第31讲 基因工程

选修三现代生物科技专题

第31讲基因工程

内容考情——知考向核心素养——提考能

1.概述基因工程的诞生

2.阐明基因工程的原理及技术(含生命观念基因结构决定其功能

PCR技术)

3.举例说明基因工程在农牧、食品

建立基因工程的操作

内容要及医药等行业的应用科学思维

流程模型

求4.概述蛋白质工程的原理及应用

5.活动：DNA的粗提取与鉴定

探究基因工程在生产

6.活动：利用PCR扩增DNA片段

科学探究上的应用和蛋白质工

并完成电泳鉴定，或运用软件进

程的应用

行虚拟PCR实验

2020•全国卷111(38)、2019•全国卷基因工程和蛋白质工

近三年

I(38)、2018•全国卷I(38)、社会责任程在生产实践上的应

考情

2018•全国卷H(38)用

考点一基因工程的操作工具

考点.自主梳理1_____________妲蝌融肛.

1.基因工程的概念

原理是基因重组

(1)手段：按照人们的愿望,进行严格的设计，通过体外DNA重组利转基因等技

术，赋予生物以新的遗传特性。

(2)目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

(3)7K平：分子水平。

与杂交育种相比与诱变育种相比

(4)优点：克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传性状。

2.基因工程的基本工具

3种工具，其中有2种工具酶

(1)限制性核酸内切的

限制酶是一类酶，而不是一种酹

<5分一主要存在于原核生物中

II伊别双链DNA分子的某种特定脱氧核计酸序列.

(@)—并使衽•条链中特定郃位的两个脱钝核许酸之间

的磷酸二断键断开

分获小」一种限制酩只能识别一种特定的脱■核一酸序列.

何马并从能在特定的位点上切割DNA分子

\

末.的殛)一♦性末端和平末鳍

提醒①将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性

末端或平末端。

②限制酶在识别序列中心轴线两侧切开形成的是黏性末端，而在识别序列中心轴

线处切开形成的是平末端。

(2)DNA连接酶

E・C"〃DNA连接战［种类)TQNA连接酣

大肠杆菌［来源)♦T,噬菌体

只缝合翦性末端fife]整件末端和平末端都可缝合

将双链DNA片段缝合过来.恢复被限制仰切开

的两个脱铳核甘酸之间的磷酸二曲彼

⑶载体

之人噬菌体的衍生物、动植物病毒等

।-能在受体细胞中复制并典业

/V4|，/一个或多个限制网切割位点.便广外源DNA

插入

L具仃特殊的标k!基因.便于DNA的鉴定和筛选

携带外源DNA片段进入受体细胞

提醒与膜载体的区别：基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受

体细胞内，并利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制；膜载体是蛋白质，

与细胞膜的通透性有关。

»深挖教材

LDNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？

选修③P6“寻根问底”

提示不是。DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的

脱氧核昔酸连接到已有的DNA片段上。

2.天然的DNA分子是否可以直接用做基因工程载体？为什么？

选修③P7”思考与探究”

提示不可以。具有能自我复制、有一个或多个限制酶切割位点、有标记基因及

对受体细胞无害等特点的DNA分子才可以直接用作基因工程的载体。实际上天

然的DNA分子一般不完全具备上述条件，往往需要进行人工改造后才能用于基

因工程操作。

重点-疑难突破突破疑泄提考能.

