2025年生物制剂工艺专业考试试卷及答案

2025年生物制剂工艺专业考试试卷及答案一、名词解释（每题4分，共20分）1.生物制剂（生物制品）答案指以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为起始材料，采用生物学工艺或分离纯化技术制备，用于预防、治疗和诊断的制品，包括疫苗、抗体、重组蛋白、血液制品、基因治疗产品等。2.单克隆性答案指一个细胞群体由同一原始细胞分裂增殖而来，遗传背景完全一致，在细胞株构建中通过有限稀释法、克隆环或流式分选等获得单细胞来源的克隆。3.切向流过滤答案料液在膜表面以切向流动，部分小分子透过膜，大分子被截留并循环浓缩或换液的膜分离技术，常用于生物大分子的浓缩和缓冲液置换。4.细菌内毒素答案革兰氏阴性菌细胞壁外膜上的脂多糖成分，进入人体可引起发热、休克等反应，是生物制品中必须严格控制的热原物质。5.冻干保护剂答案在冷冻干燥过程中保护生物大分子活性、维持制剂稳定性的辅料，如蔗糖、海藻糖、甘露醇等，通过形成玻璃态或替代水分子氢键防止蛋白变性。二、填空题（每空1分，共15分）1.动物细胞大规模培养中常用的pH缓冲系统为______和______。答案碳酸氢钠-二氧化碳；HEPES（或4-羟乙基哌嗪乙磺酸）2.重组蛋白纯化的“三部曲”通常包括______、____和______。答案捕获层析；中间纯化层析；精纯层析（或亲和层析；离子交换层析；凝胶过滤层析）3.生物制品无菌灌装要求操作环境为______级洁净区，其背景环境不低于______级。答案A；B4.疫苗按照制备技术可分为______、____、______等。答案减毒活疫苗；灭活疫苗；亚单位疫苗（或基因工程疫苗、载体疫苗）5.单克隆抗体的两条重链之间通过______键连接，重链与轻链之间通过______键连接。答案二硫；二硫6.生物反应器培养动物细胞时，温度通常控制在______℃，pH一般控制在______。答案37；7.0～7.4（或7.2）7.重组蛋白最常用的哺乳动物细胞表达宿主是________。答案CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）三、单项选择题（每题1.5分，共15分）1.下列哪项不属于生物制剂？A.重组人胰岛素B.单克隆抗体C.阿司匹林D.新冠mRNA疫苗答案C解析阿司匹林是化学合成药物，不属于生物制剂。2.动物细胞大规模悬浮培养中，最常用的设备是？A.摇瓶B.搅拌式生物反应器C.培养皿D.转瓶答案B3.亲和层析纯化重组蛋白主要依据什么原理？A.分子大小B.电荷差异C.特异性生物识别（如抗原-抗体、配体-受体）D.疏水性差异答案C4.生物制品无菌检查中，薄膜过滤法能够检测下列哪种微生物？A.病毒B.支原体C.细菌和真菌D.噬菌体答案C5.冻干过程中，一次干燥阶段主要去除的是？A.结合水B.自由水（冰升华）C.结晶水D.细胞内水答案B6.单克隆抗体生产中最常用的哺乳动物细胞表达系统是？A.大肠杆菌B.酿酒酵母C.CHO细胞D.Sf9昆虫细胞答案C7.内毒素检测常采用哪种方法？A.酶联免疫吸附法B.鲎试剂法（LAL）C.PCR法D.显微镜计数答案B8.生物反应器中控制溶解氧浓度通常通过？A.改变搅拌转速和通气量B.改变温度C.调节pHD.添加消泡剂答案A9.离子交换层析洗脱时，提高洗脱液的盐浓度通常用于？A.增大分子量B.洗脱结合的目标蛋白C.灭菌D.调节pH答案B10.生物制品病毒灭活常用方法不包括？A.低pH孵育B.有机溶剂/去污剂（S/D）处理C.紫外线照射D.