药物的鉴别试验专家讲座

第二章药品判别试验药分教研室1第1页一、概述

药品判别试验（identificationtest)是依据药品分子结构、理化性质,采取化学、物理化学或生物学方法来证实已知药品真伪。而不是对未知物进行定性分析。是药检工作首要任务，杂质检验、含量测定前提。2第2页二、判别试验项目性状普通判别试验专属判别试验3第3页性状外观：感观要求，普通性描述。溶解度：反应了在某种溶剂中溶解性能。物理常数:评价药品质量主要指标，反应药品纯净程度。熔点、

比旋度、吸收系数、凝点、折光率相对密度、馏程、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值等4第4页外观：指药品外表感观和色泽，包含聚集状态、晶型、色泽以及臭、味如：维生素B1“本品为白色结晶或结晶粉末；

有微弱特臭，味苦；

干燥品在空气中迅即吸收约4%水分”（色泽）（聚集状态）（臭）（味）5第5页溶解度试验法：①供试品准确称取研成细粉

②在25℃±2℃，加溶剂

③每隔5min振摇30s无目视可见溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解

极易溶解系指溶质1g(ml)能在溶剂不到1ml中溶解；易溶系指溶质1g(ml)能在溶剂1～不到10ml中溶解；溶解系指溶质1g(ml)能在溶剂10～不到30ml中溶解；略溶系指溶质1g(ml)能在溶剂30～不到100ml中溶解；微溶系指溶质1g(ml)能在溶剂100～不到1000ml中溶解;极微溶解系指溶质1g(ml)能在溶剂1000～不到10000ml中溶解；几乎不溶或不溶系指溶质1g(ml)在溶剂10000ml中不能完全溶解。6第6页物理常数1、熔点1）定义：Ch.P要求,熔点系指一个物质由固体熔化成液体温度、熔融同时分解温度，或在熔化时自初熔至全熔一段温度。如：雌二醇：175～180℃醋酸地塞米松：223～233℃样品发毛收缩液滴（初熔）澄清（全熔）7第7页

2）测定方法分三法：第一法：测定易粉碎固体药品第二法：测定不易粉碎固体药品第三法：测定凡士林或其它类似物质（详见：Ch.P年版二部附录ⅥC

）8第8页2、比旋度偏振光透过长1dm并每1ml中含有旋光性物质1g溶液，在一定波长与温度下测得旋光度称为比旋度。本药典系用钠光谱D线(589.3nm)测定旋光度，除另有要求外，测定管长度为1dm，测定温度为20℃。偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以“＋”符号表示；使偏振光向左旋转者(反时针方向)为左旋，以“－”符号表示Ch.P年版二部附录ⅥE9第9页3、吸收系数

吸光物质在给定波长、溶剂和温度等条件下，单位浓度、单位液层厚度时吸收度

溶液浓度液层厚度溶液浓度液层厚度摩尔吸收系数(ε)百分吸收系数10第10页含有相同结构化合物可能有相同λmax，但吸收系数有差异11第11页普通判别试验

（generalidentificationtest）是指依据某一类药品共同化学结构或相同理化特征，来判别药品真伪。有机药品--------官能团无机药品--------阴离子、阳离子普通判别试验用于证实药品是哪一类，要深入证实是哪一个药品，还需要结合专属判别试验

12第12页普通判别试验

（generalidentificationtest）

Ch.P附录Ⅲ中有：有机氟类、有机酸盐类（水杨酸盐）、芳香第一胺类、托烷生物碱类、丙二酰脲类无机金属类（Na+,K+,Ca2+,Ba2+,Li+,Fe3+,Al3+,Zn2+,Cu2+,Ag+,Hg2+等）无酸盐类(Cl-、