1.基因工程概念的内涵

基因拼接技术或DNA重组技术

操作环境生物体外

操作对象基因

概

念挫鱼叱DNA分子水平

剖

析目的基冈的获取一基因表达载体的构建一

生*将目的基因导入受体细胞一目的基因的检

漏与鉴定

版本原理基因重组

组建-产生人类需要的基因产物或生物类型

2.基因工程的理论基础

:①基因是控制生物性状的遗传

:物质的结构和功能单位

外源基闪在受体理论

；②遗传信息的传递都遵语中心

细胞内表达基础:法则

:③生物界共用一套遗传密码

复/亚组DNA：、

转求1翻译蛋白质

RNA

叫1号体+目的基以(性状)

：①DMA的基本组成华位都是四

：种脱Z核甘酸

基因拼接曙:②DNA分子怖遵循麻基互补配

：对原则

:③双链DNA分子的空间结构都

：是规则的双螺旋结构

I

3限.制酶的特点与使用

⑴限制酶具有特异性，即一种限制酶只能识别特定的核昔酸序列，并在特定的位

点上进行切割；限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该

酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

(2)在获取目的基因和切割或体时通常用同一种限制酶，以获得相同的末端。但如

果用两种不同限制酶切割后形成的末端相同，在DNA连接酶的作川下目的基因

与载体也可以连接起来。

(3)为了防止载体或目的基因的末端自己连接即所谓“环化”，可用不同的限制酶

分别处理含目的基因的DNA和载体，使目的基因两侧及载体上各自具有两个不

同的末端。

4标.记基因的作用

标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞：

在

目的基因含有

氨

节声

进入受

毒

素的

培

养基

上

培养

含有抗氨节只有含有载体.

声街索展因并且或体上的

的质粒有的大肠杆菌中抗性基因表达

有教体进入,有的大质杆菌才

的没有载体进入能存活并增殖

5.与DNA有关的几种酶的比较

：DNAift：:作用底物!:作用部位:;作用结班

品,斑彘V

将DNA切成两个或

二酯健多个片段

DNA连DNA分瞬酸将两个DNA,中段连接

［接酶

子片段二循健为一个DNA分子

1以DNA埴链为模板.

DNA聚脱辄核磷酸将小个脱乳核苜酸依

合酶

1“昔酸二施健次连接到另•条短的

单链末端

将双铳分子局需

［解旋前'JDNAM基对中DNA

分子的氢桃解旋为单链,形成两

1条长链

DNA水DNA磷酸将片段水解为单

|解命DNA

分子二酯健个脱氧核甘酸

命题-规律探究感悟商考找规律

考向1结合基因工程所需工具酶分析，考查科学实践中的探究能力

1.(2016•全国卷HI,40)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRI、BamHI

和3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示

意图(载体上的EcoRI、3AI的切点是唯一的)。

III

-----GAATTC-----------GGAI'CC-----------GATC------

—CTTAAG——一CCTAGG————CTAG——

f图/1

启动子EcoRI

S”“3AI

终止子

抗生素抗性基因

O图(b)

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

(1)经BamHI酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产

物连接，理由是o

⑵若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,

如图⑹所示，这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有

，不能表达的原因是。

目的基因

目的

基因

H的

丙基因

图(c)

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和

,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是

____________________________________________________O

答案（l）SZ〃3Al两种能切割后产生的片段具有相同的黏性末端（2）甲、丙

甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中FI的基因插入在终止子的下游，二者的

R的基因均不能被转录（3）E-co〃DNA连接醐T4DNA连接酹T4DNA连接前

解析（1）由于限制酶San3AI与BamWI切割DNA后形成的黏性末端相同，所

以经&〃〃HI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被3AI酶切后的产

物连接。（2）在基因表达载体中，启动子应位于目的基因的首端，终止子应位于目

的基因的尾端，这样目的基因才能表达。图中甲、丙均不符合，所以不能表达目

的基因的产物。（3）常见的DNA连接酶有Eco〃DNA连接酶和T』DNA连接酶，其

中既能连接黏性末端又能连接平末端的是T4DNA连接褥。

题后反思》限制酶的选择技巧

（1）根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类。

PstISmnIpsi]