纳滤答案C解析紫外线照射一般不作为生物制品大规模病毒灭活方法，常用低pH、S/D法、纳滤等。四、判断题（每题1分，共10分）1.生物制品生产用的细胞基质必须建立两级细胞库：主细胞库和工作细胞库。答案错误解析通常建立三级细胞库，即原始细胞库、主细胞库和工作细胞库。2.生物制品无菌灌装必须在A级环境下进行。答案正确3.冻干制剂的复溶时间与冻干工艺无关。答案错误解析复溶时间与冻干饼结构、保护剂种类及工艺参数密切相关。4.内毒素是革兰氏阳性菌的细胞壁成分。答案错误解析内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂多糖。5.单克隆抗体可通过补体依赖细胞毒作用（CDC）和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）发挥抗肿瘤作用。答案正确6.重组蛋白药物生产中使用抗生素可以替代无菌操作。答案错误解析抗生素不能替代无菌操作，且应避免在生产中使用抗生素。7.超滤可以根据分子量截留不同大小的分子。答案正确8.细胞培养过程中，乳酸积累导致pH下降，需要通过补碱调控。答案正确9.生物制品的质量控制仅需检测效价，无需检测纯度。答案错误解析生物制品需同时检测效价、纯度、杂质、内毒素、无菌等多项指标。10.病毒清除验证中，通常需要至少两种不同机制的正交步骤。答案正确五、简答题（每题5分，共20分）1.简述单克隆抗体生产的主要工艺流程。答案主要包括：(1)细胞株构建与单克隆筛选；(2)细胞库建立；(3)种子扩增与大规模生物反应器培养；(4)收获澄清；(5)纯化（蛋白A亲和层析捕获、病毒灭活、离子交换/疏水层析精纯、纳滤除病毒）；(6)超滤浓缩与制剂配制；(7)无菌过滤与灌装；(8)冻干或液体制剂包装，全程质量控制。2.简述生物制品生产中病毒灭活/去除的常用方法及其原理。答案(1)低pH孵育：在低pH条件下使包膜病毒灭活；(2)有机溶剂/去污剂（S/D法）：破坏包膜病毒脂膜；(3)纳滤：利用纳米级滤膜物理截留病毒颗粒；(4)热灭活：加热使病毒蛋白变性（适用于耐热产品）；(5)层析法：某些层析介质可吸附或分离病毒。通常采用两种以上正交机制。3.简述离子交换层析分离蛋白质的基本原理。答案利用蛋白质在不同pH条件下所带电荷性质与数量不同，与离子交换介质上的带电基团可逆结合。通过改变离子强度或pH，使不同蛋白按结合力强弱依次洗脱，实现分离。4.简述生物制剂生产过程中微生物污染的主要来源及防控措施。答案来源：人员、原材料、设备、环境、操作过程。措施：建立洁净区（A/B/C/D级）、严格更衣与手消毒、物料除菌过滤或灭菌、设备在线清洗/灭菌（CIP/SIP）、定期环境监测、无菌工艺验证、人员培训。六、论述题（每题10分，共20分）1.试述生物制品（以单克隆抗体为例）从细胞培养到无菌制剂全过程中的关键质量控制点。答案要点包括：(1)细胞株质量：单克隆来源、遗传稳定性、表达量、无菌检测、支原体/病毒检测；(2)细胞培养过程：培养参数（温度、pH、溶氧、搅拌转速）、细胞活率、代谢产物、蛋白产量与质量（聚体、电荷异构体、糖基化）；(3)纯化过程：每步层析收率、纯度、杂质（宿主细胞蛋白、DNA、蛋白A配基脱落）、内毒素、病毒清除效果；(4)制剂过程：原液与辅料无菌过滤、蛋白质浓度、pH、渗透压、稳定性、可见异物、不溶性微粒；(5)成品检定：效价、纯度、内毒素、无菌、异常毒性等，符合药典规定。2.结合实例论述生物制剂冻干工艺中影响产品质量的主要因素及控制策略。答案主要因素：(1)冻干保护剂种类与浓度：如蔗糖、海藻糖可形成无定形玻璃态