SO42-、NO3-)13第13页1.有机氟化物有机氟氧瓶燃烧无机氟离子pH4.3

茜素氟蓝硝酸亚铈蓝紫色络合物+F-+Ce3+pH4.3碱液吸收14第14页2.有机酸盐(1)水杨酸盐水杨酸+FeCl3中性条件弱酸性条件红色配位化合物紫色配位化合物6+4FeCl3+12HCl水杨酸盐+稀盐酸→水杨酸（白色沉淀）溶于醋酸铵15第15页(2)酒石酸盐供试品溶液（中性）+氨制硝酸银

银镜水浴中HO—CH—COOHHO—CH—COOH+2Ag(NH3)2OHHO—C—COONH4HO—C—COONH42Ag++2NH3+2H2O

水浴中16第16页3.芳香第一胺类供试品+

稀盐酸0.1mol/L亚硝酸钠碱性-萘酚试液橙黄色到猩红色沉淀N2+Cl-.+NaNO2+2HCl+NaCl+2H2ON2+Cl-.++NaOH+NaCl+2H2O17第17页

4.托烷生物碱类这类生物碱中含有莨菪酸结构，有Vitali反应,显紫色。

水解3HNO3三硝基衍生物KOH(C2H5OH)KOH深紫色莨菪酸18第18页5.无机金属盐（Na,K,Ca,NH4+)

焰色反应：Na显鲜黄色；K显紫色；Ca显砖红色

铵盐：

供试品+NaOH

氨气使湿润红色石蕊试纸变蓝使硝酸亚汞试液湿润滤纸显黑色19第19页6.无机酸根氯化物：Cl-+Ag+AgCl白色乳状

Cl-+MnO2Mn2++Cl2硫酸盐：SO42-+Ba2+BaSO4白色

SO42-+Pb2+PbSO4白色加盐酸，无白色沉淀硝酸盐：Cu+NO3-Cu(NO3)2+2NO2（红棕色）Fe2++NO3-Fe3++NO区分NO3-、NO2-H2SO4使湿润KI_淀粉试纸变蓝

KMnO4褪色NO2-不褪色NO3-H2SO4H2SO420第20页专属判别试验

（specificidentificationtest）是证实某一个药品依据。依据一类药品中每一个药品化学结构差异理化特征，选取一些特有灵敏定性反应，来判别药品真伪。普通判别试验依据某类药品共同特点，区分不一样类药品。专属判别试验在普通判别试验基础上，利用各种药品化学结构差异，判别各个药品单体。21第21页共性丙二酰脲-CONHCONHCO-

可与一些金属离子（Ag+、Cu2+、Hg2+等）反应呈色或产生沉淀巴比妥类药品R+2AgNO3+2HNO3普通判别试验22第22页与Pb2+反应生成黑色PbS甲醛硫酸反应碘取代反应专属判别试验

硫喷妥钠司可巴比妥苯巴比妥23第23页二、判别方法（一）化学判别法（二）光谱判别法（三）X射线衍射法（四）色谱判别法（五）生物法24第24页（一）化学判别法

供试品加入适当试剂，在一定条件下，发生化学反应，经过产生可观察到显著现象，来判别药品真伪方法。

化学判别法特点

操作简便、反应快速、试验成本低、应用广

但专属性比仪器分析法差

分为：

（1）呈色反应判别法

（2）沉淀生成反应判别法

（3）荧光反应判别法

（4）气体生成反应判别法

（5）试剂褪色判别法

25第25页（一）、化学判别法

（1）呈色反应判别法

供试品加入适当试剂，在一定条件下，反应生成有色产物

判别方法①三氯化铁呈色反应（酚羟基）②有机氟化物茜素氟蓝法③芳香第一胺类重氮化-偶合反应④托烷生物碱类-Vitali反应⑤肾上腺皮质激素类四氮唑⑥含羰基结构苯肼反应⑦氨基酸及氨基糖苷类茚三酮呈色反应⑧双缩脲反应26第26页③芳香第一胺类芳伯胺+

稀盐酸0.1mol/L亚硝酸钠碱性-萘酚试液橙黄色到猩红色重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚红色27第27页①三氯化铁呈色反应（酚羟基）蓝紫色对乙酰氨基酚

