NYT 4682-2025 饲料中血根碱、白屈菜红碱的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

饲料中血根碱、白屈菜红碱的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofSanguinarineandChelerythrineinFeedstuffsbyLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要饲料安全是食品安全的重要源头保障，兽用天然植物提取物中生物碱类活性成分的质量控制已成为饲料质量安全监管的关键环节。血根碱和白屈菜红碱是博落回、白屈菜等罂粟科植物中含量较高的苯并菲啶类生物碱，具有显著的抗菌、抗炎和促生长作用，近年来在替抗饲料添加剂领域得到广泛应用。然而，目前饲料基质中这两种生物碱的检测缺乏统一的国家或行业标准方法，导致监管依据不足、检测结果可比性差等问题日益突出。本报告基于NY/T4682-2025《饲料中血根碱、白屈菜红碱的测定液相色谱-串联质谱法》的制定背景与编制过程，系统梳理了血根碱和白屈菜红碱的理化性质、检测技术发展现状、国内外标准概况及产业应用需求，详细阐述了该标准的主要技术内容、方法学验证结果和预期实施效果。该标准采用液相色谱-串联质谱法，建立了饲料中血根碱和白屈菜红碱同时测定的高效、灵敏、可靠的分析方法，方法的定量限、精密度和回收率等关键技术指标均满足饲料质量安全监管需要。本标准的发布实施填补了我国饲料领域生物碱检测标准的空白，为饲料质量安全监管、饲料添加剂质量控制及养殖投入品风险监测提供了重要的技术支撑。关键词：血根碱；白屈菜红碱；饲料；液相色谱-串联质谱法；标准制定；质量安全Keywords:Sanguinarine;Chelerythrine;Feedstuffs;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;Standardization;QualitySafety一、引言1.1研究背景与必要性我国是饲料生产和消费大国，饲料工业总产值已突破万亿元。随着农业农村部第194号公告的发布，自2020年1月1日起，我国饲料中全面禁止添加促生长类药物饲料添加剂，替抗产品的研发与应用成为行业热点。博落回提取物因其良好的抗菌、抗炎和促生长效果，被农业农村部批准为新型饲料添加剂（农业农村部公告第468号），其主要有效成分即为血根碱和白屈菜红碱等苯并菲啶类生物碱。然而，随着博落回提取物及其相关饲料产品市场份额的快速扩大，饲料中血根碱和白屈菜红碱的质量控制与定量检测需求日益迫切。目前，针对饲料中这两种生物碱的检测尚无统一的国家或行业标准方法。各检测机构和企业实验室多参考《中国兽药典》或文献报道方法自行制定检测规程，导致检测方法不统一、结果差异大、数据可比性差，难以满足日益严格的饲料质量安全监管要求。1.2标准制定的法规政策依据本标准的制定严格遵循以下法规和政策文件要求：-《中华人民共和国标准化法》（2017年修订）-《中华人民共和国农产品质量安全法》（2022年修订）-《饲料和饲料添加剂管理条例》（国务院令第609号）-《饲料质量安全管理规范》（农业部令2014年第1号）-《全国农业标准体系发展规划（2016—2020年）》和《“十四五”全国农业农村标准化发展规划》-农业农村部第194号公告《关于药物饲料添加剂退出相关事项的公告》-农业农村部第468号公告《关于批准博落回散等3种饲料添加剂品种的公告》二、标准概述2.1标准基本信息NY/T4682-2025《饲料中血根碱、白屈菜红碱的测定液相色谱-串联质谱法》是由农业农村部发布推荐的农业行业标准。该标准于2025年1月9日正式发布，自2025年5月1日起实施，由中国标准出版社出版发行。标准规定了配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料及饲料原料中血根碱（Sanguinarine）和白屈菜红碱（Chelerythrine）含量测定的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），适用于上述饲料产品中两种生物碱的定性定量检测。2.2标准适用范围与定位该标准属于饲料质量安全检测方法类行业标准，在我国标准体系中属于推荐性行业标准（NY/T系列），是饲料质量安全监管标准体系的重要组成部分。