①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择八1I。

②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择。

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目

的基因和质粒，如图甲也可选择用PstI和EcoRI两种限制酶（但要确保质粒上也

有这两种酶的切割位点）。

（2）根据质粒的特点确定限制酹的种类。

①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致，以确保产生相同的黏性末端。

②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结

构，如图乙中限制酶会破坏标记基因；如果所选酶的切割位点不是一个，

则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的

片段进入受体细胞后不能自主复制。

考向2结合载体的作用及特点，考查科学思维的能力

2.（2021・河南百校联盟）如图所示为pBR322质粒，其中amp「（氨茉青霉素抗性基因）

和ted（四环素抗性基因）为标记基因，ori为复制原点，其他均为限制的及其识别位

点，并且每种限制酶都只有一个。pBR322质粒是基因工程较常用的运载体。回

答卜.列相关问题：

（1）制备重组质粒，需要限制酶和酶。如制备重组质粒时，使用/"I切

割该质粒，则检测目的基因是否导入受体细胞，需要在培养基中添加。

⑵该质粒中的BamWI识别的核甘酸序列及切割位点为一G'GATCC—,而

3AI识别的核苜酸序列只有4个碱基。若BamWI和3AI分别切割DNA

所形成的DNA片段能拼接成一条DNA链，则SaiBA「识别的核苜酸序列及切割

位点为。该拼接在一起的DNA片段，能否被HI识别？o

⑶与图示质粒相比，完整的重组质粒中还应有等三种特殊的

DNA片段。将重组质粒导入动、植物细胞的方法分别为

和,如受体细胞为大

肠杆菌，则该菌经钙离子处理后，将具备的特性。

答案（l）DNA连接四环素

（2）—4GATC—不一定能

（3）启动子、终止子和目的基因显微注射法农杆菌转化法、基因枪法、花粉管

通道法将外界DNA吸入细胞

考点二基因工程的基本操作程序

考点・自主梳理预习教材夯基础

1.目的基因的获取

（1）从基因文库中获取目的基因

:CDNA文序：;基因组文库:

基因某种生物发育的某某种生物体内

阵

文个时期@mRNA全部DNA

构

的一-恤限制福

及

建

[cDNA]［许多片段|

的

目

与载体［连接导］

因

基与矍隹连接导入

分|受体内群体）

的1受体广由群体1

离

分出|分禺

他的思因］他的展M

（2）人工合成目的基因

如果基因比较小，核甘酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人

工合成。

①化学合成法

用4种脱氧核昔酸

人工合成目的基因

居因的脱口

核件限序列

②反转录法

分离出供体细

胞的mRNA

⑶利用PCR技术扩增目的基因

由、APCR全称为多聚的链式反应,是一项在生物体外

复制特定DNA片段的核酸分成技术

J

>DNA双链复制

模板、四种脱氧核件酸、引物.热饯定DNA

J■一案合■醯（7*“</醉）等：，•》美4人加TP号大加人的

"社》以指数形式扩增,获得的目的基因数址约为2・（n为

心夕》扩增循环的次数）

国>可在短时间内衣生扩增II的旗因

2.基因表达载体的构建一核心

(1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代，同时使目

的基因能够表达和发挥作月。

⑵组成

提醒启动子工起始密码子终止子W终止密码子

①启动子是位于基因首端的一段特殊序列，它是RNA聚合酶识别、结合的部位。

终止子是位于基因尾端的一段特殊序列，作用是使转录过程停止。

②起始密码子和终止密码子均位于mRNAL,分别控制翻译过程的启动和终也。

(3)构建过程

含目的基因

载体(质粒)