（一）化学判别法

（1）呈色反应判别法

②有机氟化物氧瓶燃烧无机氟离子pH4.3

茜素氟蓝硝酸亚铈碱液吸收蓝紫色络合物有机氟28第28页④托烷生物碱类-Vitali反应这类生物碱中含有莨菪酸结构，有Vitali反应,显紫色。

水解3HNO3三硝基衍生物KOH(C2H5OH)KOH深紫色29第29页⑤肾上腺皮质激素类四氮唑+2e[H]四氮唑甲臜

皮质激素含有还原性，能将四氮唑还原为有色甲臜

30第30页⑥含羰基结构苯肼反应++H2O苯肼苯腙31第31页⑦氨基酸及氨基糖苷类茚三酮呈色反应

左旋多巴+CO2+3H2O+比如：32第32页⑧双缩脲反应（开环分解）蓝紫色33第33页（2）沉淀生成反应判别法

供试品加入适当试剂，在一定条件下，反应生成沉淀

（一）化学判别法③还原性基团银镜反应①丙二酰脲类硝酸银反应②氯化物银盐沉淀⑦含氮杂环类与生物碱沉淀剂（碘化铋钾、硅钨酸）沉淀反应⑤苯甲酸盐类三氯化铁反应④生成氧化亚铜红色沉淀反应⑥与重金属离子沉淀反应⑧磺胺类药品铜盐反应34第34页丙二酰脲类硝酸银反应+2AgNO3+2HNO3Cl-+Ag+AgCl氯化物银盐沉淀35第35页含有还原性基团药品——银镜反应+AgNO3+NH3·H2OAg异烟肼葡萄糖+碱性酒石酸铜试液（Fehling试液）氧化亚铜+葡萄糖酸36第36页苯甲酸盐类三氯化铁反应+3FeCl3+OH-+7NaCl+2Cl-赭色沉淀37第37页利多卡因与重金属离子反应2+CoCl2H+亮绿色细小钴盐沉淀38第38页含氮杂环类生物碱沉淀反应苯并二氮杂类+BiI3·橙红色沉淀

氯氮氟西泮氯硝西泮+12W03·Si02灰白色沉淀4KIC2H5OH白色C2H5OH黄色阿托品+HgCl2东莨菪碱+HgCl2托烷类生物碱39第39页吡啶环类2+CuSO4+2NH4SCNCu(SCN)2+(NH4)2SO4草绿色配合物沉淀40第40页磺胺类药品成铜盐反应

磺酰氨基上活泼氢原子，可被一些金属离子取代，生成有色金属盐沉淀。磺胺类药品钠盐溶液，加硫酸铜试液生成不一样颜色铜盐沉淀，可供区分及判别。41第41页

(3)荧光反应判别法

①药品本身在可见光下发射荧光

如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光

②药品与适当试剂反应后发射荧光

如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿色

VB1硫色素（蓝色荧光）碱性K3Fe(CN)6（一）化学判别法42第42页（4）气体生成反应判别法

①大多数伯胺（铵）类药品、酰尿类以及一些酰胺类药品，可经强碱处理后加热产生氨气。

红色石蕊试纸变蓝

硝酸亚汞试液湿润试纸显黑色（一）化学判别法43第43页②化学结构含硫药品，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体硫鸟嘌呤●7H2O强酸∆H2S（臭鸡蛋气味）使醋酸铅试纸变黑44第44页③含碘有机药品经直火加热可生成紫色碘蒸汽④含醋酸酯和乙酰胺类药品，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯香味。45第45页（一）化学判别法（5）试剂退色维生素C与二氯靛酚反应46第46页（6）测定生成物熔点法

制备衍生物测定熔点法药品＋试剂新化合物有一定mp;药品酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时间，应用较少。（一）化学判别法47第47页紫外光谱（UV）红外光谱（IR）近红外光谱法（NIRS）原子吸收法（AAS）核磁共振法（NMR）二、判别方法（二）光谱判别法48第48页1、紫外光谱判别法