标准的方法原理为：试样中的血根碱和白屈菜红碱经酸性甲醇溶液超声提取，采用固相萃取柱净化后，以液相色谱-串联质谱仪在电喷雾正离子模式下进行检测，采用多反应监测模式进行定性定量分析，外标法定量。三、血根碱与白屈菜红碱概述3.1理化性质与生物活性血根碱（分子式C₂₀H₁₄NO₄⁺，分子量332.33）和白屈菜红碱（分子式C₂₁H₁₈NO₄⁺，分子量348.37）均为苯并菲啶类季铵型生物碱，是博落回（Macleayacordata）、白屈菜（Chelidoniummajus）等罂粟科植物的特征性活性成分。两种化合物均呈弱碱性，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，在酸性溶液中稳定性较好。两者结构相近但分子量不同，在质谱检测中可通过特征碎片离子加以区分。研究证实，血根碱和白屈菜红碱具有广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌的抑制作用尤为显著，同时对多种炎症因子具有调控作用，能够促进动物肠道健康、增强机体免疫功能、改善畜禽生产性能。在禁抗背景下，博落回散（主要成分为血根碱和白屈菜红碱）已成为国内应用较为广泛的植物源替抗饲料添加剂之一。3.2产业应用现状博落回提取物及其制剂是国内自主创制的天然植物源饲料添加剂品种。2019年，农业农村部发布第468号公告，批准博落回散为新饲料添加剂，允许在猪、鸡等畜禽饲料中使用。近年来，博落回散的年销售额持续增长，相关饲料产品在市场中的渗透率不断提升。此外，以血根碱和白屈菜红碱为质量标志物的植物提取物也成为饲料原料出口的重要品类。四、国内外检测技术标准现状4.1国际标准情况截至本标准的制定前期调研阶段，国际标准化组织（ISO）尚未发布关于饲料中血根碱、白屈菜红碱检测的标准方法。国际食品法典委员会（CAC）也未针对饲料中上述生物碱设定限量要求或推荐检测方法。4.2国内标准情况国内已发布的相关标准主要集中在植物提取物和兽药领域：-《中华人民共和国兽药典》（2020年版）中收载了博落回散的含量测定方法，采用高效液相色谱法（HPLC）测定血根碱和白屈菜红碱的含量，但该方法主要适用于单一制剂，对配合饲料等复杂基质的前处理方法未作规定。-有关中药材中生物碱类成分检测的标准主要针对中药材原料，其基质与饲料产品差异显著，无法直接移用。-目前尚无针对饲料基质中血根碱和白屈菜红碱测定的国家或行业标准。4.3技术方法演进文献调研显示，饲料及植物提取物中血根碱和白屈菜红碱的检测方法经历了从薄层色谱法（TLC）到高效液相色谱法（HPLC），再到液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）的技术演进过程。TLC法操作简便但灵敏度和分辨率有限；HPLC-UV法灵敏度可满足制剂含量测定需求，但对于配合饲料等复杂基质，由于基质干扰物较多，需要繁琐的净化步骤且方法灵敏度仍显不足；LC-MS/MS法具有高选择性、高灵敏度的突出优势，可通过多反应监测模式有效消除基质干扰，近年来被广泛应用于饲料质量安全检测领域，也是本标准采用的核心技术。五、标准主要技术内容5.1方法原理试样中血根碱和白屈菜红碱采用酸性甲醇溶液超声提取，提取液经固相萃取柱净化浓缩后，以液相色谱-串联质谱仪测定。在电喷雾正离子（ESI⁺）模式下，血根碱和白屈菜红碱的准分子离子分别为m/z332和m/z348，经碰撞诱导解离后选择特征离子对进行定量和定性分析，外标法定量。5.2关键技术参数色谱条件：采用C18反相色谱柱（如ACQUITYUPLC®HSST3，2.1mm×100mm，1.8μm），流动相为含0.1%甲酸的乙腈-水体系，梯度洗脱，流速0.3mL/min，柱温40°C，进样量2μL。质谱条件：电喷雾正离子模式（ESI⁺），多反应监测（MRM）模式采集；离子源温度150°C，脱溶剂气温度500°C，脱溶剂气流速1000L/h，毛细管电压3.0kV；血根碱定量离子对为m/z332.2→274.1，定性离子对为m/z332.2→246.1；白屈菜红碱定量离子对为m/z348.2→332.2，定性离子对为m/z348.2→290.2。5.3样品前处理试样经粉碎（粒径不大于0.5mm）后，精确称取约2g（精确至0.001g），加入酸性甲醇溶液（含1%盐酸的甲醇-水溶液），涡旋混匀后超声提取20min，离心后取上清液，经固相萃取柱（如WCX弱阳离子交换柱）净化，依次用甲醇和水淋洗，再用含氨水的甲醇溶液洗脱，洗脱液在40°C下氮吹至干，残渣用初始流动相复溶，过0.22μm微孔滤膜后供仪器测定。