2024无菌过滤检测仪校准规范 实验报告

一、实验目 二、实验地 三、实验环 四、实验设备、方法与结 （一）液体流量重复 实验耗材与试 实验仪 实验方 实验结 （二）分配均匀 实验耗材与试 实验仪 实验方 实验结 （三）微生物恢复生长检 实验耗材与试 实验仪 实验方 实验结 （四）微生物挑战性检 实验耗材与试 实验仪 实验方 实验结 （五）无菌过滤检测仪中大肠埃希氏菌质控标准物质研 标物研 验证结 五、实验结 （征求意见稿12（50~55）%（一）1000mL0.1mg，经检定合格；秒表，最大允许误差：±0.5s/d（1（2Sr，重复性以单次测量的相对实验标准偏差表示。 =

(QQ(QQ (n

Vi——i次测量，仪器过滤水的体积，mL；Mi——i次测量，仪器过滤水的重量，g；Qi——i̅——331.1所示。表 无菌过滤检测仪液体流量重复性测试结（二）1000mL0.1mg200mL300mL体积的灭菌水。过滤结mn。按照公式（4）CN。重复测量三次，取三次分配差异CN=|1-|× ̅——二个或三个过滤器内的液体重量的平均值，g20mL、60mL、100mL、200mL；对于三联（n=3）的耗材，待30%、50%、75%100%区间。3个品牌（赛多利斯、默克和泰林，随机标2.1分配均匀性实验结果（A，两筒200100 60202.2分配均匀性实验结果（B，两筒200100 60202.3分配均匀性实验结果（B，三筒流量参 300150 9030 2.4分配均匀性实验结果（C，两筒20010060202.5分配均匀性实验结果（C，三筒300150 9030（三）100mL量筒；离心管：1.5mL50mL、无菌；锥形瓶：500mL、无菌；μL，经检定合格；枪头（1000μL，100μL。硫乙醇酸盐流体培养基；胰大豆胨液体培养基；胰大豆胨琼脂培养基；良马丁培养基；0.1%pH7.0的磷酸盐蛋白胨水溶液；高压灭菌水或注射用水；PBS缓冲液。胰15.02.55.01.05.5g/5.00.50.75硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸（0.31000胰大豆胨液体培养胰17.05.03.02.5葡萄糖/2.5g/2.31000℃胰大豆胨液体培养基置20～25℃培养。胰大豆胨琼脂培养胰 15.0琼 15.0大豆木瓜蛋白酶水解 5.0 1000氯化 5.0动物组织胃蛋白酶水解物和胰胨等量混合 10.0葡萄 20.0 1000℃值为5.6±0.2动物组织胃蛋白酶水解物和胰胨等量混合 10.0琼 15.0 1000葡萄 40.0℃马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯（去皮 200琼 14.0葡萄 20.0 1000取滤液补水至1000mL，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2，加入琼脂，pH7.0无菌氯化钠-取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000mL，微温溶解，必要时滤过使澄清，分装，灭菌。豆胨液体培养基中或胰大豆胨琼脂培养基上接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫天，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成0.05（mL/mL内，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含取适量培养后的单种菌液，8000rpm5minPBS溶液8000rpm5minPBS溶液重悬，将次浓度菌液标S0100uLS0900uLPBS10倍梯度稀释，S110S2、S3、S4、S5、S6、S7等菌液。取适宜浓度的菌液进行流式检测，获得S0菌液的浓度。根据无菌过滤检测仪的100CFU的试验菌，选择低浓度菌液（1~50）CFU/mL和高浓度菌液（50~100）CFU/mL48h后计数。念珠菌、黑曲霉的过滤器内加100mL的胰大豆胨液体培养基。放置于培养箱14天。5s200mL体积的灭菌水ABC）3.1—3.4根据实验结果表3.1和表3.3可以发现，实验用的低浓度菌液在（1~50）CFU/mL范围内，高浓度菌液在（50~100）CFU/mL范围内，浓度适宜。3个品143.1（中国计量科学研究院

品牌 品牌 品牌 3.2微生物恢复生长检测验证结果（中国计量科学研究院

品牌 品牌 品牌3.3（南京市计量监督检测院

品牌A 品牌B 品牌C 低浓度高浓度低浓度低浓度高浓度低浓度 3.4微生物恢复生长检测验证结果（南京市计量监督检测院 品牌 低浓度品牌 低浓度品牌 低浓度（四）量筒；离心管：1.5mL50mL、无菌；锥形瓶：500mL、无菌；无菌过（10～100μL（100～1000）μL0.22μm级别的滤膜；营养琼脂；营养肉汤；0.1%pH7.0的磷酸盐蛋白胨水溶液；高压灭菌水或注射用水；PBS缓冲液。8000PBS8000rpm5minPBS溶液重悬，将次浓度菌液标记为S0100uLS0900uLPBS溶1mL的（106-107）CFU/mL粘质沙雷氏菌（0.45μm级别的滤膜）或者缺陷假单胞菌（针对标称孔径0.22μm级别的滤膜）悬液，使用PBS溶液进行梯度稀释，将适宜浓度的菌液过滤到滤膜（20CFU-60CFU为宜）上，用已灭菌的镊子将滤膜放到营养琼脂上进行（37±1）℃24h3到滤膜上，用已灭菌的镊子将滤膜放到营养琼脂上进行（37±1）℃24h。1mL的（106-107）CFU/mL粘质沙雷氏菌或者缺陷假单胞菌悬液进行过的菌落进行计数，计算平均值R2（5）R=（R1-R2）/ R——3个品牌（赛多利斯、默克1.47×106CFU3个品牌仪器的截留率均为100%4.1滤膜上 截留效菌落 （五）从中国工业微生物菌种保藏管理中心（ChinaCenterofIndustrialCulture5mL50%-80℃5代以内的菌株。37℃过取1mL8000×g离心5min，PBS1个麦氏浊度的均匀菌悬液。用PBS101mL10-59mL的营37℃200rpm振荡培养。根据生长曲线，培养至对数将收获的大肠埃希氏菌进行离心、重悬和梯度稀释，与中国计量科学研究院研制的冻干保护剂混合均匀。将西林瓶放至冷冻的托盘上，加入适量的液氮80程序进行冷冻干燥。每个单元标准物质充氮气后压盖密封，共制备大肠埃希氏菌质控标准物质（高浓度）150个单元和大肠埃希氏菌质控标准物质（低浓度150个单元。0.45μm；培养皿，移液器（100μL-1000μL、枪μLmLmL，MUGpH7.4PBS36℃±1℃；6W366nm的紫外光灯；抽滤设备。100mL36℃±1℃（18-24）h。10min回温后，打开塞子。100mL100mL，上下颠倒混匀，常温放置，半小时内完成检测。100mL菌液加到过滤器皿中，进行抽滤。一次过滤完10mL灭菌超纯水将容量瓶和滤杯边缘冲洗一遍，再次过滤。水样滤完5s，关闭滤器阀门。36℃±1℃24h。重复（2）-（5）10按照四、方法验证