的片段

ODNA

用同种限制酶切割

一目的基因

财,连接鼻鸾f应播入方学子

，控且典型般唾数与外立子上间

重组质粒

,蒋力力两两和正，时逐博注耳发.合力说三计《

沈：i的去@与8的第0的逐建,8的基61与京拉的瓦博、

长拄与余缜的正玲，,,送力《保家林

3.将目的基因导入受体细胞

只有该步骤没涉及到碱基互补配对现象

近用孑双子叶，植物细胞：

位技川林子植-------

（常用方法）♦沙，卓子叶极农杆菌转化法

]方用泰国怆法1

（受体细胞）.体细胞

构建表达就体八转入&,、

T-DNh农杆函黝J

‘质粒_携带外源禽黑黑

基因的DNA粒的农杆菌

将目的基因插入

染色体的DNA中

培养再生导入植

成植株物细胞

表现出新性状的植株植物细胞

:动物细胞：：微生物细胞：

------..V-

（常用方法I显微注射法性高，可避受娄细帼转化法

]以使外源

（受体细胞I受精卵去61及相应原核细胞

.▼娘织仲胞中袅达

质粒Ca?♦处理细胞一

感受态细胞一女

组表达我体与感

/显微受态细胞混合一

牌-0-0注射感受态细胞吸收

性从代孕受精卵DNA^YT

动物

4.目的基因的检测与鉴定

分子水平O体।水下:

帝某益而适薜薪献-不庆正届季

主学签军

Y▼y

转承（mRNA产"画画

>FHF）

签定

抗性接

।种实验|

I是否守在抗性]

深挖教材

1.你能推测出mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤吗？

选修③P8“求异思维”

提示第1步：mRNA在反转录酶的作用下形成RNA—DNA杂交分子，第2步：

在核酸酶的作用下将RNA—DNA杂交分子中的RNA水解掉，形成DNA单链,

第3步：以DNA单链为模板，在DNA聚合酶的作用下形成双链的DNA。

2.CDNA文库的基因中为什么不含有启动子和内含子？

选修③Pio“生物技术资料卡；

提示cDNA文库是以某一发育时期细胞中的mRNA为模板反转录形成的,

mRNA中不含有启动子和内含子对应的碱基序列。

重点-疑难突破突破疑难提考能

1.PCR技术的过程

当温度上升到90P以上时,双旋DNA解

IIII1IIIII1~

|加热至90~95t

TT15，5*IIIIIIIIII

温度下降到X）七左右时.两种引物通过毓

基互补配对与两条单链DNA结合

&11v51

用物।引物J

I当温度上升到72七左仃时,Taq能从引物开

始进行互补链的合成（从5'端向3'端延伸）

4,I......................-3'

LLIJJ1L1JJJIr3'・5'

5引物I引物n

关于引物:

①引物是一小段单链的DNA或RNA,作为新子链的合成起点，只能结合在母链

的3%；

②只有通过引物，DNA才可以开始进行复制。

2.PCR技术和DNA复制的比较

:PCR技术：：DNA仪制:

体外（PCR扩增仪中）.细胞内（主要是细胞核内）

DNA在高温下变性解旋0解旋即催化

热稳定性DNA聚介醐解旋醐、DNA聚合版

在较高温度卜进行

卜2度条件细胞内温和条件

福控制温度

DNA片段公成对象DNA分子

（相同点］

均需要模板（DNA双链）、原料（四种脱氧核昔酸）、能量

3.基因组文库与cDNA文库的比较

:基因蛆文库:jcDNA文库：

工提取某种生物体的DNA）便种生物的单处mRN弓

反（逆）转求

限制前切割

（单链DNA）

建

（一定大小的DNA片段）;立

过

程（双十cDNA片段）

将DNA片段与载体相连：

与我体相连

（导入受体菌中〃:储）▼

（步入受体菌中存储）

（刀出组文库）cDNA文库）

命题-规律探究

考向1结合PCR技术的应用，考查科学思维能力

1.（2020・江苏卷，33）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法,简捷地

分析出已知序列两侧的序列，具体流程如图（以EeRI酶切为例）:

III扩增［TTn/DNA^^^lW

）PCR产物

N测序、分析］

........................1....................................3'片段卜的

完整序列

请据图回答问题:

（1）步骤I用的EcoRI是一种酶，它通过识别特定的切割特定

位点。

（2）步骤H用的DNA连接酶催化相邻核甘酸之间的3」羟基与5,一磷酸间形成

;PCR循环中，升温到95℃是为了获得：hqDNA聚合酶的

作用是催化.

