为进一步深入研究苦参碱的作用机制、优化临床治疗方案提供有益的参考，推动肿瘤耐药逆转领域的研究不断发展。六、结论与展望6.1研究结论总结本研究通过一系列体外实验，深入探究了苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR耐药性的逆转作用及其机制，取得了以下重要成果：苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901VCR的耐药性具有显著的逆转效果，且呈剂量依赖性。在MTT比色法检测细胞增殖实验中，随着苦参碱浓度从0.5mg/ml逐渐增加至2mg/ml，SGC7901VCR细胞的生长抑制率从(10.23±1.25)%逐步提升至(32.45±2.16)%。当苦参碱与长春新碱（VCR）联合使用时，这种逆转效果更为显著。在0.5μg/mlVCR单独处理时，细胞生