动物细胞培养在科研生产中的应用

动物细胞培养在科研、生产中的应用一、动物细胞培养在科研中的应用Trizol提取MCF-7细胞总RNA1反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定2细胞转染及稳定表达细胞株的筛选3细胞生长曲线实验4血清依赖性实验5单细胞克隆形成实验6软琼脂集落形成实验7胸腺嘧啶核苷（TdR)双阻断法同步化MCF-7细胞

8流式细胞光度术（FCM)进行细胞周期分析9Westernblot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达10POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响论文题目:

中心体蛋白centrin在人胚胃上皮细胞GES1的细胞增殖和癌化中的作用答辩人:陈

娴指导导师:王永潮

教授实验方法构建反义重组质粒转染细胞并筛选细胞株半定量RT-PCR（semiRT-PCR)细胞生长活性测定

细胞生长曲线测定

血清依赖性实验

平板集落形成率测定

软琼脂集落形成比较流式细胞光度术（FCM)分析细胞周期细胞间接免疫荧光实验（IEF)免疫印迹实验（westernblot)

细胞转染及稳定表达细胞株的筛选GES1细胞G418筛选浓度的选择

（300ug/ml)01稳定表达细胞株的筛选GAC1GAC302细胞生长曲线的测定返回血清依赖性试验结果平板集落形成率的比较平板集落形成率的比较返回软琼脂集落形成比较

GES1BG823

GAC1GAC3返回GES1表现的正常细胞分裂周期GAC3分裂期细胞返回一个新的细胞周期相关蛋白ICF4501基因克隆及其功能研究01CloneandcharacterizationofanovelcytoplasmproteinICF45,involvedincellcycleregulation01答辩人:郭德良导

师:何大澄

教授Full-lengthcDNA克隆及其生物信息学分析ICF45mRNA在不同组织中表达分析ICF45蛋白表达分析ICF45亚细胞定位研究利用RNAi研究ICF45细胞内功能0103020405ICF45Research稳定沉默ICF45基因表达的克隆细胞株建立1细胞形态和核变化观察2细胞生长和增殖能力3细胞周期和DNA含量变化4细胞凋亡率5p53表达6Centrosomeandspindle7微丝形态变化8第五部分利用RNAi研究ICF45

细胞内功能二、动物细胞培养在生产中的应用中国预防医学科学院病毒所1998年遗传免疫室工作年会报告题目

序号

题

目

时间（分)报告人

15高效表达乙肝表面抗原转基因细胞系的构建及细胞系的10杨芙蓉

生长特性的研究

张陵林16篮式生物反应器灌流培养工艺的研究10宗

芳

王

文17乙肝SS1融合蛋白纯化工艺的研究10陈

红18高效表达细胞株的内外源污染因子的检查10阮薇琴19CHO细胞基因表达中不同扩增系统（GS及dhfr)比较的研究10王志云※研究生开题报告HPV16治疗性疫苗的研制

（博士)10骆卫锋

2CpG对重组活疫苗免疫效果影响的研究（博士)10许洪林3EB病毒膜抗原基因工程疫苗的构建及其免疫效果的研究（博士)10魏

滨

4CpG对基因工程乙肝疫苗免疫效果影响的研究（硕士)10王四清※阮力做全室工作总结1999年遗传免疫室工作年会报告题目

序号

题

目

时间（分)报告人

表达PreS1的CHO细胞中试培养工艺研究10’

杨芙蓉含PreS1的新型乙肝疫苗中试纯化工艺的研究10’

李军含乙肝表面抗原S2SS1基因的质粒构建10’

王秀平表达PreS1的CHO细胞致瘤性实验及新细胞系筛选10’

阮薇琴

研究生开题报告1优势密码子对病毒基因表达调控影响的研究10’王世峰2CHO细胞优势密码子与外源基因表达关系的研究10’王志云

全室工作总结10’阮力小鼠金属硫蛋白基因-I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗方面的应用

殷慎敏

李令媛

茹炳根(北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系,北京,100871)摘要：

将小鼠的MT-I基因插入pSV2-dhfr质粒的EcoRI位点,构建了具有SV40和MT双启动子并正向插入MT-I基因的表达载体。用改良的磷酸钙/DNA沉淀法将表达载体导入CHO-dhfr-细胞内，用不含次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)的选择培养基筛选出稳定表达MT阳性克隆D-22，经检测10~6细胞的MT表达量约为1.8μg，D-22细胞对Cd2+浓度抗性较之CHO-dhfr-细胞高14倍。为了研究金属硫蛋白对正常细胞所具有的保护作用，将不同浓度的顺铂分别处理无MT表达的CHO-dhfr-细胞和有MT表达的D-22细胞。实验发现顺铂对D-22细胞和CHO-dhfr~细胞50%生长抑制浓度(IC50)分别是0.145μmol/L和0.04μmol/L。上述研究表明MT对正常细胞有一定的保护作用，因而通过诱导正常细胞提高MT的表达量，同时使用MT阻断剂阻断肿瘤组织的MT合成，这样可能会为治疗某些顽固肿瘤开辟一条新途径。

关键词：

金属硫蛋白(MT)；CHO-dhfr-细胞；细胞转染；基因表达

；顺铂

细胞名称CHO/dhFr-仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷描述该细胞为二氢叶酸还原酶缺陷细胞。在没有HT（次黄嘌呤-胸腺嘧啶）时细胞会死亡，细胞培液中加氨甲喋呤可以防止对药物低抗性的回变细胞的生长。动物种别中国仓鼠性别雌组织来源正常；卵巢形态上皮细胞培养基和添加剂IMDM，添加4mML-谷氨酰胺，1.5克/升碳酸氢钠，及：0.1mM次黄嘌呤,0.016mM胸腺嘧啶,100nM氨甲喋呤,90%;胎牛血清，10%。H,次黄嘌呤;A,氨基喋呤;T,胸腺嘧啶DNA内源性途径(主要途径)

谷氨酰胺or单磷酸尿苷酸二氢叶酸还原酶AHT外源性途径(旁路途径)(Hypoxanthineguzninephosphoribosyltransferase)

次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶

(HGPRT)胸腺嘧啶激酶(TK)(Thymidinekinase)外源性途径(旁路途径)实用生物技术丛书——基因克隆技术在制药中的应用

第十四章

生物药物基因的克隆及其在动物细胞中表达

第一节

红细胞生成素的克隆及其在CHO-dhfr-细胞中的表达

第二节

bFGF基因的克隆及在成纤维和成骨细胞中的表达

第三节

tPA突变体基因的克隆及其在CHO细胞中