（正式版）DB13∕T 1090-2009 《饲料用酶制剂中木聚糖酶活力测定-分光光度法》

B462009-06-17发布2009-07-02实施I本标准由河北省畜牧兽医局提出。本标准起草单位：河北省饲料产品质量监督检验站、石家庄市畜产品质量监测中心、河北省畜牧1饲料用酶制剂中木聚糖酶活力的测定——分光光度法本标准规定了饲料用酶制剂中木聚糖酶活力的单位定义和测定方法。本标准适用于饲料用酶制剂中木聚糖酶活力的测定，不适用于饲料中木聚糖酶活力的测定。下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是下列术语和定义适用于本标准。木聚糖酶活力单位4原理5.10离心机：6000r/min。5.12分光光度计。26.3三水乙酸钠(CH₃COONa·36.5四水酒石酸钾钠(C₄H₄O₆·4H₂O)。6.7无水硫酸钠。7溶液7.1氢氧化钠溶液，浓度200g/L7.3乙酸钠溶液，浓度0.1mol/L7.5DNS试剂(3,5-二硝基水杨酸试剂)称取3,5-二硝基水杨酸3.15g,溶解于500mL水中，搅拌5s,水浴加热至45℃。缓缓加入存7d后使用，有效期6个月。称取木聚糖0.80g于100mL烧杯中，加入60mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液，置磁力搅拌器上搅拌并摇匀。4℃避光保存，有效期3d。选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎至0.25mm,装入密封容器中，备用。9.1木糖标准工作曲线的绘制39.1.2准确量取9.1.1的标准工作溶液各1.00mL,分别置7支比色管中，各加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液2.00mL和DNS试剂2.5mL,在沸水浴中显色3min(准确计时),用水冷却至室温，加蒸馏水至刻吸光度值为横坐标(X轴)计算出标准曲线回归方程。9.2.1称取试样0.5～2g(精确至0.0002g)置研钵中，用少量乙酸-乙酸钠缓冲溶液湿润，研磨3min,加入15mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液混匀，静置，将上层清液转移至100mL容量瓶中。9.2.2沉渣部分继续研磨3min,再用10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液混匀，静置，将上层清液转移至容9.2.3重复9.2.2操作至少3次，将试样全部转移至容量瓶中，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容至刻度，9.2.4取9.2.3溶液20mL6000r/min离心10min,吸取上清液适量，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液稀释至9.3.1.1准确量取9.2.4稀释酶液1.00mL置于25mL比色管中，置温度50℃±0.2℃、振摇速度100次/分钟的水浴摇床中预热10min,加入2.5mLDNS试剂，置沸水浴中加热3min(准确计时),用水冷却至约50℃。100次/分钟的水浴摇床中保温10min(准确计时)。用水冷却至室温，加蒸馏水至刻度，作为样品空白分钟的水浴摇床中预热10min,加入2.00mL木聚糖溶液(经过50℃预热的),置上述水浴摇床中保温10min(准确计时),立即加入2.5mLDNS试剂终止反应。9.3.2.2将9.3.2.1比色管置沸水浴中加热3min(准确计时),用水冷却至室温，加蒸馏水至刻度，作9.3.2.3以0浓度标准测试溶液为空白对照，在48