⑶若如表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤m选用的PCR

引物必须是（从引物①②③④中选择，填编号）。

DNA序列（虚线处省略了部分核甘酸序列）

5AACTATGCGCTCATGA……GCAATGCCFlAGCCICr-S'

已知序列IIIIIIIIIIIIIIII1IIIIIIIIIIIIIII

3-TTGATACGCGAGTACT……CGTTACGCATCGGAGA-5'

①5，一AACTATGCGCTCATGA-3'

②5'—GCAATGCGTAGCCTCT—3'

PCR引物

③5，一AGAGGCTACGCATTGC—3'

@5,-TCATGAGCGCATAGTT-3,

（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚

线处省略了部分核甘酸序列），结果正确的是。

A5—AACTATGCG——AGCCCTT-3'

B5—AATTCCATG——-CTGAATT-3,

C5—GCAATGCGT-——-TCGGGAA-3'

D5—TTGATACGC——-CGAGTAC-3'

答案（1）限制性核酸内切（或限制）核昔酸序列

（2）磷酸二酯键DNA单链以DNA为模板的DNA链的延伸（3）②®（4）B

解析（1）根据题图可知，步骤I是获取目的DNA片段，所用的酶EcoRI是一

种限制酶，其能识别特定的核甘酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核甘酸

之间的磷酸二酯键断开。（2）步骤H是将目的DNA片段连接成环状，其中DNA

连接酶的作用是催化相邻核甘酸之间的3—羟基和5,用酸间形成磷酸二酯键。

PCR循环中，升高温度到95°C是为了打开氢键使双链解旋，获得DNA单链，Taq

DNA聚合酶的作用是催化游离的脱氧核甘酸连接到引物3,端，合成DNA子链。

（3）引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3,端开始延伸DNA子链，因为DNA

的合成方向总是从子链的V端向3,端延伸，故为扩增未知序列，选择的与模板链

相结合的引物应为S—TCATGAGCGCATAGTT-引物④）和5,一

GCAATGCGTAGCCTCT-3,（弓I物②）。（4）分析题意可知，片段F的两端为限制酶

EcoRI切割后产生的黏性末端，因此其5,端序列应为AATT一,3,端序列应为一

TTAA,B正确。

题后反思〉获取目的基因方法的选择

（1）如果不知道目的基因的核昔酸序列，可以通过构建基因文库的方法，即通过受

体菌储存并扩增目的基因后，从基因文库中获取目的基因。

（2）如果知道目的基因的核苓酸序列，而且基因比较小，可以通过DNA合成仪利

用化学方法直接人工合成。

（3）如果知道要扩增的目的基因及两端的核甘酸序列，而且基因又比较大，可以通

过PCR技术扩增目的基因。

考向2结合基因工程的操作程序，考查科学实践能力

2.（2018•全国卷I,38）回答下列问题：

⑴博耶（H.Boycr）和科恩（S.Cohcn）将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入

大肠杆菌细胞中进行了表达c该研究除证明/质粒可以作为载体外，还证明了

____________________________________________________（答出两点即可）。

（2）体外重组的质粒可通过Ca?+参与的方法导入大肠杆菌细胞；而体外重

组的噬菌体DNA通常需与组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法

将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为

重组噬菌体宿主细胞的是O

（3）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被

降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用的大肠杆菌作为受体细胞，

在蛋白质纯化的过程111应添加的抑制剂＜,

答案（1）体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达

⑵转化外壳蛋白（或答噬菌体蛋白）细菌⑶蛋白酶缺陷型蛋白酶

解析（1）两位科学家将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细

胞中并进行了表达，因此，该研究可以证明：质粒可以作为载体，真核细胞的基

因在原核细胞中也可以表达（不同生物共用一套密码子）、体外重组的质粒可以进

入受体细胞等。（2）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达

的过程称为转化，将质粒导入大肠杆菌时，常用的转化方法是首先用Ca2-处理大

肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞。噬菌体DNA没有侵染能力，体外重组的噬

菌体DNA通常需与外壳蛋白组装成完整噬菌体才能完成侵染过程。噬菌体多寄

