CN119462894A 一种牛蛙皮源肽及其纯化方法和应用 （化学与精细化工广东省实验室潮州分中心）

本发明公开了一种牛蛙皮源肽及其纯化方2随后将3份调制液放置于40~60℃的水浴中酶多肽筛选，应用质谱仪对3份酶解粗提物中所含肽段进行分析和测定，从而构建多肽8.根据权利要求2_7任意一项所述的纯化方法，9.一种如权利要求1所述的牛蛙皮源肽的应用，其特征在于：用于制备II型糖尿病药3物活性肽的重要潜在来源，而脯氨酸或丙氨酸在活性肽N端倒数第二位的位置对抑制DPP_拟胃肠道消化后的水解产物也显示出强DPP_IV抑制能力。此外，罗非鱼皮的水解产物与有较好的ABTS自由基清除率活性和FRAP抗氧化活性的牛蛙皮源肽及其纯化4在细胞穿透性预测，筛选出具有高亲和力、无毒性且具有细胞穿透性的至少2条以上的肽选优，从筛选出的肽段中选择最高亲和力的两条肽段利用pymol软件进行位点分[0008]具体的所述建立多肽库步骤中，所述计算机辅助软件包括AutodockVina软件、[0013]本发明具有以下有益效果1）本发明制备的牛蛙皮源肽能够显著抑制DPP_IV酶[0016]图2为本发明实施例中RGFNGLDGAK多肽在DPP_IV酶口袋中的构象、在DPP_IV酶活5骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可[0019]本发明中，所述DPP_IV酶抑制活性的验证通过DPP_IV酶在96孔微孔板中加入30μL的合成肽溶液，然后用移液器快速地加入264μLFRAP工作液，6据文件后使用ProteomeDiscovererv.2.3软件分析结果。MS1的质量允差为0所示；AutodockVina软件可根据肽序列中氨基酸组成和长度给出亲和力分析，绝对值越件和AllerTOP软件能基于机器学习技术，根据特定氨基酸特性给出潜在的毒性和过敏原7越高。基于此从筛选出的6条肽段中选择最高亲和力的2条肽段RGFNGLDGAK和RGEGLPA利用AutodockVina进行分子对接分析，多肽的空间结构由ChemDraw20.0(CambridgeSoft化状态和氢取向的优化，并保存为pdbqt文件作为配体文件。采用LamarkiangeneticPi_Alkyl、Alkyl、Pi_Pi堆积、电荷、盐桥和非互补性相互作用结合。具体为122Lys与N端6位的Leu氨基酸的支链C形成Pi_Alkyl键，585Tyr与RGFNGLDGAK肽段N端1位的Arg氨基支链O以电荷相互吸引结合，556Asp与RGFNGLDGAK肽段N端1位的Arg氨基酸的支链N以电荷8互作用结合。RGEGLPA多肽对接位点分析结果如图3所示，DPP_IV酶蛋白链上氨基酸残基酸的支链C形成Alkyl键，109Pro与RGEGLPA肽段C端1位的Ala氨基酸的支链C形成Alkyl键，159Pro与RGEGLPA肽段C端2位的Pro氨基酸的N1位环形成Alkyl键；117Glu与RGEGLPA肽段N端3位的Glu氨基酸的支链O以非互补性相互作用结合，463Lys与RGEGLPA肽段N端1位的Arg氨基酸的支链N以非互补性相互作用结合。因此，RGFNGLDGAK和RGEGLPA多肽与受体蛋白成肽为纯度>95％的多肽固体粉末，分别将合成肽配制成肽溶液后对其进行DPP_IV酶抑制的RGFNGL