5.4方法学验证标准编制过程中，组织多家实验室进行了协同验证实验，关键方法学指标如下：-线性范围：血根碱和白屈菜红碱在0.5～100ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r均大于0.995。-定量限：配合饲料基质中血根碱和白屈菜红碱的定量限均为10μg/kg。-回收率：在10～500μg/kg添加水平范围内，血根碱的平均回收率为82.6%～106.3%，白屈菜红碱的平均回收率为84.2%～105.7%。-精密度：实验室间相对标准偏差（RSD）均小于15%，重复性条件下相对标准偏差均小于10%。上述技术参数表明，该标准方法满足饲料中痕量生物碱定量的要求，能够有效支撑饲料质量安全监管的技术需求。六、标准制定的主要参与单位本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口管理。标准起草工作由主要起草单位牵头，联合多家科研院所、检测机构和企业共同完成。6.1主要起草单位本标准起草组核心单位为中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（以下简称“质标所”）。质标所是农业农村部直属的农产品质量安全领域国家级科研机构，同时也是国家饲料质量检验检测中心的依托单位，长期承担全国饲料质量安全风险监测、饲料标准制修订和饲料检测技术研究等任务。质标所设有饲料质量安全研究室，建有农业农村部农产品质量安全重点实验室，配备有液相色谱-串联质谱仪、气相色谱-串联质谱仪、电感耦合等离子体质谱仪等大型精密仪器设备，具备完善的饲料质量安全检测能力和雄厚的科研基础。近年来，该所先后主持和参与完成多项饲料领域国家标准和行业标准的制修订工作，在饲料中药物添加剂、违禁物质、天然植物活性成分等检测技术研究方面积累了丰富的经验。在本标准的研制过程中，质标所研究团队系统开展了饲料基质中生物碱类化合物提取与净化技术研究，构建了适用于不同类型饲料基质的固相萃取净化方法，建立了基于LC-MS/MS的多残留同步检测技术，并组织完成了实验室间协同验证实验。同时，质标所积极参与国际标准追踪与比对研究，确保标准技术内容的科学性、先进性和适用性，为该标准的顺利发布和实施提供了坚实的技术保障。6.2其他参与单位本标准起草过程中还汇集了包括省级兽药饲料监察所、相关检测机构、博落回散生产企业等单位的技术专家，形成了覆盖科研、检测、生产、监管全链条的起草团队，有效保障了标准的科学性、先进性和可操作性。各参与单位分别在方法验证、实际样品筛查、生产工艺适配和适用性评估等方面做出了重要贡献。七、标准实施的意义与预期效果7.1填补标准空白，完善监管依据NY/T4682-2025的发布实施填补了我国饲料中血根碱和白屈菜红碱检测标准的空白。标准实施后，各级饲料质量检测机构和相关企业实验室有了统一规范的方法依据，有助于实现检测结果的互认与可比，为饲料质量安全监管提供了明确的技术依据。7.2支撑替抗战略，促进产业健康发展7.3保障国际贸易，增强标准话语权博落回提取物作为具有自主知识产权的天然植物源饲料添加剂品种，在走向国际市场的过程中面临检测标准的对接问题。本标准的发布为我国相关产品的国际贸易提供了可靠的检测依据，同时增强了我国在天然植物源饲料添加剂国际标准制定方面的主动权和话语权。八、结论与展望8.1主要结论NY/T4682-2025《饲料中血根碱、白屈菜红碱的测定液相色谱-串联质谱法》是在我国饲料端全面禁抗、植物源替抗产品快速发展的时代背景下制定的一项重要的农业行业标准。该标准的制定过程科学严谨，技术路线合理，方法学验证充分，各项技术指标达到了国际同类方法的先进水平。标准的发布实施有效填补了我国饲料领域生物碱类活性成分检测标准的空白，为饲料质量安全监管提供了重要的技术支撑，对促进替抗饲料添加剂产业的规范化发展具有深远的推动意义。8.2未来展望随着我国饲料质量安全监管体系不断完善和天然植物源饲料添加剂的持续发展，标准工作仍需持续深化。建议今后在以下方向继续推进标准化工作：一是适时推动饲料中博落回提取物标志性成分检测方法由行业标准上升为国家标准；二是开展饲料中多种生物碱类成分同时检测方法的研究与标准化，构建覆盖更广的植物源添加剂活性成分检测标准体系；三是关注液相色谱-高分辨质谱联用等新兴技术在饲料质量安全检测中的应用，保持标准技术内容的先进性和前瞻性；四是加强标准的宣贯培训和应用推广，确保标准在基层检测机构和饲料企业中得到有效实施。参考文献[1]农业农村部.中华人民共和国农业农村部公告第194号[Z].2019.[2]农业农村部.中华人