生在细菌中，但不能寄生在心肌细胞和叶肉细胞中。（3）若要使蛋白质不被降解，

则大肠杆菌体内不能存在蛋白酶，因此，实验中应选用蛋白酶缺陷型的大肠杆菌

作为受体细胞。同理，在蛋白质纯化过程中，也不能使蛋白质降解，因此，应添

加蛋白酶抑制剂。

3.（2020•山东等级考，25）水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉所占比例

越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻，实现

了对直链淀粉合成酶基因（MT基因）启动子序列的定点编辑，从而获得了3个突变

品系。

（1）将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时，所需的酸

是，

重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为O

⑵根据启动子的作用推测，Wr基因启动子序列的改变影响了

，从而改变了1以基因的转录水平。与野生型水稻相

比,3个突变品系中I也基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列（填

“发生”或"不发生”）改变，原因是o

（3）为检测启动子变化对I心基因表达的影响，科研人员需要检测皿K基因转录产

生的mRNA（炽tmRNA）的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA,经

过程获得总cDNAo通过PCR技术可在总cDNA中专一性地扩增出1忆t

基因的cDNA,原因是。

（4）各品系VKvmRNA量的检测结果如图所示，据图推测糯性最强的品系为

，原因是O

答案（1）限制性核酸内切酶和DNA连接酶转化（2）RNA聚合酶与启动子的识

别和结合不发生编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含启动子（3）逆转录

（或反转录）引物是根据Wr基因的一段已知序列设计合成的（或引物能与Wr基

因的cDNA特异性结合）（4）品系3品系3的WtmRNA最少，控制合成的直链

淀粉合成酶最少，直链淀粉合成量最少，糯性最强

解析（1）限制性核酸内切酶能够识别双链DNA分子的某种特定核甘酸序列，并

且使每一条锥中特定部位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断开；DNA连接酶能将

DNA片段拼接起来。将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组

载体时，需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶的参与。转化是指目的基因进入

受体细胞内，并且在受体匆胞内维持稳定和表达的过程。（2）启动子是RNA聚合

酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。I也基因启动子序列的改变影

响了RNA聚合酶与启动子的识别和结合，从而改变了基因的转录水平，使直

链淀粉合成酶基因的表达量改变。根据题干信息可知，基因编辑系统是对启动子

序列进行定点编辑，由于编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含启动子，所以与

野生型水稻相比，3个突变品系中皿K基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸

序列没有发生变化。（3）用提取的各品系胚乳中的总RNA合成总cDNA的过程为

逆转录（反转录），需要逆转录醉的参与。由于引物能与V0基因的cDNA特异性

结合，故通过PCR技术可在总cDNA中专一性地扩增出V以基因的cDNAo

（4）mRNA是蛋白质合成的直接模板，根据题图分析可知，4个品系中品系3的

皿xmRNA量最低，控制合成的直链淀粉合成酶最少，直链淀粉合成量最少，糯

性最强。

题后反思＞

（1）农杆菌转化法的原理

植物受损伤时伤口处分泌物（酚类化合物）可吸引农杆菌f农杆菌中Ti质粒上的T

-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上（若将目的基因插入

到Ti质粒的T-DNA上，则目的基因将被一起带入）。

（2）受体细胞的选择

哽体细胞常用植物受精卵或体细胞（经组织培养）、动物受精卵（一般不用体细胞）、

微生物（大肠杆菌、酵母菌）等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则必须用真

核生物酵母菌（需内质网、高尔基体的加工、分泌）；一般不用支原体，原因是它

营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，也没有核

糖体等细胞器，不能合成要白质。

(3)基因表达载体中启动子、终止子的来源

①如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，目的基因中已含有启动

子、终止子，在构建