生物制药菌种保藏技师考试试卷及答案

生物制药菌种保藏技师考试试卷及答案填空题（每题1分，共10分）1.常用短期保藏菌种的方法是______保藏法。2.冷冻干燥保藏需将菌种置于______环境快速冻结。3.菌种保藏的核心是保持______稳定。4.甘油管保藏中甘油终浓度约为______%。5.保藏培养基应选______碳源（减少代谢）。6.菌种需定期______以检查活性纯度。7.液氮保藏温度约为______℃。8.菌种污染途径包括空气、工具和______。9.纯度鉴定常用______分离法。10.斜面保藏期一般为______个月。单项选择题（每题2分，共20分）1.保藏期最长的方法是？A.斜面低温B.甘油管C.冷冻干燥D.液体石蜡2.冷冻干燥保护剂不包括？A.脱脂牛奶B.蔗糖C.甘油D.生理盐水3.菌种活化接种______培养基？A.选择B.基础C.富集D.鉴别4.液体石蜡作用是？A.提供营养B.隔绝空气C.杀菌D.调pH5.不属于菌种退化的是？A.产酶下降B.菌落改变C.污染杂菌D.生长减慢6.液氮保藏用______装菌种？A.普通试管B.安瓿瓶C.培养皿D.三角瓶7.菌种保藏原则不包括？A.保持活性B.防止变异C.避免污染D.增加代谢8.斜面低温保藏温度是？A.0-4℃B.4-10℃C.-20℃D.-80℃9.纯度检查常用______染色？A.革兰氏B.芽孢C.荚膜D.鞭毛10.无需保护剂的保藏方法是？A.冷冻干燥B.甘油管C.斜面低温D.液氮保藏多项选择题（每题2分，共20分）1.常用菌种保藏方法有？A.斜面低温B.冷冻干燥C.甘油管D.液体石蜡E.高温灭菌2.菌种退化表现为？A.产抗生素下降B.菌落不均C.发酵周期延长D.抗杂菌增强E.营养需求改变3.菌种活化步骤包括？A.取保藏菌种B.接种新鲜培养基C.培养D.镜检纯度E.直接丢弃4.冷冻干燥优点是？A.保藏期长B.操作简便C.活性稳定D.无需特殊设备E.适用广5.污染预防措施有？A.无菌操作B.培养基灭菌C.环境消毒D.用过期试剂E.戴手套6.甘油管保藏注意事项？A.甘油20-30%B.分装适量C.快速冷冻D.温度-20℃E.无需无菌操作7.斜面培养基制作步骤？A.配培养基B.分装试管C.灭菌D.摆斜面E.接种菌种8.保藏质量控制指标？A.活性B.纯度C.遗传稳定D.产率E.颜色9.菌种保护剂有？A.脱脂牛奶B.蔗糖C.海藻糖D.NaClE.葡萄糖10.液氮保藏适用菌种？A.细菌B.真菌C.病毒D.放线菌E.噬菌体判断题（每题2分，共20分）1.斜面保藏期比冷冻干燥长。（×）2.保藏菌种需处于代谢活跃状态。（×）3.液体石蜡需灭菌后使用。（√）4.甘油管保藏温度为-80℃。（×）5.活化有杂菌仍可使用菌种。（×）6.冷冻干燥无需保护剂。（×）7.斜面长度为试管1/2-2/3。（√）8.污染可通过过滤除菌去除。（×）9.液氮保藏期可达10年以上。（√）10.保藏关键是防变异污染。（√）简答题（每题5分，共20分）1.简述斜面低温保藏操作步骤。答案：①配适宜斜面培养基，分装试管灭菌；②摆斜面（1/2-2/3长度），冷却凝固；③无菌接种菌种，适宜温度培养至菌落成熟；④棉塞外包牛皮纸，0-4℃冰箱保藏；⑤每3-6个月活化转管，检查活性纯度。注意无菌操作，培养基营养不宜过丰富。2.什么是菌种退化？如何防止？答案：菌种退化指保藏/传代中遗传性状改变，生产性能下降。防止措施：①控制传代次数；②选冷冻干燥/液氮保藏；③定期纯化去除退化菌落；④优化保藏条件（低温、隔氧）；⑤单菌落传代。3.冷冻干燥保藏原理及优点？答案：原理：菌种+保护剂混合，低温快速冻结，真空升华水分，使菌种休眠。优点：①保藏期长（数年至数十年）；②活性稳定，变异少；③适用广（细菌、真菌等）；④便于运输。缺点：需冷冻干燥机。4.菌种纯度检查方法？答案：①平板划线：观察菌落形态是否一致；②镜检：革兰氏染色看细胞形态是否均匀；③生化鉴定：检测特征反应（如糖发酵）；④分子鉴定：PCR扩增16SrRNA/ITS序列比对。有杂菌则重新纯化。讨论题（每题5分，共10分）1.比较斜面低温与甘油管保藏的适用场景及优缺点。答案：①适用：斜面适短期（3-6个月）、频繁使用菌种；甘油管适中期（1-2年）、细菌。②优点：斜面操作简便、成本低；甘油管保藏期长、活性稳。③缺点：斜面保藏期短、易退化；甘油管需加甘油、需低温冰箱。选择需结合保藏周期和菌种类型。2.菌种保藏污染的原因及解决措施。答案：原因：①无菌操作不规范；②培养基灭菌不彻底；③容器密封差；④环境杂菌入侵。措施：①严格无菌操作（超净台、无菌服）；②培养基121℃灭菌15-30min；③容器密封完好（棉塞+石蜡）；④定期消毒环境；⑤活化时镜检，污染则废弃。答案汇总填空题1.斜面低温2.低温（或-20℃以下）3.遗传性状4.20-305.缓慢利用（或非速效）6.活化（或传代）7.-1968.操作人员（或环境）9.平板划线（或分离纯化）10.3-6单项选择题1.C2.D3.B4.B5.C6.B7.D8.A9.A10.C多项选