紫外光谱法操作简便、快速。

用作判别专属性远不如红外光谱法。

紫外光谱相同物质不一定是同一个物质。（二）光谱判别法49第49页紫外光谱法常有方法测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；要求浓度供试液在最大吸收波长测定吸收度；

要求吸收波长和吸收系数法；要求吸收波长和吸光度比值法；

经化学处理后,测定其反应产物吸收光谱特征以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以提升专属性

50第50页①测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长乙胺嘧啶供试品在0.1mol/L盐酸介质中紫外吸收在272nm处为峰,216nm处为谷。51第51页②要求吸收波长和吸光度比值法两性霉素在362nm、381nm、405nm波优点有最大吸收.要求362nm/381nm处吸光度比值小于0.6

381nm/405nm波长比值小于0.9VB12361nm/278nm1.70～1.88361nm/550nm3.15～3.45

52第52页

己稀雌酚注射液用供试品溶液250-450nm波长吸收光谱与对照品是否一致判别。③与对照品比较,对比吸收光谱一致性53第53页

Ch.P示例一盐酸布比卡因判别试验0.40mg/mlλmax:263nm、271nmA:0.53~0.58;0.43~0.48要求一定浓度供试液在最大吸收波优点吸光度示例二地蒽酚判别试验λmax:257nm、289nm、356nmA257/A289=1.06~1.10A356/A289=0.90~0.94要求最大吸收波长和吸光度比值法54第54页示例三氯贝丁酯判别试验

0.10mg/mlλmax:280nm、288nm

10μg/mlλmax:226nm要求一定浓度下供试液最大吸收波长示例二专属性相对很好55第55页USP采取对照品法

供试药与其对照品按同一方法处理，在一样条件下紫外光谱图一致。BP要求一定波长范围内，仅有一个最大或最小吸收JP与Ch.P相同

各国紫外判别法比较56第56页2、红外分析法

IR光谱法是有机药品分子振动-转动光谱，能反应药品分子

结构特点，分子中每个基团普通都由对应吸收峰，且特征性强，（除光学异构体及长链烷烃同系物外）几乎没有两种化合物含有完

全相同红外吸收光谱，即红外吸收光谱含有“指纹性”，被广泛地应用于化合物判别。

特点

专属性强、准确度高特点，应用广（固、液、气）

主要用于组分单一、结构明确原料药以及结构相近同类物质。

（二）光谱判别法57第57页2、红外分析法

标准图谱法：Ch.P要求按指定条件绘制供试品红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中对应标准图谱对比，假如峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一个药品。

对照品法：将供试品与对照品在一样条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致方法。可消除不一样仪器和操作条件造成误差。58第58页试样制备方法压片法供试品（约1mg)+干燥KBr/KCl(约200mg)研磨均匀（玛瑙研钵）

置压膜中真空加压至0.8-1GPa2-3min均匀透明片无显著颗粒供试片同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干扰59第59页糊法供试品（约5mg）,滴加少许液体石蜡或其它液体制成糊状物玛瑙研钵取适量夹于两个KBr片（150mg/片）之间供试片KBr（约300mg）制成空白片，作背景校正60第60页

膜法

供试品多为高分子聚合物，可做成液膜铺展于适宜盐片上。

溶液法

液体供试品（或溶于适宜溶剂内），制成1%-10%溶液，置于0.1-0.5mm厚液体池中，即可测得。61第61页应用光谱图比对时应注意问题1）固体药品应按要求方法进行预处理2）盐酸盐类药品制片时普通使用KCl做基质3）注意仪器本身影响可与标准聚苯乙烯薄膜比对，校正4）不适用多组分、多晶形药品5）以新版《药品红外光谱集》为准6）制剂判别，应消除辅料干扰，提取分离后再制片7）Ch.P4000-400cm-1

BP-400cm-1

62第62页

各国红外光谱法比较Ch.P采取标准图谱对照法BP采取标准图谱对照法、对照品法USP采取对照品法JP要求条件下测定一定波优点特征吸收峰。63第63页（二）光谱判别法

3、近红外光谱法

近红外谱区:12800-4000cm-1

750-2500nm经过测定被测物在近红外区特征光谱，进行定性、定量分析一个分析技术。特点1、取得信息多:密度、粒子尺寸、直径、大分子聚合度等2、样品无需预处理，可直接装入样品池测定3、分析速度要快扫描：5次/s，普通扫描50次分析一次2-3min4、灵敏度高，应用范围广64第64页近红外分析普通程序（1）参考库建立

统计一定数量批次物质谱图（不一样生产企业、物理形态、粒度差异）信息。（2）数据预处理

对各谱图进行数学处理，建立分析模型（3）数据评定

将待测物谱图与谱库中单一或平均参考谱图比较。（4）数据库验证

专属性、耐用性验证65第65页板蓝根注射液和川芎注射液近红外图谱三个产地异穗卷柏近红外谱图66第66页4、原子吸收法利用原子蒸气能够吸收由该元素作为阴极空心阴极灯发出特征谱线特征，依据供试溶液在特征谱线处最大吸收和特征谱线强度减弱程度进行定量、定性分析。

主要用于元素分析

5、核磁共振经过测定供试品指定基团上质子峰化学位移和偶合常数进行判别。（二）光谱判别法

67第67页

（三）X射线粉末衍射法X射线波长0.01-1nm电磁波利用晶体对X射线衍射效应来进行定性、定量分析方法。用于结晶物质判别，供试品与参考品X衍射图比较衍射角Ө面间距d相对强度68第68页（三）X射线粉末衍射法影响原因：药品本身特征入射X射线波长及强度供试品结晶度、密度、体积室验温度研磨压力等69第69页（四）色谱判别法

利用不一样物质在不一样色谱条件下，产生各自特征色谱行为（保留时间，比移值）进行判别试验。常采取对比法与对照品、已知药品，在相同条件下进行色谱分离并比较。TLCHPLCGC70第70页（四）色谱判别法1、薄层色谱判别法(TLC)

薄层色谱法含有专属性强、操作简便、试验成本低等优点。在判别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广一个方法。Ch.p（）一部，1523项经过Rf值，斑点颜色进行定性。71第71页72第72页（四）色谱判别法2、HPLC、GC色谱分析法

供试品和对照色谱峰保留时间一致。在判别试验中，通常含量测定同时用于判别一个方法。73第73页（四）色谱判别法

3、质谱判别法在高真空状态下将被测物离子化，按离子质荷比大小分离，经过离子谱峰强度及相互关系，提供分子结构相关信息，从而进行定性分析。离子准确质量数化合物分子式碎片离子化合物结构74第74页色谱谱判别法小结

适合用于复杂环境下药品有效成份及杂质判别,含有分离、分析同时进行特点.高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)——供试品和对照品色谱峰保留时间一致.薄层扫描法(TLC)——对照品比较法，供试品斑点与对照品Rf值及斑点颜色应一致.色谱法（HPLCGCTLC)75第75页（五）生物学法

是利用微生物或试验动物判别法胰岛素生物检定法

肝素生物检定法76第76页药品判别方法新动向1、仪器方法用于药品判别数量大大增加，USP、BP仪器判别法：化学判别法（2:1）BP：主要用TLCUSP：HPLC2、制剂广泛采取IR法判别77第77页例1.维生素C判别（1）药典中要求：维生素C比旋度应为+20.5～+21.5°

(2)在维生素C分子中含有烯二醇结构，这个结构含有很强还原性，能够和一些氧化剂作用。样品（0.2g）10ml水5ml黑色Ag↓AgNO3（3）红外光谱与对照图谱一致。二、判别方法78第78页三、判别试验条件（一）溶液浓度

溶液浓度主要指被判别物质浓度，其大小影响结果判断。（如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中λmax,A,E1%1cm)（二）溶液温度

温度过高可使产物分解，造成颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察不到结果，故试验中应注意温度控制。